Biuret foundation, reagenser, prosedyre, bruker

Han Biuret Det er et reagens som brukes til bestemmelse av langkjede- og kortkjedeproteiner. Det brukes spesielt innen analytisk kjemi og uroanalyse for å undersøke konsentrasjonen av total serum, plasma og urinproteiner.

Proteinverdier kan økes eller reduseres i visse patologier. Hipoproteinemias bilder blir vanligvis presentert hos pasienter med nyresykdom, hos underernært og hos pasienter med kroniske infeksjoner.

Kjemisk struktur av komplekset som er dannet i biuret -reaksjonen positiv biuret -test. Kilde: Yikrazuul [Public Domain]/Flickr

Mens hyperproteinemia observeres i patologier som multippelt myelom, systemisk lupus erythematosus, bakteriell endokarditt, blant annet bakteriell hjernehinnebet.

På den annen side skyldes tilstedeværelsen av proteiner i urinen albuminfiltrering av nyren. Dette er en patologisk atferd som må studeres.

I denne forstand er biuret veldig nyttig, siden den tillater å kvantifisere tilstedeværelsen av serumproteiner, plasma, urin, blant mange andre prøver.

Selv biuret kan brukes til å undersøke tilstedeværelsen og konsentrasjonen av proteiner i ukjente eller ukjente sammensetningsprøver. Derfor er det mye brukt i forskningsområdet.

Biuret -test er basert på å oppdage peptidlenker. Testen er gitt i alkalisk medium. Prøven må inneholde minst to peptidkoblinger slik at det kan dannes et fiolett-kraftfargekompleks. Komplekset er dannet av foreningen av koblingene og ionet av kobber.

[TOC]

Basis

Biuret -reagenset består av kaliumhydroksyd, kuprisk sulfat og natrium og kaliumtartrato. Natriumhydroksyd brukes til å alkalisere miljøet, siden denne tilstanden er uunnværlig for at reaksjonen skal oppstå.

Stoffer som reagerer med proteiner er kuprisk sulfat, mens natriumtartrato har funksjonen av å ikke tillate kobberhydroksyddannelse, som har en tendens til å utfelle og forstyrre reaksjonen.

Kan tjene deg: Fermentering: Historie, prosess, typer, eksempler

Hvis det i prøven er stoffer som har peptidbindinger (polypeptider eller proteiner) vil testen gi positiv.

En reaksjon tolkes som positiv når løsningen blir fiolett. Fargen produseres ved dannelse av et kompleks mellom minst to peptidbindinger som har co-NH-gruppen og de nåværende kupriske kationene.

Det fiolette komplekset kan dannes på to måter: det ene er på grunn av tapet av protoner fra de midtgruppene som binder seg til metall (grov), og det andre ved foreningen av oksygen og nitrogenelektroner som er gratis og binder med kobber.

Denne reaksjonen kan variere i intensitet og farge avhengig av proteintype.

Testen kan utføres kvalitativt eller kvantitativt. I den kvalitative formen rapporteres det som positivt eller negativt. Mens i den kvantitative formen kan konsentrasjonen måles ved den spektrofotometriske metoden.

Reaksjonen leses mellom 540-560 nm. Fargeintensitet er direkte proporsjonal med konsentrasjonen av peptidkoblinger i prøven.

Reagenser

-Natriumhydroksyd (NaOH) ved 20%

-1% pentahydratkuprisk sulfat (CUO₄. 5H₂ENTEN)

-Blandet natrium og tetrahydrat kaliumtartrato (KNAC₄H₄ENTEN₆· 4H₂ENTEN)

Biuret reagensstabilitet

-Det må holdes i kjøling.

Fremgangsmåte

Teknikk

-Plasser 100 ul av prøven eller mønsteret som skal analyseres i et testrør.

-Tilsett 2 ml natriumhydroksyd.

-Bland veldig bra.

-Tilsett 5 ml biuret reagens.

-Bland og la 25 minutter ved romtemperatur, dekk til og beskytt mot lys.

-Observer formasjonen eller ikke av farger og måle spektofotometrisk.

Kalibreringskurve

For å utføre kalibreringskurven kan du bruke serumbovint albumin som et mønster. Flere konsentrasjoner er utarbeidet av det. For eksempel 25, 50, 75, 100, 125 og 150%.

Reaksjonen er montert med alle disse kjente konsentrasjonene, og absorbansen leses for en bølgelengde på 540 nm. Med dataene fra de kjente konsentrasjonene og de absorberende avlesningene blir kalibreringskurven utført.

Det kan tjene deg: Kinas flora og fauna: Representative arter

I hver bestemmelse eller mange behandlede prøver er det tilrådelig. Som kalibreringsmønster kan du bruke serumbovint albumin 0,1-2 mg/ml.

Målinger gjøres i et 540 nm spektrofotometer.

Linearitet er oppfylt opp til en konsentrasjon på 12 g/dL.

Innblanding

Stoffer som forstyrrer i biuret -testen

Selv om det ikke er veldig hyppig, skal det bemerkes at noen stoffer under utførelsen av denne testen kan forstyrre. For eksempel kan tilstedeværelsen av ammonium hemme fargedannelse.

På samme måte kan andre stoffer absorbere den samme bølgelengden, for eksempel visse pigmenter.

På den annen side kan en interferens genereres når et annet stoff enn peptidlenken danner et kompleks med metallsalt. Eksempel: Noen karbohydrater og visse lipider.

I tilfelle det viser det å analysere en slags bunnfall, må den filtreres eller sentrifuges før du setter opp testen.

Stoffer som ikke forstyrrer i Biuret -testen

Testen påvirkes ikke av tilstedeværelsen av:

-Bilirubin opp til en konsentrasjon på 20 mg/dL.

-Hemoglobin til en konsentrasjon på 750 mg/dL.

-Dekstran til en konsentrasjon på 30 g/l.

-Triglyserider opp til en konsentrasjon på 4000 mg/dL.

Fordeler

-Det er en enkel metode for å utføre.

-Det er en økonomisk test.

-Det har høy proteinspesifisitet.

-Få forstyrrelser.

Ulemper

Det har liten følsomhet for å oppdage lave mengder proteiner. Arbeidet utført av Fuentes og samarbeidspartnere bekrefter at Biuret -testmetoden har en 1 mg/ml deteksjonsgrense for protein og en kvantifiseringsgrense på 3 mg/ml.

En annen forskning utført ved University of Amazon rapporterer imidlertid mye lavere verdier. Deteksjonsgrensen som studien rapporterer er 0,020 mg/ml og kvantifiseringsgrensen på 1.33 mg/ml.

applikasjoner

Biuret -reagens eller test brukes til proteinbestemmelse i kliniske og ikke -kliniske prøver i rutinemessige og forskningslaboratorier.

Kan tjene deg: kjennetegn ved levende vesener

Patologier som studerer eller reduserte Proteiner

I mange patologier er det viktig å bestemme konsentrasjonen av totale proteiner i kliniske prøver, og kunne være høy eller redusert.

De er forhøyet i:

-Multippelt myelom,

-Systemisk lupus erythematosus,

-Bakteriell endokarditt,

-Bakteriell hjernehinnebetennelse,

Waldestrom makroglobulinemi, blant andre.

Det reduseres i:

-Nyreinsuffisiens,

-Personer med alvorlig underernæring,

-Pasienter med kroniske infeksjoner, blant andre.

Kliniske prøver

De vanligste kliniske prøvene er serum, plasma og urin. Normalverdien av serum eller plasmaproteiner er 6.0-8.8 gr/dl.

Proteinkonsentrasjon hos voksne hos voksne overstiger ikke 150 mg/24 -timers figur.

Normal verdi av urin/kreatininproteinindeks i urin

Spedbarn: < a 0,50 mg

Barn 2 år og eldre: Indeks: 0,20 mg

Voksne: < 0,2 mg

Ikke -kliniske prøver

Biuret -reaksjonen kan brukes til mange typer ikke -kliniske prøver, for eksempel meieriprodukter, antiofid sera eller et hvilket som helst ukjent stoff som tilstedeværelsen av proteiner er ønsket å undersøke.

Referanser

1. Vázquez J, Guerra L, Quintana J, Ramírez J, Fernando Ry Vázquez og. (2014). Fysisk-kjemisk karakterisering og proteininnhold av væskeekstrakter av mangrove ostron (Crassostrearizophorae). Cuban Journal of Chemistry, 26 (1), 66-74. Hentet 26. juni 2019 fra http: // scielo.Sld
2. Chaparro S, Lara A, Sandoval A, Sosa S, Martínez J, Gil J. Funksjonell karakterisering av mandelen til mangofrø (Mangifera indikerer l.) Development Science Magazine. 2015; 6 (1): 67-75
3. "Biuret."" Wikipedia, gratis leksikon. 19. juni 2019, 16:37 UTC. 26. juni 2019, 22:18
4.  Fuentes F, Quispe I, García J. BIURET -metodestandardisering for å kvantifisere totalt protein i multipurpose antibotropisk serum produsert på National Biological Products Center. Bol - Inst NAC Health 2012; 18 (11-12).  Tilgjengelig på: depot.Ins.Gob.PE
5. Vinerlaboratorier. Totalt proteiner. Kolorimetrisk metode for å bestemme totale serum- og plasmaproteiner. Tilgjengelig på: Wiener-lab.com.ar