Müeller Hinton Agar hva er, grunnlag, forberedelse, bruker

Han Müeller Hinton Agar Det er et fast, ikke -selektivt ernæringsmedium, som er sammensatt av kjøttinfusjon, peptonsyre av kasein, stivelse, grep og destillert vann. Dette mediet tillater utmerket mikrobiell utvikling av mest raske vekstbakterier.

Det ble opprinnelig opprettet av John Howard Müeller og Jane Hinton for å isolere krevende bakterier fra ernæringsmessig synspunkt, for eksempel Neisseria gonorrhoeae og Neisseria meningitidis. På grunn av dens egenskaper viste det seg å være ideell for studiet av mottakelighet for antibiotika, noe som gir pålitelige og reproduserbare resultater.

Derfor er Müeller Hinton Agar kulturmediet som er akseptert av Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) og European Committee on Antimicrobial Sementability Testing, for utførelse av den antimikrobielle følsomhetstesten ved Kirby -formidlingsmetoden og Bauer.

Basis

Fordi det er et ikke -selektivt ernæringsmedium, er det utmerket for veksten av de fleste patogene bakterier.

På den annen side får den enkle sammensetningen at stoffer enkelt sprer seg over den, og er et essensielt kjennetegn for mottakelighetstesten med diskforstillingsmetoden.

En annen av dens egenskaper er at den inneholder lavt antall hemmere, som lar sulfonamid, trimetoprim og tetracykliner effektivt evaluere.

Det må imidlertid huskes at mediet må oppfylle visse betingelser for å garantere dets riktige funksjon, inkludert:

PH -passformen, dybden på agaren og riktig konsentrasjon av Timina, Timidina, CA⁺⁺, Mg⁺⁺ og Zn⁺⁺.

Du må også vite at metodikken er standardisert og derfor alle parametere, for eksempel:

Konsentrasjonen av inokulum, konsentrasjon og bevaring av antibiotikasplater, plassering av riktig antall plater på agaren, avstanden mellom den ene skiven og den andre, den strategiske plasseringen av visse antibiotika, atmosfæren, temperaturen og tiden av inkubasjon.

Forberedelse

Vei 37 gr av medium Müeller Hinton dehydrert og oppløs i 1 liter destillert vann. Varm miljøet mens du rører for å hjelpe oppløsningen din. Kok i 1 minutt.

Ta med Autoclave for å sterilisere ved 121 ° C i 15 minutter. Når du fjerner fra autoklaven, må Fixola plasseres på et bad fra María til 50 ° C for å avkjøle. Hell 25 til 30 ml i sterile plater på 10 cm diameter.

Platene skal sitte igjen med en gjennomsnittlig tykkelse på 4 mm (ideell), et 3-5 mm rekkevidde er tillatt.

Hvis du vil tilberede blod ved hjelp av Müeller Hinton, helles 5% sterilt lamblod som base.

Kan tjene deg: glyseraldehyd 3-fosfat (G3P): struktur, funksjoner

Den endelige pH i mediet må være mellom 7,2 og 7,4.

Invester og spar i kjøleskap, til bruk. La platen ta omgivelsestemperatur før du bruker.

Fargen på det forberedte mediet er lys beige.

applikasjoner

Det brukes til å utføre antibiogrammet eller mottakelighetstesten for antibiotika for mest raske vekstpatogener.

Hvis agaren er supplert med blod, tjener til å utføre antibiogrammet av krevende mikroorganismer som: Streptococcus pneumoniae, Haemophilus SP, Neisseria meningitidis, blant andre. Det har også blitt brukt til å isolere Legionel pneumophila.

Antibiogramteknikk

Før du utfører antibiogrammet, må en bakteriell løsning som tilsvarer 1,5 x 10 utarbeides⁸ Celler.

For å gjøre dette blir 3 til 4 kolonier av ren avling tatt og suspendert i en triptyk soyabuljong eller i Müeller Hinton -buljongen, inkuberer i 2 til 6 timer og konsentrasjonen med en steril saltoppløsning justeres, og sammenligner det med et Mac Farland -mønster på 0,5%.

Hvis de krever mikroorganismer, kan kolonier suspenderes direkte til 0,5% Mac Farland -konsentrasjonen. Deretter blir Müeller Hinton -platen sådd med en vattpinne impregnert med den bakterieoppløsningen fremstilt.

For å gjøre dette blir vattpinnen nedsenket i løsningen, og deretter fjernes overflødig væske ved trykk mot rørveggene. Umiddelbart etter at vattpinnen passerer gjennom hele overflaten, uten å forlate uten å berøre, blir platen svakt litt og så igjen. Operasjonen gjentas 2 ganger mer.

La stå i 10 minutter og plasser deretter antibiotikeskivene med en steril klemme, og etterlater et rom på 24 mm mellom den ene og den andre. Etter å ha plassert hvert album på agaren, trykk hver og en med klemmen for å sikre at de er godt festet.

Etter prosessen investeres platen og 35-37 ° C blir inkubert i aerobiose i 16 til 18 timer. Hvis det er en krevende mikroorganisme, kan den fortjene mikroaerofili, og hvis antibiogrammet inneholder oksacillinskiver, bør det leses på 24 timer.

For å måle diameteren til hver glorie brukes en regel. Resultatene må registreres i MM. Deretter er verdiene oppnådd med tabellene med kuttpunkter publisert av den nåværende CLSI -manualen korrelert.

Rapporter som følsomme (er), mellomliggende (i) eller resistent (r), som tilfellet kan være.

Antibiotika er valgt i henhold til den isolerte mikroorganismen og infeksjonstypen som produserer.

Kan tjene deg: nivåer av organisering av levende vesener

Noen ganger må den strategiske plasseringen av antibiotika huskes for å vise fenotypiske motstandsmønstre.

Strategisk plassering av plater på Müeller Hinton Agar

For enterobakterier må den clavulansyre -disken plasseres foran 3. og 4. generasjon cephalosporins. Et eggformet utvidelse indikerer at belastningen er en produsent av utvidet spektrum beta -laktamaser (BLEE). Dette betyr at pasienten ikke skal behandles med noen cephalosporin.

I Staphylococcus er det viktig.

En gloriebestandig i erytromycin og en flathet i clindamycin glorie indikerer at stammen har en inducerbar motstand mot clindamycin, belastning (RIC). Dette betyr at en clindamycinbehandling ikke vil være effektiv.

For søket etter AMP C -stammer som er inducerbare i enterobakterier og noen ikke -fermenterende gram negative bacilli, ceftazidime, cefoxitin eller piperacilin plate.

En halo brunet på en av platene som vender mot imipenem indikerer tilstedeværelsen av inducerbar forsterker C.

For søket etter konstitutiv AMP C, en kloakk på 500 ug med cloxacillin -plate. En helbredende bredde i en av cephalosporins indikerer positivitet.

Du kan også bytte ut cloxacillin -platen med en 9 mm av Whatman -filterpapir nr. 6 impregnert med borsyre (400 ug) med en avstand på 18 mm. Det tolkes lik den forrige.

Til slutt, for å undersøke produksjonen av metalobetalaktamaser spesielt i Pseudomonas aeruginosa, En disk impregnert med 10 ul etylendiaminteraeddiksyre (EDTA 750 ug) og tioglykolsyre (SMA 300 ug) brukes, som står overfor imipenem og meropenem -plater, i en avstand på 15 mm.

Testen er positiv hvis det er utvidelse av imipenem eller meropenem -haloer mot EDTA/SMA -albumet. Dette resultatet må bekreftes av den modifiserte Hodge -testen.

Denne metoden består i å inokulere en stamme av Escherichia coli ATCC 25922 på Müeller Hinton -platen. En imipenem -plate i midten av platen plasseres, og deretter blir en stro av platen laget til periferien med belastningen av P. Aeruginosa mistenkelig. Du kan prøve opptil 4 stammer per plate.

Testen vil være positiv hvis det er en forvrengningssone av imipenem glorie rundt Stro.

Det kan tjene deg: Neolamarckismo: Bakgrunn og egenskaper

Årsaker til feilaktige resultater

-Dårlig bevarte antibiotiske plater kan produsere falsk motstand. For eksempel er oksacillinskiven veldig sårbar for temperaturendringer.

-En pH i mediet under den indikerte (syre) produserer mindre glorier i aminoglykosider og makrolider (risiko for falsk motstand), og større glorie i penicillin, tetracyklin og novobiocin (risiko for falsk følsomhet).

-Hvis pH er over den angitte (alkaliske), er effektene beskrevet ovenfor investert.

-Media med høye tymin- og tymidinkonsentrasjoner påvirker betydelig reduksjon av sulfonamid og trimetoprim hemming Hals.

-Høye konsentrasjoner av kalsium og magnesium gir falsk motstand av aminoglykosider, polymixin B og tetracykliner foran stammer av Pseudomonas aeruginosa.

-Lave konsentrasjoner av kalsium og magnesium gir falske følsomheter av aminoglykosider, polyxin B og tetracykliner foran stammer av Pseudomonas aeruginosa.

-Tilstedeværelsen av sink påvirker resultatene av karbapenemskiver (imipenem, meropenem og ertapenem).

-Tykkelsen på mediet under 3 mm gir resultater av falsk følsomhet, mens en tykkelse over 5 vil gi falsk motstand.

-Mobilisering av plater i antibiogrammet vil gi deformerte glorier, siden utskrivningen av antibiotika er øyeblikkelig.

- Svært svake inokularer påvirker resultatene, da det ikke vil være noen uniform eller konvergerende vekst i agaren, en nødvendig tilstand for å måle hemming av gloro, i tillegg til gloriene kan gi større enn normalt.

-Inoculos for lastet kan gi mindre enn normale Hals.

-Ikke respekter avstanden mellom plater gjør en glorie overlapp med en annen og kan ikke leses riktig.

-Inkuber med co₂ Øker glorie av tetracyklin og meticillin -plater.

-Inkuber ved temperaturer under 35 ° C produserer større haloer.

-Blodaggregatet reduserer størrelsen på sulfamid -glorie.

Begrensning

Følsomheten til et antibiotikum demonstrert i antibiogrammet mot en mikroorganisme (In vitro) Det er ikke en garanti for at det vil fungere In vivo.

QA

For å vite om mediet inneholder riktig mengde Timina, må en belastning sådd av enterococcus faecalis ATCC 29212 og bevise mottakeligheten for trimetoprim sulfametoxazol (SXT), den må gi en lik glorie eller> 20 mm for å være tilfredsstillende.

Referanser

1. Cona e. Betingelser for en god mottakelighetsstudie ved hjelp av formidlingstest. Rev Chil Infect, 2002; 19 (2): 77-81
2. Britania Laboratories. Müeller Hinton Agar. Tilgjengelig på: Britanialab.com