Fosfatbuffer (PBS) Foundation, Preparation and Uses

Han Fosfatbuffer, BPS eller saltvannsfosfatbuffer Det er en buffer og isotonisk løsning, hvis funksjon er å opprettholde pH og osmotisk trykk det nærmeste det naturlige (fysiologiske) miljømiljøet. Forkortelsen PBS betyr fosfat bufret saltvann.

PH og osmolaritet er to veldig viktige aspekter som må kontrolleres i visse laboratorieprotokoller. Når det.

Buffer salino pbs fosfat i to forskjellige pH. Kilde: Pixinio.com

Mens kontrollen av osmolaritet er essensiell, spesielt når du arbeider med levende celler, siden plasmamembranene i cellene reagerer i henhold til konsentrasjonen av oppløste stoffer som de blir funnet.

Hvis cellene blir overført til et hypertonisk medium, vil de dehydratene, siden vanngradienten vil bli transportert til siden der det er en større konsentrasjon av oppløsninger. Hvis celler tvert imot plasseres i et hypotonisk medium, vil cellene absorbere væske til de.

Det er grunnen til at PBS -bufferen for laboratorieprotokoller som krever cellevedlikehold brukes In vitro, På denne måten vil cellene ikke bli skadet.

PBS er sammensatt av en kombinasjon av salter, for eksempel natriumklorid, natriumfosfat, kaliumklorid og kaliumfosfat. PBS -sammensetning kan variere avhengig av protokollen.

[TOC]

Basis

I utgangspunktet er funksjonen til saltvannsfosfatbufferen å opprettholde en konstant fysiologisk pH ved siden av en elektrolytisk konsentrasjon som ligner på den i organismen.

I dette miljøet er cellene i stand til å holde seg stabile, da de fysiologiske forholdene simulerer så mye som mulig.

Til den originale PBS -formuleringen kan andre forbindelser av å være nødvendig tilsettes, for eksempel er tilsetning av EDTA til bufferen nyttig for røde blodlegemervask i tverrkompatibilitetstesten.

EDTA forhindrer brøkdelen av komplementet C1 som er til stede i serumet, for å dele seg og lise til de røde blodlegemene, det vil si unngå falske resultater av inkompatibilitet. I tillegg hjelper EDTA til å dissosiere celler.

Kan tjene deg: Filogenetisk tre: Typer og deres egenskaper, eksempler

Forberedelse

Mengden salter som må veies for utdyping av saltfosfat -PBS vil avhenge av mengden som kreves for å forberede:

-Løsningsløsningsbuffer salino phfosphate (PBS 10x)

For en liter løsning:

Veie:

80,6 g NaCl,

2,2 g KCL,

11,5 g Na₂Hpo₄,

2,0 g kh₂Hpo₄

Forberedelsesteknikk

Tilsett nok vann (80%) på et begersted.

PBS -preparat ved bruk av agiterende jern med magnetstang . Kilde: Bruker: Ruhrfisch, Wikipedia. com

Filtrer for å fjerne avviklingspartikler. Bruk filtre med 0,45 um porer. Autoklave Sterilice og distribuerer aseptisk i laminær strømningsklokke i glasskrukker med lokk.

Til 10x -løsningen (konsentrert) justerer ikke pH. Justeringen gjøres en gang fortynnet til buffer PBS 1x konsentrasjon, (fortynning 1:10).

-Saltfosfatbuffer (PBS 1x)

PBS 1x kan fremstilles direkte, veie de tilsvarende mengder av hvert salt eller kan tilberede fortynning av morsoppløsningen (1:10) med sterilt destillert vann.

-For å forberede en liter saltvannsfosfat PBS 1x anger:

8,06 g NaCl,

0,22 g KCl,

1,15 g Na₂Hpo₄,

0,20 g kh₂Hpo₄

Forberedelsesteknikk

Fortsett som forklart i den konsentrerte løsningen. Deretter må pH justeres. For å gjøre dette, må du måle pH og avhengig av resultatbruksyre (HCl) eller base (NaOH) for å senke eller laste opp pH henholdsvis etter behov, til den er 7.4.

Syren eller basen tilsettes dråpe for dråpe mens du overvåker pH-verdien til løsningen ved bruk av en pH-meter. Filtrere, autoklav sterilice og distribuerer aseptisk i koniske rør eller flasker etter behov.

-For å utarbeide PBS 1x fra 10x morsløsning:

Lag en fortynning 1:10. For eksempel, for eksempel for å fremstille 1 liter PBS 1x, må du måle 100 ml av morsoppløsningen og tilsette 700 ml sterilt destillert vann. Juster pH og fullfør vannmengden til den når 1000 ml.

Kan tjene deg: Retningsvalg: Hva er definisjon, eksempler

Den forberedte PBS -bufferen er fargeløs og gjennomsiktig.

Daglig bruk PBS kan lagres ved romtemperatur og resten i kjøleskap.

.Løsninger for pH -innstilling

HCl

For 100 ml HCl (saltsyre) til 1 molar.

Mål 91 ml destillert vann og plasser det i et bunnfall på 250 ml kapasitet.

Mål 8,62 ml konsentrert HCl og tilsett det sakte til begerglasset som inneholder vannet (gjør det aldri opp ned). Ta relevante biosikkerhetstiltak når du håndterer sterke syrer (svært etsende stoff).

Bland i 5 minutter ved hjelp av en omrøringsplate med en magnetstang inne i glasset. Gå til en 100 ml ball og spyle ved 100 ml med h₂Eller destillert.

Naoh

For 100 ml NaOH (natriumhydroksyd) 10 molar.

Mål 40 ml destillert vann og plasser det i et 250 ml kapasitet Beaker. Mål 40 GR av NaOH og tilsett vannet. Bland ved hjelp av en omrøringsplate med en magnetstang inne i glasset.

Gå til en 100 ml aggroidkule og flush med destillert vann. Overhold biosikkerhetsstandarder, fordi denne reaksjonen er eksoterm (frigjør energi i form av varme).

Hvis du vil fremstille andre mengder saltfosfatløsning, kan du konsultere tabellen nedenfor:

Kilde: "Viral and Human Genomics Laboratory, UASLP School of Medicine"

applikasjoner

Hovedsakelig brukes det i cellebiologilaboratorier, immunologi, immunhistokjemi, bakteriologi, virologi og forskning.

Det er ideelt å gjøre cellulær vasking ved sentrifugat (røde blodlegemer), celle monocapas vasket, i spektroskopiske ellipsometri -teknikker, i kvantifisering av bakterielle biofilmer, ved å opprettholde cellevekster for virus, som en vasking av vasker i teknikken til indirekte Immunofluorescens og i teknikker for karakterisering av monoklonale antistoffer.

Det tjener også til å transportere celler eller vev, som fortynningsmiddel for cellertelling, fremstilling av celleenzymer (TRIPSIN), som et fortynningsmiddel av biomolekyler uttørkningsmetode og for å fremstille andre reagenser.

Kan tjene deg: heterotroph ernæring: egenskaper, stadier, typer, eksempler

På den annen side viste Martin og samarbeidspartnere i 2006 at PBS er nyttig i rettsmedisinske vitenskapslaboratorier, spesielt i utvinningen av sæd fra vaginal smør, eller i utvinningen av penismøring vaginale celler. På denne måten kan det etableres hvis det har vært et seksuelt forhold.

Begrensninger

-Noen PBS -buffer bringer som konserveringsmiddel et stoff som kalles natrium azid. Denne forbindelsen kan generere eksplosive stoffer hvis den kommer i kontakt med bly eller kobber. Av denne grunn må spesiell forsiktighet tas når du kasserer dette reagenset for drenering. Hvis det kastes av denne ruten, må rikelig vann tilsettes for å utvanne seg maksimalt.

-Fosfatbufferen skal ikke tilsettes sink, siden den utfeller noen salter.

-Wangen og samarbeidspartnere i 2018 slo fast at bruk av PBS ikke var egnet for vasking av primær akutt myeloid leukemi (AML) ekstrahert fra perifert blod, fordi mange celler går tapt ved lysering, med en stor reduksjon i proteinmateriale.

Derfor bestemte de at AML -primære celler ikke skulle vaskes med PBS etter lagring i flytende nitrogen.

Referanser

1. Coll j. (1993). Diagnostiske teknikker i virologi. Ed Díaz de Santos. 360 pg
2. Rodríguez M, Ortiz T. Cellekultur. Endring av medium. Institutt for normalt og patologisk histologi University of Sevilla. Tilgjengelig i personell.oss.er
3. Fosfatbufret saltvann (PBS) preparat. (2008). Standard driftsprosedyrer (SOPs) Viral og human Genomics Laboratory Fakultet for medisin UASLP. Tilgjengelig på: Genomikk.Uaslp.MX
4. "Saltfosfat buff."" Wikipedia, gratis leksikon. Apr 2019, 19:36 UTC. Apr 2019, 02:57 er.Wikipedia.org.
5. Pietrasanta L, Von-Bilderling C.Emner i molekylær biofysikk. Tilgjengelig på: Brukere.Df.Uba.ar
6. Rediar. Håndbok. PBS+EDTA. Tilgjengelig på: Felsan.com.ar
7. Martin NC, Pirie AA, Ford LV, Callaghan CL, McTurbate K, Lucy D, Scrimger DG. Bruken av fosfat bufret saltvann for utvinning av celler og spermatozoer fra vattpinner. Sci Justice. 2006; 46 (3): 179-84. Tilgjengelig i: NCBI.NLM.NIH.Gov
8. Wangen R, Aasebø E, Treeni A, et al. Bevaringsmetode og fosfat bufret saltvasking av den akutte myeloide leukemi proteom. Int j mol sci. 2018; 19 (1): 296. Tilgjengelig i: NCBI.NLM.NIH.Gov
9. Martínez R, Gragera R.  (2008). Teoretiske og praktiske grunnlag for histokjemi. Superior Council of Scientific Investigations. Madrid. Tilgjengelig på: Bøker.Google.co.gå