Sjokolade agar

Yersinia pestis -bakterier på en sjokoladeagarplakk. Kilde: Department of Health and Human Services, Wikimedia Commons

Hva er sjokoladeagar?

Han Sjokolade agar Det er et middel for fast, beriket, ikke -selektiv og ikke -differensiell kultur. Det brukes hovedsakelig til isolering av krevende mikroorganismer fra ernæringsmessig synspunkt, selv om enhver type bakterier kan vokse i den.

Det er grunnen til at verktøyet øker spesielt i prøvetakingsprøver som normalt er sterile, for eksempel CSF og leddvæske. Selv om det også er inkludert i media som er valgt for planting av polymikrobielle prøver, men i disse tilfellene er det nødvendig å legge til antibiotika som hemmer den samtidige floraen.

Dette mediet har en karakteristisk brun farge som er veldig lik sjokolade, derav navnet. Forberedelsen er veldig lik den for blodagaren, bare i dette tilfellet må blodet varmes opp slik at de røde blodlegemene går i stykker.

Forberedelsen, som blodagar, er veldig delikat, fordi den er lett forurensbar. Derfor foretrekker mange laboratorier å skaffe dette mediet som allerede er utarbeidet av kommersielle hus som garanterer deres kvalitet.

Basis

Den er sammensatt av en næringsrik agarbase og oppvarmet blod. Hemolyse av røde blodlegemer gir middels faktor X (hemina) og faktor V (NAD), nødvendig for vekst av noen mikroorganismer, for eksempel kjønn Haemophilus. Det er også veldig nyttig å isolere Neisserias sp.

Som blodagar kan forskjellige medier brukes som basebyrå, avhengig av behovet. Blant mediene som brukes er infusjon cerebro hjerte og knusing soyabønner, selv om de mest anbefalte er Columbia Agar, Müeller Hinton, GC Agar og Thayer Martin Agar.

Kan tjene deg: enkel diffusjon: prosess og eksempler

Noen sjokolade -agarvarianter inkluderer et beriket supplement, kommersielt tilgjengelig, kalt isovalex eller polyvitex.

Disse tilskuddene inneholder vitamin B₁₂, L-glutamin, adenin, guaninhydroklorid, p-aminobenzosyre, nikotinamid adenin-dinukleotid (NAD), tiaminpyrofosfat, perric nitrat, tiaminhydroklorid, cysteinhydroklorid, l-cistin og glorid, cysteinhydroklorid, l-cistin og glorid, cysteinhydroklorid, l-cistin og glorid, cysteinhydrosklorid, tiaminhydroklorid, cysteinhydrosklorid, cysteinhydroklorid, cysteinhydroklorid, cysteinhydroklorid, cysteinhydro.

Det er viktig å fremheve at sjokoladeagar er mer beriket enn blodagar, men ikke tillater hemolysemønstre.

applikasjoner

• Sjokolade agar med Columbia Agar: Inneholder pankreas kasein og hjerte, fordøyd kjøttpeptisk, natriumklorid, agar, gjærekstrakt og maisstivelse. I tillegg er den rik på vitaminer, mineraler og essensielle aminosyrer. Denne basen med oppvarmet blod er ideell for å isolere bakterier i sjangeren Neisseria. På den annen side, hvis et supplement blir lagt til Brucella, Den nevnte mikroorganismen kan isoleres. Resultatene forbedres ved hjelp av hesteblod.
• Sjokoladeagar med GC Base Agar (for Gonococci): Inneholder peptoner, maisstivelse, monobasiske og dibasiske buffere, natriumklorid og agar. De fleste av de kommersielt tilberedte sjokoladeutgangspresentasjonene kommer med denne basen og inneholder ikke oppvarmet blod, men en syntetisk blanding av hemina og et kjemisk supplement av vekstfaktorer, vitaminer, mineraler, aminosyrer, faktor V og glukose.
• Sjokolade agar tilberedt med Müeller Hinton Agar: Det brukes til å utføre den antimikrobielle mottakelighetstesten av krevende mikroorganismer, for eksempel Streptococcus pneumoniae, Bruker 5% av oppvarmet RAM -blod. Det tjener også for den primære isolasjonen av Neisseries og Haemophilus, men i det spesielle tilfellet med isolering av Haemophilus Bruken av hesteblod er å foretrekke, for å være rik på faktor X og V. På den annen side, hvis prøven som skal plantes kommer fra et ikke -sterilt område, anbefales tilsetning av antibiotika for å hemme den normale floraen i området. Eksempel: For luftveisprøver der det er mistanke om tilstedeværelse av kjønnsbakterier Haemophilus Bacitracin brukes til å hemme veksten av Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus og Neisseries saprofytter. 
• Sjokolade agar med Thayer Martin Agar: Det er spesielt å isolere Neisseria gonorrhoeae. Den må inneholde antibiotika for å hemme den medfølgende floraen. Lamblod brukes.

Det kan tjene deg: Flora og Fauna av Zacatecas: Mer representative arter

Forberedelse

Indikasjonene for utarbeidelse av baseagaren som skal brukes, må sees. Generelt beskriver de hvor mye du skal veie for å forberede en liter kulturmedium. I laboratoriet kan du utarbeide det nødvendige eksakte beløpet, som kan være mer eller mindre enn en liter.

Beregninger

En regel på tre er laget for å beregne hvor mye du må veie for å utarbeide ønsket volum. Eksempel:

Hvis det i 1 liter er nødvendig å veie 40 gr og laboratoriet krever 800 ml, sies det:

1000 ml -40 gr

800 ml - x

Formelen vil være som følger:

X = 32 gr (mengde til tross for 800 ml).

Veie og løse opp

Det nødvendige beløpet veies og plasseres i en Felola med vannet.

Den varmer over moderat varme og blandes forsiktig med roterende bevegelser til det dehydrerte mediet oppløses helt, og lar det koke i 1 minutt.

Sterilisere

Fixola blir introdusert i autoklaven for å sterilisere mediet ved 121 ° C i 20 minutter.

Blodaggregat

Når du forlater autoklaven, er det lov til å stå til temperaturen på mediet er omtrent mellom 56 og 70 ° C for å plassere blodet og blande til mediet blir brun farge.

Hvis kosttilskudd blir lagt til, er dette på tide å gjøre det. Deretter bland og server 20 ml til hver steril petriskall.

Hele prosedyren må utføres i en laminær flytklokke eller rundt bunsen lettere. La stå til de stivner og sparer på en omvendt måte i et kjøleskap.

En annen måte å tilberede sjokoladeagar uten å bruke blod

Basismediet er fremstilt som beskrevet ovenfor, dehydrert hemoglobin oppnådd kommersielt og sterilisert i autoklaven blir oppløst i autoklaven.

Kan tjene deg: hemoolinfa

Begge løsningene har lov til å avkjøle ved 50 ° C, tillegget er sammen med og tilsatt. Bland inn aseptiske forhold og server deretter i petriske sterile plater.

QA

Det er viktig at blodet er plassert ved den indikerte temperaturen, siden det er idealet å lisar de røde blodlegemene og samtidig opprettholde faktor V, som er termensibelt.

De skal ikke være bobler på overflaten av agaren. Av hver gruppe på 100 plater må en eller to plater inkuberes i ovnen ved 37 ° C i 24 timer for å sjekke steriliteten.

For bedre resultater må sjokoladeagar brukes kort tid etter forberedelsen.

Bakteriestammerkontroller bør tas i laboratoriet for å evaluere effektiviteten av miljøet fersk forberedt for veksten av den viktigste krevende mikroorganismer av klinisk betydning.

Referanser

1. Garcia, p., Vegger, f., Fernández del Barrio, m. Praktisk klinisk mikrobiologi. Cadiz University. UCA Publications Service.
2. Sjokolade agar. Innhentet fra.Wikipedia.org.