Sabouraud agar hva er, grunnlag, forberedelse, bruker

Han Sabouraud Agar, Også kjent som Sabouraud Dextrose Agar, det er et solid kulturmedium, spesielt beriket for isolering og utvikling av sopp, for eksempel gjær, muggsopp og dermatofytter.

Derfor kan dette mediet ikke mangle i et mikrobiologilaboratorium for å undersøke tilstedeværelsen av patogene eller opportunistiske sopp, enten det er av kliniske eller ikke -kliniske prøver. Det er også ideelt for vekst av filamentøse bakterier som streptom og nocardias. Bruken er veldig bred, fordi den kan brukes i mennesker, dyr, grønnsaker og industriell mykologi.

TIL. Sabouraud agar uten så. B. Sabouraud agar plantet med gjær. Kilde: Bilder tatt av forfatter MSc. Marielsa Gil

Dette mediet ble opprettet i 1896 av den fremragende hudlegen Raimond Sabouraud, som ble spesialist anerkjent over hele verden i hodebunnen, hovedsakelig forårsaket av dermatofytter.

Opprettelsen var så viktig at den har blitt brukt siden den gang og opprettholdes i dag, selv om det med noen endringer.

Selv om det er spesielt for sopp, kan i denne middels bakterier vokse, er det nødvendig for prøver med blandet flora.

Valget av antibiotika må utføres nøye og ta hensyn til hvilken type sopp som skal gjenvinnes, siden noen blir hemmet i nærvær av visse stoffer.

Basis

Sabouraud Dextrose Agar er et middel som i sin opprinnelige formulering er svakt selektiv, på grunn av dens 5 syre -pH.6 ± 0.2 Imidlertid kan bakterier utvikles, hovedsakelig i langvarige inkubasjoner.

Mediet inneholder pankreas caseine og den svake vevspepton av dyrevev, som gir kilden til karbon og nitrogen for utvikling av mikroorganismer.

Den inneholder også høy glukosekonsentrasjon, som fungerer som en energikilde som favoriserer veksten av sopp over bakterier. Alt dette blandet med agar -agar, komponent som gir deg riktig konsistens.

På den annen side kan Sabouraud Dextrose Agar være selektiv hvis antibiotika tilsettes.

Med antibiotika er det spesielt nyttig i sårprøver, åpne magesår eller en hvilken som helst prøve der det er mistenkt stor bakteriell forurensning.

De fleste brukte kombinasjoner av Sabouraud Dextrose med antibiotika

-Sabouraud Agar med kloramfenikol: Ideell for å gjenopprette gjær og filamentøs sopp.

-Sabouraud agar med gentamycin og kloramfenikol: nesten alle filamentøse sopp og gjær vokser i dette mediet, og hemmer et stort antall bakterier, inkludert enterobakterier, Pseudomonas og Staphylococcus.

-Sabouraud Agar med cycloheximide: Det er spesielt nyttig for prøver fra hud eller luftveier, så lenge mistanken er av dimorf sopp.

Sykloheksimid bør brukes med forsiktighet; Selv om det brukes til å hemme veksten av ikke -patogene eller miljøsopp og gjær som kan være til stede som miljøgifter i en prøve, hemmer det også veksten av noen sopp som for eksempel som for eksempel som for eksempel slik som Cryptococcus neoformans,  Aspergillus fumigatus, Boydii Allescheria, Penicillium sp og Andre opportunistiske sopp.

-Sabouraud agar med kloramfenicol pluss cycloheximide: det brukes hovedsakelig til å isolere dermatofytter og dimorf sopp. Har ulempen som hemmer noen arter av opportunistiske sopp som som Candida ingen albicans, Aspergillus, Zigomicetos eller C. Neoformans.

-Sabouraud agar med kloramfenikol, streptomycin, penicillin G og cykloheksimid: det er ideelt for ekstremt forurensede prøver med bakterier og saprofyt sopp, men det har ulempen med å hemme veksten av Actinomyces og Nocardias, I tillegg til den opportunistiske soppen som er nevnt ovenfor.

Kan tjene deg: hominiseringsprosess: Kjennetegn og faser

Forberedelse

Hvis de har separate ingredienser, kan det tilberedes som følger:

Sabouraud Dextrose 

Veie:

- 40 gr dextrose

- 10 gr pepton

- 15 gr av agar -agar

- Mål 1000 ml destillert vann

Alle ingrediensene er blandet, pH justeres til 5.6. Oppløsningene blir oppløst ved å koke, 20 ml av mediet er fordelt i 25 x 150 mm rør, uten å holde og med bomullslokk, fortrinnsvis.

Rør med bomullslokk. Kilde: Foto tatt av MSc -forfatteren. Marielsa Gil

Andre rørtiltak kan også brukes, i henhold til tilgjengeligheten.

De tar autoklaven i 10 minutter til en atmosfære av trykk (121 ° C). Det skal ikke overskrides i den autoklaverte tiden. Når du forlater autoklaven, er rørene tilbøyelig til hjelp av en støtte til de stivner i en fløytopp.

En annen måte er å løse opp ingrediensene ved å varme til det koker. I den samme autoklaviske Felola i 10 minutter og distribuer deretter 20 ml i petriskall.

Hvis et Sabouraud Dextrose -medium er tilgjengelig som allerede inneholder alle ingrediensene, er mengden som er spesifisert av det kommersielle huset for en liter vann spesifisert. Resten av trinnene er lik de som er beskrevet ovenfor.

Sabouraud Dextrose Agar (Emmons Modification)

Veie:

-  20 gr dextrose

- 10 gr pepton

-  17 gr av agar -agar

-  Mål 1000 ml destillert vann

Alle ingrediensene er blandet, pH justeres til 6.9. Fortsett på samme måte av forrige sak.

Det er kommersielle hus som tilbyr mediet med alle ingrediensene. I dette tilfellet må du veie og forberede måten innsatsen beskriver det på.

Sabouraud Dextrose Agar (Emmons Modification) med kloramfenicol

Chloranfenicol Mother Solution

- Vei 500 mg kloramfenikolbase

- Mål 100 ml 95% etanol

- Mingle

Sabouraud dextrose Medium (Emmons) er fremstilt som allerede beskrevet og i tillegg for hver liter tilsetning av 10 ml kloranfenikol -morsløsning før autoklavic.

Sabouraud Emmons med cycloheximide dekstrose

Cycloheximide Mother Solution

- Veie 5 gr cykloheksimid

- Mål 100 ml aceton

- Mingle

Sabouraud Dextrose Apoure.

Sabouraud Dextrose Agar (Emmons) med kloramfenikol og sykloheksimid

Sabouraud dextrose -mediet (Emmons) er fremstilt som allerede beskrevet og i tillegg for hver liter tilsetning av 10 ml kloranfenikol -morsoppløsning og 10 ml cycloheximide mors oppløsning før autoklavert.

Kan tjene deg: vitenskaper som er relatert til biologi

Andre antibiotika som kan legges til

tjue.000 til 60.000 penicillinenheter per liter medium.

30 mg streptomycin per liter medium.

Begge må innarbeides etter mediet, litt avkjølt (50-55 ° C).

0,04 g neomycin per liter medium.

0.04 g gentamicin per liter medium.

Spesielle hensyn

Sikkerhet er å foretrekke fremfor Sow Sabouraud Dextrose Agar i kile -formede rør (skråstilt i en fløytetopp) i stedet for i petriskall, for å unngå spredning og innånding av sporer.

Det er viktig at rørene med sabouraudalder er dekket med bomull og ikke med et trådlokk, siden det er vist at semi -aerobe forhold hemmer dannelsen av sporøse i noen stammer, for eksempel på for eksempel Coccidioides immitis. I tillegg er de fleste sopp aerober.

I tilfelle å bruke et trådlokk, ikke tett lukket.

QA

De forberedte mediene bør gjøres kvalitetskontroll for å bekrefte riktig funksjon. For dette blir visse stammer sådd.

For Sabouraud Dextrose Candida albicans, som må ha utmerket vekst. En annen plate er inokulert med stammer Fra Escherichia coli, må hemmes fullstendig.

En plakett uten inokulering blir også inkubert der ingen mikroorganisme skal vokse.

For Sabouraud dekstrose agar med kloramfenikol og cycloheksimid  Trichophyton mentagrophytes, må utvikle seg godt. En annen plate er inokulert med en belastning av Aspergillus Flavus, der det må være knapp vekst eller ikke -vekst. I tillegg blir en uncculating plakett inkubert for å demonstrere sin sterilitet.

For sabouraud dextrose med cycloheksimid, stammer av Candida albicans, Trichophyton Rubrum  enten Canis Microsporum, som må demonstrere god vekst.

På samme måte en belastning av Aspergillus Flavus, demonstrere knapp vekst eller ikke -vekst. Endelig inkuber en plate uten å inokulere for sterilitetskontroll.

applikasjoner

Primærdyrking

Klassisk Sabouraud Dextrose Agar inneholder 4 GR av Dextrose og er utmerket som et primært isolasjonsmiddel, da den viser den karakteristiske morfologien til hver sopp.

Det er også utmerket for å demonstrere pigmenterproduksjon. Det er imidlertid ikke det mest passende middelet å observere sporulering.

Det anbefales heller ikke å dyrke Blastomyces dermatitidis, som blir hemmet av den høye konsentrasjonen av nåværende glukose.

På den annen side må visse hensyn huskes.

Noen sopp utvikler seg bedre ved romtemperatur, for eksempel muggsopp, andre utvikler seg med 37 ° C, for eksempel noen gjær, og andre kan utvikle seg ved begge temperaturer (dimorf sopp).

Derfor er det noen ganger nødvendig.

For eksempel, Sporothrix Schenckii Det blir sådd på to plater; Den ene er inkuba ved romtemperatur for å oppnå formfasen, og den andre inkuberes ved 37 ° C for å oppnå den oppaduriform fasen, men i sistnevnte er det nødvendig å legge til 5% blod til miljøet.

Det kan tjene deg: oksidase glukose: egenskaper, struktur, funksjoner

I andre tilfeller, som i mythom -prøver, blir to sabouraud agarplater sådd, en med kloramfenikol og en annen med cykloheksimid. Den første vil tillate vekst av årsaksmidler med mytoma av mytisk opprinnelse (eumicetom) og de andre årsaksmidlene til micetomer av bakteriell opprinnelse, for eksempel aktinomicetomer.

Sporulering

Sabouraud dextrose agar modifisert av Emmons inneholder 2 gr dextrose og tjener ikke bare til isolasjon, men også for sporulering og bevaring av sopp.

I dette mediet hvis du kan gjenopprette stammer fra Blastomyces dermatitidis.

Bevaring

For å bevare soppavlinger kan de lagres i kjøleskap (2-8 ° C). Bevaringstid kan variere mellom 2 til 8 uker. Etter denne tiden må de være subjektive for å gjenta prosessen.

Noen sopp forblir bedre på romtemperatur, for eksempel Epidermophyton Foccosum, Trichophyton Schoenleinnii, T. Violaceum og Micsporum AudoUnii.

Opprettholdelsen av belastningen kan utvides for å unngå pleomorfisme hvis agarens dekstrose er fullstendig eliminert og hvis mengden agar til miljøet reduseres for å unngå tørrhet.

Mikrokulturer

For identifisering av noen filamentøse sopp er det nødvendig å utføre mikrokulturer ved bruk av Sabouraud Agar eller andre spesielle midler for å observere seksuelle og aseksuelle reproduksjonsstrukturer.

I menneskelig mykologi

Det brukes hovedsakelig til diagnose av soppsykdommer, spesielt de som påvirker huden og dens vedlegg (hår og negler).

Prøver kan være sekreter, ekssudater, hud, hår, negler, sputum, LC eller urin. Vanlige isolerte patogener er dermatofytter, sopp forårsaker subkutan og systemisk mykose.

Animal Mycology

Dyr påvirkes ofte av soppinfeksjoner, derfor er sabouraud agar like nyttig i dyremykologi som i mennesker.

For eksempel kan dermatofytter påvirke dyr. Slik er tilfellet av Canis var distortum mikrosporum, Det infiserer ofte hunder, katter, hester, griser og aper. I tillegg, Micsporum Gypseum infiserer hunder, katter og storfe.

Fugler som kyllinger, haner og kyllinger påvirkes av Micsporum Gallinae.

Andre sopp, for eksempel Zymonema farciminosum, De er også årsak til sykdom hos dyr, hovedsakelig hos hester, muldyr og esler, og produserer en viktig betennelse i lymfatiske kar.

Sporothrix Schenkii og histoplasma capsulatum De påvirker husdyr og menneskelige dyr.

Miljømykologi

Mange patogene eller opportunistiske sopp kan konsentrere seg på et gitt tidspunkt i et gitt miljø, spesielt i operasjonsrom og intensivavdelinger (ICU) av klinikker og sykehus. Derfor er det nødvendig å kontrollere det samme.

Andre utsatte rom er gamle biblioteker og bygninger, som kan påvirkes av konsentrasjonen av miljøsopp.

I miljøstudier brukes Sabouraud Dextrose Agar for soppisolasjon.

Industriell mykologi

Sabouraud Dextrose Agar kan ikke mangle for studiet av forurensende sopp i produksjonen av kosmetikk, mat, drikke, lær, tekstiler, blant andre.

Plante mykologi

Planter lider også av soppsykdommer, som påvirker forskjellige deler av anlegget, som til og med kan avslutte høsten, og forårsake store tap i landbruket.

Referanser

1. Valtek Laboratory. (2009). Sabouraud dextrose agar med cycloheximida. Tilgjengelig på: Andinamedica.com.
2. Navarro eller. (2013). Veterinærmykologi. Nasjonalt agrarisk universitet. Nicaragua.