Kledet agar

Corynebacterium Stratum på CLED AGAR. Kilde: Nathan Reading fra Halesowen, Storbritannia, CC av 2.0, Wikimedia Commons

Hva er CLED AGAR?

Han Kledet agar (Cistine-Lactose-Electrolytes-Defficient) er en differensiell solid kultur betyr, brukt for diagnose av urinveisinfeksjoner. Sammensetningen av kulturmediet er designet for god vekst av urinpatogener og er ideell for kvantifisering av kolonformende enheter (UFC).

CLED -kulturmediet er ikke -selektivt, siden gram -negativ og gram -positive mikroorganismer kan vokse i det. Men dette er ikke et problem, fordi de fleste urininfeksjoner er forårsaket av en enkelt type mikroorganisme.

I tilfelle av polymikrobielle infeksjoner, kan 2 eller 3 forskjellige bakterier oppnås, men det er veldig sjelden, og mesteparten av tiden er de forurensede prøver.

Blant de gramnegative bakteriene som kan vokse i dette mediet, er bacilliene som tilhører Enterobacteriaceae -familien og andre enteriske baciller, og er de hyppigst isolerte uroopatogener i urinprøver følgende: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella Morganii, Pseudomonas aeruginosa, blant andre.

Også blant de gram -positive bakteriene som kan vokse i dette mediet er Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophytic, enterococcus faecalis, streptococcus agalactiae, chorynebacterium sp, lactobacillus sp Og de kan til og med dyrke gjær, for eksempel kompleks Candida albicans.

På grunn av miljøets kjemiske sammensetning tillater det imidlertid ikke veksten av noen krevende geniturinære patogener, for eksempel Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella Vaginalis, blant andre.

Grunnlaget for kledet agar

CLED -kulturmediet har som en kilde til energiekstrakt av kjøtt, hydrolysert kasein og hydrolysert gelatin hydrolyz. De gir næringsstoffer for utvikling av lite krevende bakterier.

Den inneholder også cystin, en aminosyre som tillater vekst av koliformer, skilles med dens lille størrelse.

Kan tjene deg: virulensfaktorer

Den inneholder også som en gjærbar karbohydratlaktose, så dette mediet er differensial, og kan skille de gjærende bakteriene til laktose -ikke -fermentering.

Fermenterende bakterier vender medium pH ved syreproduksjon, utvikler gule kolonier, mens ikke -fermenterende bakterier ikke genererer endringer i mediet, derfor tar de fargelegging av den originale agaren, grønn farge.

Fermenteringsreaksjonen blir avslørt takket være tilstedeværelsen av pH -indikatoren, som i dette mediet er bromotimolblått.

På den annen side hemmer den lave konsentrasjonen av middels elektrolytter den typiske invasive veksten av slekten Proteus, kalt Swarming Effect. Dette gir en fordel med hensyn til andre medier, siden det tillater telling av UFC, inkludert hvis kjønn er til stede Proteus.

Imidlertid hemmer den lave elektrolyttkonsentrasjonen veksten av noen arter av slekten Shigella, Dette er en ulempe med hensyn til andre medier.

Foundation of the Cled Agar (Bevis)

Det er en variant eller modifisering av dette mediet, laget av Bevis, som innlemmet den opprinnelige acid Fuchsin -sammensetningen (Andrade). Det samme virker sammen med Bromotimol Blue for å skille de gjærende bakteriene fra ikke -fermentering.

Forskjellen mellom det konvensjonelle og det modifiserte miljøet er fargen som koloniene adopterer. Når det.

applikasjoner

CLED AGAR brukes utelukkende For urinprøver prøver. Bruken av dette mediet er spesielt hyppig i europeiske laboratorier, mens det i Amerika er mindre brukt.

Kan tjene deg: amensalisme: egenskaper, eksempler, forskjeller med spisestue

Innsamlingen av prøven må oppfylle visse parametere for å oppnå pålitelige resultater, inkludert:

Ikke ta antibiotika før du tar prøve.

Ta helst ta urinen fra den første timen om morgenen, siden den er mer konsentrert, når det ikke er mulig å ta prøve ved invasive metoder.

Vask kjønnsorganene i god tid før du tar prøven.

Kast den første vannlatingsstrålet og plasser deretter beholderen.

Samle mellom 25 til 30 ml av urinen i en godt merket steril beholder.

Ta umiddelbart laboratoriet omgitt på isen.

Det må behandles før 2 timer utstedt eller nedkjøles ved 4 ° C i maksimalt 24 timer.

Urinprøver

Urinprøven må fortynnes 1:50.

For fortynning, colloqar 0,5 ml pasient urin og fortynnet med 24,5 ml steril fysiologisk løsning. Mål 0,1 ml av urinen fortynnet og så på overflaten med Drigalski -slikkepott på kledet medium.

Dette er den angitte sådd metoden for å telle kolonier. Det er grunnen til at det brukes i urinprøver, siden resultatene må uttrykkes i UFC/ml.

For kvantifisering av oppnådde kolonier, fortsett som følger: Tell koloniene på platen og multipliser med 10 og deretter med 50. Dette er mengden UFC/ml urin.

Tolkning

Enheter over 100.000 ufc/ml -indika urininfeksjon.

Oppstår under 1000 UFC/ml- Det er ingen infeksjon.

Mellom 1000-10.000 UFC/ml -Dudoso, mulig forurensning, gjenta prøve.

Id

Et gram skal gjøres til koloniene dyrket i kledet.

Kan tjene deg: katalase: egenskaper, struktur, funksjoner, patologier

For eksempel, hvis det er en gram -negativ bacillus, vil den bli sådd på en MacConkey -agar, der gjæring eller ikke av laktose er bekreftet. I tillegg er en næringsrik agar festet for å utføre oksidasetesten.

I tilfelle Gram avslører Gram -positive kokosnøtter, kan det bli utsatt for salt mannitolagar og næringsrik agar. I sistnevnte utføres katalasetesten. Til slutt, hvis gjær blir observert, vil det bli sådd på en sabouraud agar.

Mange laboratorier ignorerer bruken av mediet fast og foretrekker bare å bruke blod, macconkey og næringsrik agar for å så urinprøver.

Forberedelse

I en Felola med en liter destillert vann, oppløs 36,2 GR av fast pulveragar. Etter 5 minutters hvile, varm den resuserte agaren, og blandes konstant til den koker i 1 minutt.

Steriliser deretter ved 121 ° C i 15 minutter i autoklaven. Fullført tid, trekke seg fra autoklaven og la avkjøle til en temperatur på 45 ° C er nådd. Deretter serveres det mellom 15-20 ml på hver steril petrisk.

Platene som serveres prosedyre, må utføres inne i en laminær strømningsklokke eller foran Bunsens lighter, for å unngå forurensning.

De serverte platene har lov til å stivne, bestille i en omvendt form og lagret i et kjøleskap (2-8 ° C) til bruk.

Den endelige pH for det fremstilte mediet må være på 7,3 ± 0,2.

Referanser

1. Anbefalinger for mikrobiologisk diagnose av urininfeksjon. Chil. Infectol. Gjenopprettet fra Scielo.org.
2. Halvt kledet. Gjenopprettet fra Britanialab.com.