Utarbeidelse av kulturmedier

Utarbeidelsen av kulturmedier er en metodikk for å dyrke mikroorganismer, for å studere dem

Hva er utarbeidelsen av kulturmedier?

De Utarbeidelse av kulturmedier Det er en rutinemessig metodikk som brukes i laboratorier for vekst av ønskede mikroorganismer. Kulturmediene er faste, flytende eller semi-solide preparater som alle nødvendige næringsstoffer for utvikling av en mikrobiell populasjon har.

Generelt sett er midlene til å dyrke mikroorganismer rike på proteiner og aminosyrer og inneholder vanligvis en komponent som favoriserer veksten av organismen du vil studere, for eksempel vitaminer, blod, serum, blant andre.

Det er ingen midler til generell eller universell kultur, siden sammensetningen varierer avhengig av behovene til mikroorganismen av interesse. Noen bakterier kan utvikles i ethvert kulturmedium, men andre har spesielle krav.

Hva består den av?

Mikroorganismer, som sopp og bakterier, kan ikke studeres individuelt på grunn av deres mikroskopiske størrelse. Derfor må de dyrkes i kunstige medier som tillater den betydelige økningen i befolkningen.

For eksempel, hvis vi ønsker å studere bakterier, må vi gi dem passende forhold slik at de kan spre seg og danne en koloni (som kan observeres med det blotte øye).

Utarbeidelsen av kulturmedier varierer mye avhengig av hvilken type mikroorganisme du vil vokse. Før du forbereder det, er det nødvendig å kjenne de grunnleggende ernæringsbehovene til arbeidsorganismen.

De vanligste komponentene som brukes i avlingsmedier vil bli beskrevet nedenfor for å ha en generell ide om dens forberedelse:

Agar

Det brukes i avlinger som et geleringsmiddel og legger til når et solid eller semi -solid medium er søkt. Det første størkningsmidlet som ble brukt i medieforberedelsen var gelatinen, men i 1883 ble agaren introdusert i bakteriologiens verden av W. Hesse.

Den bakteriologiske typen agar har som hovedkomponent et polysakkarid av komplekse forgreninger, ekstrahert fra alger. Denne forbindelsen brukes som et fortykningsmiddel av vanlig mat, for eksempel is og syltetøy.

Det er et veldig verdifullt element i mikrobiologi av flere grunner. Hovedsakelig, fordi mikroorganismer ikke kan forringe den, er likestrekket ved en temperatur på 100 ° C og forblir i flytende tilstand til de når 45 ° C eller mindre.

I tilfelle du vil fremstille et solid medium, må agarkonsentrasjonen være rundt 1,5%, mens semi -solidene må utarbeides fra 0,3 til 0,5%.

Væsker

Dyrking av patogene organismer trenger kroppsvæsker slik at de kan utvikle seg som de ville gjort i sitt naturlige miljø.

Kan tjene deg: protesegruppe

Av denne grunn tilsettes fullstendig eller defibrert blod. Væsken blir ekstrahert fra et sunt og når den en gang steriliserte dyret tilsettes i kulturmediet.

Utdrag

De er oppnådd fra forskjellige dyredeler (for eksempel kjøtt eller lever) eller grønnsak (frø) og behandles for å oppnå et solid konsentrat i form av pasta eller støv.

De vanligste er ekstraktene av gjær, malt og kjøtt.

PEPTONAS

Disse organiske forbindelsene oppnås ved enzymatisk eller kjemi av dyre- eller plantevev. Hensikten er å legge til rikt innhold i aminosyrer, som er de grunnleggende enhetene av proteiner.

Støtdempere

"Bufferne", eller støtdempende systemer, unngå plutselige pH -endringer og bidra til å opprettholde det optimale området som den tolererer organismen.

De fleste organismer kan utvikle en pH på 7, selv om noen bakterier foretrekker alkaliske medier. Imidlertid er det bakterier som motstår variasjoner av pH mellom verdiene 6 og 9.

Hos pH -følsomme arter produseres ikke skade av den overdreven mengden hydrogen eller hydroksylioner, men av økningen i svake syrer eller baser som kan trenge gjennom cellen.

På samme måte blir pH -indikatorer lagt til for å kunne overvåke den og unngå avvik forårsaket av gjæringer eller andre prosesser.

Mål

Hovedmålet når du forbereder et kulturmedium er å legge til alle nødvendige komponenter for å tillate vellykket utvikling av organismen som ønsker å bli isolert. Kombinasjonen av mer effektive komponenter og næringsstoffer for å oppnå ønsket midler må identifiseres.

Både tilberedning og middels lagring er avgjørende for å sikre vellykket vekst, siden disse trinnene avhenger av miljøets sammensetning og tilgjengeligheten av næringsstoffer.

Det bør tas i betraktning at dyrking av mikroorganismer er en oppgave som påvirkes av flere faktorer utenfor kulturmiljøet, for eksempel mottatt lys, temperatur og surhetsnivå eller alkaliniteten til mediet.

Derfor må hver av disse variablene tas i betraktning og overvåkes strengt.

Typer medier

Basert på komposisjonen

Basert på dens sammensetning er det tre hovedtyper av avlinger: naturlige eller empiriske, semisyntetiske og syntetiske eller kjemiske midler.

Naturlige omgivelser

I naturlige medier er den eksakte sammensetningen ukjent. Disse inkluderer ingredienser som melk, fortynnet blod, plantesafter, ekstrakter og infusjoner av kjøtt og peptoner.

Av økonomiske årsaker tilsettes vanligvis lavt kostnadskomponenter, for eksempel soyaekstrakt, serum, melasse osv.

Kan tjene deg: Støtte: Kjennetegn, funksjoner og eksempler

Semisyntetiske medier

Det kalles semisyntetisk hvis sammensetningen av det samme er delvis kjent. Ethvert medium som inneholder agar er et semisyntetisk medium.

Blant dem har vi dekstrose potet, czapek-dox agar, havregryn, kjøtt pepton grep, blant andre eksempler.

Syntetisk eller kjemisk definert medium

I dette tilfellet er sammensetningen av mediet - som for mengden karbon, nitrogen, svovel, fosfor og enhver annen vekstfaktor, helt kjent - helt kjent.

Det er veldig nyttig hvis du vil oppnå reproduserbare resultater for andre forskere.

For de såkalte "mikroorganismer med spesielle vekstkrav" må du legge til de nødvendige komponentene. Et eksempel på denne typen er Lactobacillus.

Basert på typen mikroorganisme

På samme måte er det en annen klassifisering for kulturmedier basert på typen mikroorganisme som kan vokse i den.

Etter dette prinsippet har vi følgende: Generelle midler, berikelse, selektive og differensialer. Hver er beskrevet nedenfor:

Generelle midler

Disse innrømmer utviklingen av et bredt utvalg av mikroorganismer. Hvis noen organisme trenger spesielle forhold for vekst, vil den ikke kunne utvikle seg i denne typen avlinger.

Berikelsesmedier

Berikelsen betyr å favorisere veksten av en viss type mikroorganisme, men det er ikke lagt til noe stoff for å forhindre at andre typer mikrober vokser i den.

Selektive midler

De søker den spesifikke veksten av en mikroorganisme, kaller sopp, bakterier, protozoer, blant andre. For å gjøre dette, hemmer de andres utvikling.

For å oppnå dette målet, kan dødelige kjemiske forbindelser tilsettes for en bred gruppe mikroorganismer og ufarlig for kroppen av interesse, eller legge til energikilder som bare kan assimileres av mikroben som er søkt.

Selektive medier brukes når medisinske prøver tas for å dyrke noe patogen mikroorganisme. Her er det nødvendig å favorisere veksten av patogen og hemme utviklingen av normal mikrobiell flora fra pasienten.

Vismut sulfittagar, for eksempel, tillater ikke vekst av gram -positive bakterier og et stort antall bakterier som finnes i mage -tarmhulen.

Derfor brukes det til å dyrke de gram -negative bakteriene som forårsaker tyfusfeber, Salmonella typhi, I fekale prøver.

Differensielle midler

Denne typen bruker noen diagnostiske kjennetegn på organismen av interesse (for eksempel særegenheter i metabolismen) for å kunne identifisere dem mot en annen art som vokser i samme medium.

Det kan tjene deg: Transfaser: Hva er funksjoner, nomenklatur, underklasser

Både differensialmedier og selektive midler er veldig nyttige innen klinisk mikrobiologi og folkehelse, siden disse fagområdene trenger å oppdage tilstedeværelsen av spesifikke mikroorganismer relatert til patologier eller dårlige hygieneforhold.

Du kan legge til indikatorstoffer i avlingen som gir en særegen trekk til den ettertraktede kolonien. For eksempel til medium agar-eosin-rul av metylen (forkortet EMB) og agar-macconkey tilsettes laktose og en pH-indikator.

Når en koloni utvikler seg i disse mediene med evnen til å gjære laktose og produsere aldehyder, kan de observeres i en spesiell farge.

Trinn for utarbeidelse av kulturmedier

For øyeblikket kan dyrking kjøpes på en lyofilisert måte. Derfor blir preparatet tilrettelagt, og bare produktet gjenstår.

Innholdet må være tungt (under hensyntagen til det endelige beløpet du vil tilberede) og oppløst i destillert vann etter alle produktindikasjoner.

Innholdet i flytende medier må deles inn i de ønskede beholderne (petriskall, rør osv.) For påfølgende sterilisering.

For å distribuere det faste mediet er det nødvendig å smelte det ved hjelp av en mikrobølgeovn eller sende inn materialet til et vannbad. Medium pH må justeres.

Vanligvis brukes agaren i testrør eller i petriskall. Hvis agaren stivner i en skråstilling, med passende vinkel for at den endelige terminalkanten skal være diagonal, er den kjent som fløyte eller skrå pico -rør.

Når agaren stivner i en helt vertikal posisjon, får den navnet "dyp".

Etter sterilisering av media - ved hjelp av en autoklav - lar de dem avkjøles. Disse må manipuleres i et miljø fritt for mikroorganismer, det vanligste er å jobbe med en lettere tenning som sikrer et aseptisk miljø i nærheten.

Referanser

1. Celis, J. OG. (2006). Cellebiologi: en laboratoriehåndbok (Vol. 2). Elsevier.
2. Finegold, s. M., Bailey, w. R., Baron, e. J., Finglod, s. M., & Scott, og. G. (1991). Bailey Scott: Mikrobiologisk diagnose. Pan -American Medical.
3. Olivas, e. (2004). Mikrobiologi og II og parasitologiske praksishåndbok. Autonome University of Ciudad Juarez.
4. Schlegel, h. G., & Zaborosch, C. (1993). Mikrobiologi Generelt. Cambridge University Press.
5. Tortora, g. J., Funke, f. R., & Case, C. L. (2007). Introduksjon til mikrobiologi. Ed. Pan -American Medical.