Cytochemistry History, Object of Study, Utility and Techniques

De Cytokjemi Det inkluderer en serie teknikker som er basert på identifisering og disponering av visse spesifikke stoffer inne i cellen. Det regnes som en gren av cellebiologi som kombinerer cellemorfologi med den kjemiske strukturen.

I følge Bensley, grunnlegger av anvendelsen av moderne cytologi, uttrykker det at formålet med cytokjemi er å oppdage den kjemiske organiseringen av celler for å forstå livets mysterier. I tillegg til å studere de dynamiske endringene som skjer i de forskjellige funksjonelle stadiene.

1: Paget extramamaria sykdom. (Hematoksylin-eosin) 2: Senile plater observert i hjernebarken hos en pasient med Alzheimers sykdom. (Sølv impregnering) 3: Kanintunge, kollagenfibre (blå). Muskelfibre (lilla strips). (Massons trichromic). 4: levervev med fet degenerasjon. (Sudan iii) 5: Insimated lever. Nekrose. (Toluidine Blue) Kilder: Wikipedia. com/useer: KGH [CC BY-SA 3.0 (http: // creativecommons.Org/lisenser/by-SA/3.0/)]/Public Domain Files/Mohit Lalwani [CC By-SA 4.0 (https: // creativecommons.Org/lisenser/by-SA/4.0)]

På denne måten er det mulig å bestemme den metabolske rollen som disse stoffene møtes i cellen.

Cytokjemi bruker to hovedmetoder. Den første er basert på kjemiske og fysiske prosedyrer. Disse teknikkene tyr til bruk av mikroskopet som et uunnværlig instrument for å visualisere de kjemiske reaksjonene som skjedde på spesifikke stoffer i cellen.

Eksempel: Bruk av cytokimiske fargestoffer, for eksempel reaksjonen av avferexgen eller PAS -reaksjon, blant andre.

Den andre metoden er basert på biokjemi og mikrokjemi. Med denne metodikken er det mulig å kvantitativt bestemme tilstedeværelsen av intracellulære kjemikalier.

Blant stoffene som kan bevises i et cellulært vev eller struktur er følgende: proteiner, nukleinsyrer, polysakkarider og lipider.

[TOC]

Historie om cytokjemi

Cytokjemiske teknikker siden oppfinnelsen deres har bidratt til å forstå sammensetningen av celler, og over tid har det dukket opp en rekke teknikker som bruker forskjellige typer fargestoffer med affiniteter og forskjellige fundamenter.

Deretter åpnet cytokjemi nye horisonter med bruk av visse underlag for å fargelegge tilstedeværelsen av enzymer eller andre molekyler inne i cellen.

På samme måte har andre teknikker som immunocytokyse som har vært til stor hjelp for diagnosen mange sykdommer dukket opp. Immunocytokjemi er basert på antigen-antistoffreaksjoner.

På den annen side har cytokjemi også brukt fluorescerende stoffer som kalles fluorokromer, som er utmerkede markører for påvisning av visse cellulære strukturer. På grunn av egenskapene til fluorokrom, fremhever det strukturene det er satt.

Hva studerer du?

De forskjellige cytokjemiske teknikkene som brukes på en biologisk prøve har noe til felles: å fremheve tilstedeværelsen av en spesifikk type stoff og kjenne dens beliggenhet i den biologiske strukturen under evaluering, enten det er en celletype eller et vev.

Disse stoffene kan være enzymer, tungmetaller, lipider, glykogen og definerte kjemiske grupper (aldehyder, tyrosin, etc.).

Informasjonen levert av disse teknikkene kan ikke bare veilede for celleidentifikasjon, men også for diagnose av forskjellige patologier.

For eksempel er cytokjemisk farging veldig nyttige for å skille mellom de forskjellige typer leukemi, siden noen celler uttrykker visse nøkkelenzymer eller stoffer og andre ikke.

På den annen side skal det bemerkes at for at bruk av cytokjemi skal være mulig, må følgende hensyn tas:

Kan tjene deg: gram flekk

1) Stoffet må være immobilisert på stedet der det er naturlig.

2) Stoffet må identifiseres ved bruk av underlag som reagerer spesielt med det og ikke med andre forbindelser.

Nytte

Prøvene som kan studeres gjennom cytokjemiske teknikker er:

- Utvidet perifert blod.

- Benmarg utvidet.

- Fabrices satt for histokjemi -teknikker.

- Cytosentrifugeringsceller.

Cytokjemiske teknikker er av stor støtte innen hematologiens område, ettersom de er mye brukt for å hjelpe til med diagnose og differensiering av visse typer leukemi.

For eksempel: Mattreaksjoner tjener til å skille mellom en myelomonocytisk leukemi fra akutt monocytisk leukemi.

Benmargsutstryk og perifert blod fra disse pasientene er like, siden noen celler er vanskelige å identifisere bare fra det morfologiske synspunktet. For dette utføres eiendomstesten.

I den første gir de positive de spesifikke mattene, mens de ikke -spesifikke sakene i det andre gir positive.

De er også veldig nyttige i histologi, siden for eksempel bruk av tungmetallfargingsteknikk (argisk impregnering), flekker intense brune retikulære fibre i myokardvev.

Teknikker i cytokjemi

De mest brukte teknikkene vil bli forklart nedenfor:

- Bruk av fargestoffer

Fargestoffene som brukes er veldig forskjellige i cytokjemiske teknikker, og disse kan klassifiseres i henhold til flere visninger:

I henhold til det radikale som de har tilhørighet

De er delt inn i: syrer, grunnleggende eller nøytrale. De er de enkleste og mest brukte gjennom historien, slik at de skiller de basofile komponentene i acidofiler. Eksempel: Hematoksylin-eosinfarging.

I dette tilfellet er sentrene til cellene farget blå (de tar hematoksylinet som er det grunnleggende fargestoffet) og de røde cytoplasmer (de tar eosin som er syret fargelegging).

I henhold til fargen de gir

De kan være ortokromatiske eller metakromatiske. Ortokromatisk er de som flekker strukturene i samme farge som fargestoffet har. For eksempel tilfellet med Eosina, hvis farge er rød og fargestoffer rødt.

Metakromatisk flekker i stedet strukturene i en annen farge fra fargen deres, for eksempel toluidin, hvis farge er blå og, likevel, fargelett fiolett.

Viktig eller supravital fargelegging

De er ufarlige fargelegging, det vil si at de fargelegger cellene og de holder seg i live. Disse fargestoffene kalles viktige (f.eks. Det blå av Tripán til fargestoffmakrofager) eller supravital (f.eks. Janus grønne til fargestoff mitokondrier eller den nøytrale røde som fargerer lysosomer).

- Lipiddeteksjon gjennom fettoppløselige fargestoffer

Osmium Tetroxide

Farging av lipider (ikke -mettede fettsyrer) svart. Denne reaksjonen kan observeres med det optiske mikroskopet, men fordi denne fargestoffet er av høy tetthet kan også vises med elektronisk mikroskop.

Sudan III

Er en av de mest brukte. Dette fargestoffet er spredt og solubilisert i vevene, og akkumulerer i fallene av lipid. Fargen er skarlagensrød.

Black Sudan farging B

Det gir bedre kontrast enn de forrige fordi den også er i stand til å oppløses i fosfolipider og kolesterol. Det er nyttig for å oppdage azurofile og spesifikke granuler av modne granulocytter og deres forløpere. Identifiserer derfor myeloide leukemier.

Det kan tjene deg: metylrød: egenskaper, forberedelser og applikasjoner

- Tinion of Aldehyder (Schiffs perkysyrefarging)

Schiffs periódinsyrefarging kan oppdage tre typer landsbygrupper. De er:

- Gratis aldehyder, naturlig til stede i vevene (plasmal reaksjon).

- Aldehyder produsert ved selektiv oksidasjon (PAS -reaksjon).

- Aldehydos generert ved selektiv hydrolyse (Faulgen -reaksjon).

PAS -reaksjon

Denne fargingen er basert på å oppdage visse typer karbohydrater, for eksempel glykogen. Schiffs periódinsyre bryter C-C-bindinger av karbohydrater på grunn av oksidasjon av 1-2 glykoliske grupper, og frigjør aldehydgrupper.

De frie aldehydergruppene reagerer med Schiff -reagenset og danner en lilla rød forbindelse. Utseendet til lilla rød farge viser en positiv reaksjon.

Denne testen gir positiv i planteceller, og oppdager stivelse, cellulose, hemicellulose og peptiner. Mens det i dyreceller oppdager muciner, mucoproteiner, hyaluronsyre og kitin.

I tillegg er det nyttig i diagnosen lymfoblastiske leukemier eller erytroleukemi, blant andre patologier av myelodisplastisk type.

Når det gjelder syre karbohydrater, kan bunten med blå alcián brukes. Testen er positiv hvis en lyseblå/turkis farge blir observert.

Plasmal reaksjon

Den plasmale reaksjonen fremhever tilstedeværelsen av visse lange sjette alifatiske aldehyder som palmital og stearal. Denne teknikken gjelder frosne histologiske kutt. Det er direkte med Schiff -reagens.

Feregenreaksjon

Denne teknikken oppdager tilstedeværelsen av DNA. Teknikken består av å utsette vevet som er festet til svak syrehydrolyse for senere å reagere med Schiff -reagens.

Hydrolyse forlater eksponerte aldehyder av deoksyribose på nivået med deoksyribose-purine union. Deretter reagerer Schiff Reagent med aldehyder som var gratis.

Denne reaksjonen er positiv i kjernene og negativ i cytoplasmer av cellene. Positivitet er vist av tilstedeværelsen av en rød farge.

Hvis denne teknikken er kombinert med grønn-pyroningrønn, er det mulig å oppdage DNA og RNA samtidig.

- Cytokimisk farging for proteinstrukturer

For å gjøre dette kan Millon -reaksjonen brukes, hvilken kvikksølvnitrat brukes som reagens. Strukturer som inneholder aromatiske aminosyrer vil bli farget rødt.

- Cytokjemisk farging som bruker underlag for å demonstrere tilstedeværelsen av enzymer

Disse fargingene er basert på inkubering av den biologiske prøven med et gitt underlag, og reaksjonsproduktet reagerer senere med diazoiske salter for å danne et farget kompleks.

Esterasas

Disse enzymene er til stede i lysosomene til noen blodceller og er i stand til å hydrolysere organiske estere som frigjør Naftol. Denne siste danner et uoppløselig sukker når det blir sammen.

Det er flere underlag, og avhengig av hvilken som kan brukes. Den første er til stede i de umodne cellene i myeloidserien og den andre i cellene med monocytisk opprinnelse.

Kan tjene deg: grunnleggende stoff: hva er, egenskaper og funksjoner

Substratet som brukes til bestemmelse av spesifikke matter er: Naftol-as-d kloracetat. Mens for bestemmelse av ikke -spesifikke matter, er flere underlag som acetat naftol, naphyl -APH -confretacetatet og butyratet naphyl alfa.

I begge tilfeller vil cellene bli farget rød i intens rødt når reaksjonen er positiv.

Myeloperoxidase

Dette enzymet finnes i de azurofile granulatene av granulocytiske og monocyttceller.

Deteksjonen brukes til å skille leukemi av myeloid opprinnelse med hensyn til lymfoider. Celler som inneholder myeloperoxidases colo fra okergul.

Fosfataser

Disse enzymene frigjør fosforsyrer fra forskjellige underlag. De skiller seg fra hverandre i henhold til substratets spesifisitet, pH og virkningen av hemmere og inaktivering.

Blant de mest kjente er fosfomonosterae som hydrolyserer enkle estere (P-O). Eksempel: Alkalisk fosfatase og sur fosfatase, så vel som fosfamider som hydrolyserer fagforeningene (P-N). Disse brukes til å differensiere lymfoproliferative syndromer og for diagnose av trikoleukemi.

- Trikromiske fargestoffer

Mallary-Azan Trichromic

De er nyttige for å skille cytoplasma fra cellefibercellene. Cellene er farget rød og kollagenfibrene til blå.

Massons trikromiske

Dette har samme verktøy som den forrige, men i dette tilfellet er cellene farget røde og kollagenfibrene til grønt.

- Fargestoff som flekker spesifikke organeller

Janus Green

Dette flekker selektivt mitokondrier.

Sølv- og osminsyresalter

Flekk til Golgi -apparatet.

Toluidinblått

Nissis kropper flekker

Sølv og pas salter

Retikulære fibre og basalarkfarging.

Orcein og fuchsin resorcin

Flekker de elastiske fibrene. Med den første er de farget brune og med den andre blå eller intens lilla.

- Andre teknikker brukt i cytokjemi

Bruk av fluorescerende eller fluorokromes stoffer

Det er teknikker som bruker lysstoffrør for å studere plasseringen av en struktur i en celle. Disse reaksjonene blir visualisert med spesielt mikroskop som kalles fluorescens. Eksempel: IFI -teknikk (indirekte immunofluorescens).

Påvisning av cellulære komponenter ved immunocytokjemi

Disse teknikkene er veldig nyttige i medisin, da de hjelper til med å oppdage en viss cellulær struktur og også kvantifiserer den. Denne reaksjonen er basert på en antigen-antistoffreaksjon. For eksempel: Elisas teknikker (enzymimmuno essay).

Anbefalinger

- Det er nødvendig å bruke smørekontroller for å evaluere fargestoffets riktige funksjon.

- Fersk utstryk bør brukes til å bli utsatt for cytokjemiske farger. Hvis ikke mulig, må de beskyttes mot lys og bevares ved 4 ° C.

- Det bør tas vare på at fixeren som brukes ikke påvirker stoffet negativt å undersøke. Det vil si at det bør unngås at den er i stand til å trekke ut eller hemme det.

- Tidspunktet for fikseringsmidlene må respekteres, siden det vanligvis bare skal være i sekund, siden det å utsette smøringen mer tid for fikseringsmiddelet kan skade noen enzymer.

Referanser

1. “Cytochymics."" Wikipedia, gratis leksikon. 30. juni 2018, 17:34 UTC. 9. jul 2019, 02:53 Tilgjengelig på: Wikipedia.org
2. Villarroel P, fra Suárez C. Metall impregneringsmetoder for studiet av myokardial retikulære fibre: Sammenlignende studie. RFM 2002; 25 (2): 224-230. Tilgjengelig på: Scielo.org
3. Santana A, Lemes A, Bolaños B, Parra A, Martín M, Molero T. Cytokjemi av syrefosfatase: Metodologiske hensyn. Rev Diagn Biol. 200; 50 (2): 89-92. Tilgjengelig på: Scielo.org
4. Av Robertis E, av Robertis M. (1986). Cellulær og molekylær biologi. 11 går utgave. Ateneo redaksjon. Buenos Aires, Argentina.
5. Klassiske verktøy for studier i cellebiologi. TP 1 (komplementært materiale) - Cellebiologi. Tilgjengelig på: DBBE.fcen.Uba.ar