Blodagar

En blodtilnærming. Med lisens

Hva er blodagar?

Han Blodagar Det er et beriket fast kulturmedium, brukt for utvinning og vekst av et bredt utvalg av mikroorganismer fra kliniske eller subjektive prøver.

Dette kulturmediet er i utgangspunktet sammensatt av en beriket baseagar og 5% saueblod. Agarbasen kan variere i henhold til behovene, men vil hovedsakelig være sammensatt av Peptonas, aminosyrer, vitaminer, kjøttekstrakt, natriumklorid, agar, blant andre. Når det gjelder blodet, brukes menneskelig blod noen ganger.

Blodinnsamlingen kan utarbeides i laboratoriet eller kan allerede kjøpes, fra selskaper som er dedikert til det. Forberedelsen av dette mediet er veldig delikat, enhver uforsiktighet i utdypet vil føre til et forurenset parti.

Derfor må alle mulige forholdsregler tas og til slutt utføre en kvalitetskontroll som inkuberer 37 ° C 1 plate per 100 som er utarbeidet.

Basis

Staphylococcus aureus dyrket i blodagar. Kilde: Nathan Reading on Flickr Nathan R. På Twitter, Wikimedia Commons

Blood Agar er et beriket, differensial og ikke -selektivt medium. 

• Det er et beriket medium fordi det bærer som et hovedtilsetningsstoff 5-10% blod på en agarbase. Begge forbindelsene inneholder mange næringsstoffer som lar de fleste dyrkbare bakterier vokse i den.
• At veksten skjer uten begrensning, så den er ikke -selektiv. Imidlertid, hvis forbindelser blir lagt til som forhindrer vekst av noen mikroorganismer og favoriserer andres, blir det selektivt. For eksempel, hvis visse typer antibiotika eller soppdrepende blir lagt til.
• Det er differensial, siden det tillater å skille ut 3 typer bakterier: beta-hemolytisk, alfa-hemolitisk og gamma-hemolytisk.
• Beta-hemolytic er de som har muligheten til å lisar eller fullføre. Eksempler på ß-hemolytiske bakterier er Streptococcus pyogenes og Streptococcus agalactiae.
• Alfa-hemolytisk er de som utfører delvis hemolyse, der hemoglobin oksideres til metemoglobin, og genererer en grønnaktig farge rundt koloniene. Dette fenomenet er kjent som a- eller a-hemolyse hemolyse, og bakterier er klassifisert som a-hemolytisk. Eksempel på α-hemolytiske bakterier er Streptococcus pneumoniae og Streptococcus av gruppen Viridans.
• Gamma-hemolytiske eller ikke-hemolytiske bakterier vokser over agar uten å generere endringer i den, en effekt kjent som y-hemolyse, og mikroorganisme er y-hemolitisk. Eksempel på y-hemolytiske bakterier: noen stammer av Streptococcus av gruppe D (Streptococcus bovis og enterococcus faecalis).

applikasjoner

• Dette kulturmediet er et av de mest brukte i mikrobiologilaboratoriet. Blant mikroorganismer som er i stand til å vokse i dette mediet, er: strenge, valgfrie, mikroaerofile, anaerobe, gram -positive eller gram -negative bakterier, raske vekstbakterier eller langsom vekst eller langsom vekst.
• Noen krevende eller irriterende bakterier vokser også fra ernæringsmessig synspunkt, så vel som sopp og gjær. Det er nyttig for subjektive eller reaktiverende stammer som er metabolsk veldig svake.

Kan tjene deg: cyclopentanoperhydropenantreno: struktur og betydning

Valget av blod- og basebyrå vil imidlertid variere avhengig av mikroorganismen som sannsynligvis vil komme seg og bruken som vil bli gitt til platen (dyrking eller antibiogram).

Valg av blodtype

Blod kan være av lam, kanin, hest eller menneske.

Det mest anbefalte er lamblod, bortsett fra noen unntak. For eksempel å isolere arter av Haemophilus, Hvor anbefalt blod er hest eller kanin, siden lamblod har enzymer som hemmer faktor V.

Det minst anbefalte er mennesket, selv om det er det mest brukte, kanskje fordi det er det enkleste å oppnå. 

Blod må defibrineres, oppnås uten tilsetningsstoff og fra friske dyr. For bruk av menneskelig blod, må flere faktorer huskes:

• Hvis blod kommer fra individer som har fått bakterieinfeksjoner, vil de ha spesifikke antistoffer. Under disse forholdene er det sannsynlig at veksten av noen bakterier vil bli hemmet.
• Hvis det er hentet fra blodbanken, inneholder den sitrat og det er mulig at visse bakterier ikke utvikler seg i sin nærvær.
• Hvis blod kommer fra pasienter som tar antibiotika, kan veksten av mottagelige bakterier bli hemmet.
• Og hvis blod er fra en diabetisk person, forstyrrer overflødig glukose de riktig utviklende hemolysemønstrene.

Valg av basisrate

Baseagar brukt til blodagarforberedelse kan være veldig bredt. Blant dem er: Nutrient Agar, Cerebro Heart Infusion, Triptych soyabønner, Müeller Hinton, Thayer Martin, Columbia Agar, Brucella Agar, Campylobacter Agar, etc.

Bruk av blodagar i henhold til basemediet som brukes til tilberedning

Næringsagar

Denne basen er den minst brukte, fordi de hovedsakelig vil vokse ikke -avstemende bakterier, for eksempel enteriske baciller, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, blant andre. Det anbefales ikke å isolere Streptococcus.

Cerebro Heart Infusion (BHI)

Det er en av de mest brukte som base, fordi den har de nødvendige næringsstoffene for veksten av de fleste bakterier, inkludert Streptococcus sp og andre krevende bakterier. Selv om det ikke er aktuelt å observere hemolysemønstre.

Med denne basen brukes blod av lam.

Du kan også tilberede blodagarvarianter, der andre forbindelser tilsettes for å isolere visse mikroorganismer. For eksempel serverer infusjonen cerebro hjerte supplert med kaninblod, cystin og glukose, tjener til å isolere Francisella tularensis.

Mens, med Cistina Telurito, er det nyttig å isolere Corynebacterium difteriae. Menneskelig eller lamblod kan brukes.

Kan tjene deg: Biotisk potensial

Med den første vil beta-trimolyse bli sett på som en smal glorie, mens Halo med den andre vil være mye bredere.

Denne basen, sammen med bacitracin, maisstivelse, hesteblod og andre berikelsestilskudd (isovalex), brukes til kjønnsisolasjon Haemophilus sp Fra luftveisprøver.

Hvis kombinasjonen av kloramfenikol-gentamycin eller penicillin-stuffyin-antibiotika med hesteblod tilsettes, tjener det til å isolere krevende patogen sopp, selv med en høyere ytelse til Sabouraud glukoseagar. Spesielt er nyttig isolert Histoplasma capsulatum.

Triptyse soya agar

Denne basen er den mest anbefalte for å bedre observere hemolysemønsteret og realiseringen av diagnostiske tester, for eksempel opto -korner og bacitracine skatter. Det er den klassiske blodagaren som brukes av rutine.

Med denne basen kan du også forberede den spesielle blodagaren til Corynebacterium difteriae, Med Telurito Cistina og lamblod.

Kombinasjonen av dette agarblodet, mer kanamycin-vankomycin, er ideell for anaerob vekst, spesielt Bacteroides sp.

Müeller Hinton Agar

Denne blodtilskuddsbasen brukes til å utføre antibiogrammet av krevende mikroorganismer, for eksempel Streptococcus sp. Det er også nyttig å isolere bakterier som som Legionel pneumophila.

Thayer Martin Agar

Dette mediet er ideelt som en base av blodagar når mistanke om slekten Neisseria, spesielt Neisseria meningitidis, gitt at N. gonorrhoeae Den vokser ikke i blodagar. Det tjener også til å utføre følsomhetstester for Neisseria meningitidis.

Columbia Agar

Denne basen er utmerket for såing av prøver av gastriske biopsier på jakt etter Helicobacter pylori.

Mediet forbereder 7% av defibrinert lamblod med antibiotika (vankomycin, trimetoprim, amfotericin B og cefsulodin) for å begrense veksten av andre typer bakterier som kan være til stede.

Denne samme basen supplert med humant eller lamblod, Nalidíxico og Colistinsyre er nyttig for å isolere Gardnerella vaginalis. Det er også ideelt å evaluere antimikrobiell mottakelighet for antibiotika av samme mikroorganisme.

I tillegg tjener det for fremstilling av blodagar for anaerob dyrking, og tilsetter aminoglykosider og vankomycin. Denne basen lar oss observere hemolysemønstre riktig.

Brucella Agar

Dette mediet som brukes som blodbyråbase, sammen med tilsetning av vitamin K, er ideelt for dyrking av anaerobe bakterier. I dette tilfellet anbefales bruk av lamblod.

Kan tjene deg: hudpust: Kjennetegn og eksempler på dyr

Campylobacter Agar

Campylobacter agar supplert med 5% RAM -blod og 5 antibiotika (kefalotin, amfotericin B, trimetoprim Campylobacter Jejuni I avføring prøver.

Forberedelse

Hvert kommersielt hus bringer omvendt av emballasjen indikasjoner på å forberede en liter kulturmedium. De tilsvarende beregningene kan gjøres for å utarbeide ønsket beløp, i henhold til den valgte baseagaren.

Veie og løse opp

Base -agaren er dehydrert (i støv), derfor må den oppløses i destillert vann justert til pH 7.3.

Mengden som er angitt av den valgte baseagaren, blir veid og oppløst i den tilsvarende mengden vann i en fixola, deretter blir den oppvarmet over moderat varme og blandes med roterende bevegelser til hele støvet.

Sterilisere

Når den er oppløst, steriliser i autoklav ved 121 ° C i 20 minutter.

Blodaggregat

Når du forlater autoklaven, vil fiksen bli avkjølt til temperaturen varierer mellom 40 til 50 ° C. Det er en temperatur som støtter menneskelig hud, og samtidig har agaren ennå ikke størknet.

For å gjøre dette blir Fixola berørt med hånden, og hvis varmen er tålelig, er det den ideelle temperaturen å tilsette det tilsvarende defibrinerte blodet (50 ml per liter agar). Bland til homogeniser.

Passasjen av blodsamlingen er avgjørende, for hvis det gjøres når mediet er veldig varmt, vil de røde blodcellene gå i stykker og mediet ikke vil tjene til å observere hemolyse.

Hvis det blir tilsatt for kald.

Hell i Petris plater

Server i sterile petriske plater umiddelbart etter homogenisering av blod. I hver petriske plate helles omtrent 20 ml. Denne prosedyren utføres i en laminær strømningsklokke eller nær lighteren.

På tidspunktet for servering av blod på Petris plater, skal ikke luftbobler være igjen på plakkoverflaten. Hvis dette skjer, blir flammen til Bunsens lighter ført raskt på tallerkenen for å fjerne dem.

Platene har lov til å stivne og lagres i kjøleskap (2-8 ° C) omvendt til bruk. Før du bruker blodagarplater, må de være temperering for å kunne så.

De forberedte platene har en omtrentlig varighet på 1 uke.

Referanser

1. Bayona, m. Mikrobiologiske forhold for dyrking av Helicobacter pylori. Rev. Kål. Gastroenterol. 
2. Forbes, b ,, sahm, d., Weissfeld, a. Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. Pan -American redaksjon S.TIL.