Simmons Citrate Agar

Pseudomonas fluorescens i Simmons citrate agar. Kilde: tvil, CC BY-SA 3.0, Wikimedia Commons

Hva er simmons citrate apar?

Han Simmons Citrate Agar Det er et solid medium som brukes som en biokjemisk test av identifisering av mikroorganismer, spesielt gram -negative baciller. Det opprinnelige mediet ble opprettet av Koser i 1923.

Kosers sitratmedium besto av et buljong som inneholder natriumfosfat, ammoniumfosfat, monopotonisk fosfat, magnesiumsulfat og natriumcitrat.

Som det kan sees, er den eneste karbonkilden i mediet sitrat, og nitrogen er ammoniumfosfat, og utelater proteiner og karbohydrater som en kilde til disse elementene, ofte til stede i andre medier.

Derfor kan de inokulerte bakteriene i det mediet bare reprodusere seg hvis det er i stand til å ta karbonet i sitratet. Testen var positiv hvis det var turbiditet i midten. Imidlertid hadde jeg ulempen med at ikke -spesifikk turbiditet kunne oppstå.

Dette problemet ble løst av Simmons ved å legge Bromotimol Agar til Kosers originale formel. Selv om prinsippet er det samme, tolkes det annerledes.

Basis

Noen bakterier har evnen til å overleve i fravær av gjæring eller produksjon av melkesyre, og trenger å oppnå energi gjennom bruk av andre underlag. I denne testen er den eneste karbonkilden som tilbys citrat.

Bakterier som er i stand til å overleve under disse forholdene, metaboliserer sitrat raskt med en alternativ rute til den tradisjonelle, ved bruk av trikarboksylsyresyklusen, eller sitratfermenteringssyklusen.

Katabolismen av sitrat av bakterier inkluderer en enzymatisk mekanisme uten intervensjon av koenzym til. Dette enzymet er kjent under navnet Citrica (Citrate Oxalacetate-Liasa) eller Demolase Citrate. Reaksjonen krever tilstedeværelse av en bivalent kation, som i så fall leveres av magnesium.

Kan tjene deg: typer pusting og deres egenskaper

Reaksjonen genererer oksaloacetat og pyruvat, som deretter gir opphav til organiske syrer midt i en alkalisk pH dannet ved bruk av nitrogenkilden. Disse organiske syrene brukes som en karbonkilde som genererer karbonater og bikarbonater, og ytterligere alkaliserer mediet.

Sådd modus

Simmons citratmedium må inokuleres litt i fiskehale ved bruk av rett eller nål, og inkubert i 24 timer til 35-37 ° C. Kulminert tiden resultatene blir observert.

Sådd er bare gjort på overflaten av agaren, uten punktering.

Tolkning

Hvis mediet er den opprinnelige fargen (grønn) og det ikke er noen synlig vekst, er testen negativ, men hvis mediet endres blå, indikerer tilstedeværelsen av alkaliske produkter, som blir påvist av pH -indikatoren. I dette tilfellet er testen positiv.

Dette skjer fordi hvis bakteriene bruker karbonet i sitratet, er det også i stand til å ta nitrogenet fra ammoniumfosfatet som det frigjør ammoniakk, alkaliserer mediet.

På den annen side, hvis veksten av bakteriene blir observert i midten, men det er ingen fargeendring, må testen også betraktes som positiv, siden hvis det er vekst, betyr det at bakteriene var i stand til å bruke sitrat som en Karbonkilde, selv om det ikke er noen endring av pH den gangen (noen ganger kan det ta).

Hvis det er tvil i tolkningen av den endelige fargen, kan den sammenlignes med et ikke -okkulert sitratrør.

Forberedelse

Vei 24,2 gr av det dehydrerte mediet for en liter vann. Bland og la være omtrent 5 minutter. Fullfør oppløsning av medium oppvarming i 1 eller to minutter, og vinker ofte.

Kan tjene deg: Hva er det makromolekylære nivået?

Server 4 ml i test- og autoklavørør ved 121 ° C i 15 minutter. Når du forlater autoklaven, vipper du ved hjelp av støtte, slik at agaren blir størknet i form av en fløytetopp med liten taco eller bakgrunn og mer ramme.

Den endelige pH i medium citrat er 6,9 (grønn farge). Dette mediet er veldig følsomt for pH -endring.

En pH 6 eller under, mediet blir gul farge. Denne fargen er ikke observert i bakterietest.

Og ved pH 7,6 eller over endres mediet i blått av intense Preussen.

Bruk

Simmons Citrate Agar brukes til å identifisere visse mikroorganismer, spesielt baciller som tilhører Enterobacteriaceae -familien og andre ikke -fermenterende glukosebaciller.

Endelige hensyn

Simmons citrat -medium er en veldig delikat test, da falske positiver kan oppnås hvis noen feil blir gjort.

Omsorgen som må tas er følgende:

Inokulo

En veldig tykk eller lastet bakteriell inokulum bør ikke gjøres, fordi det kan føre til at en coppy gul farge utvikler seg i stedet for sådd, uten å påvirke resten av mediet, men kan gjøre det å tro at det er vekst. Det betyr ikke bevispositivitet. 

På samme måte kan en tykk inokulum generere en falsk positiv, fordi forhåndsformede organiske forbindelser i celleveggene til morboundære bakterier kan frigjøre nok karbon og nitrogen for å vri pH -indikatoren.

Derfor er idealet å så bruke nålen i stedet for platinahåndtaket, for å unngå å ta overflødig materiale.

Kan servere deg: næringskjeden til jungelen

Sådd

På den annen side, når batteriet med biokjemiske tester for identifisering av den aktuelle mikroorganismen er så, er det viktig at sitratetesten er den første som inokulerer, for å unngå drag av protein eller karbohydrater fra et annet medium.

Under denne omstendigheten er det mulig å oppnå en falsk positiv, fordi noen av disse stoffene som blir introdusert ved feil vil bli metabolisert og vil forårsake en endring av pH.

En annen måte å unngå at rus er å brenne håndtaket og ta ny inokulum mellom en test og en annen.

Det må også utvises forsiktighet når du berører kolonien for å utføre inokulum, siden den bør unngås å dra en del av avlingsagaren som bakterier kommer fra, på grunn av det ovennevnte forklart.

I denne forstand anbefaler Matsen, Sherris og Branson å fortynne inokulumet i fysiologisk løsning før du inokulerer sitratprøven for å unngå overføring av andre karbonkilder.

Fargeintensitet

Det bør tas i betraktning at intensiteten til fargen som produseres når testen er positiv, kan variere i henhold til det kommersielle huset.

I tillegg er det mikroorganismer som er positive på 24 timer, men det er andre stammer som krever 48 timer eller mer for å produsere en pH -endring.

Referanser

1. BBL Simmons Citrate Agar Slants. BD kom seg.com.
2. Simmons Citrate Agar. Gjenopprettet fra Britanialab.com.