Emb

E lungerangular flekk. Coli på EMB Agar. Kilde: Eunice Laurent, CC BY-SA 4.0, Wikimedia Commons

Hva er agaren emb?

Han Emb Det er et selektivt og differensial fast kulturmedium som brukes til isolering av gram -negative baciller, hovedsakelig av enterobacteriacee -familien, og andre ikke -avstemt Gram -negative bacilli. Det er også kjent med forkortelsen EAM, som betyr eosina-azul av metylen.

Dette mediet ble opprettet av Holt-Harris og Teague i 1916. Den inneholder pepton, laktose, sukrose, dipotassiumfosfat, agar, eosin, metylenblått og vann. Det er veldig likt MacConkey Agar, spesielt hvis EMB -agaren av Levine brukes, som ikke inneholder sukrose.

Faktisk bestemmer hvert laboratorium om det fungerer med det ene eller det andre, siden de oppfyller den samme funksjonen, selv om de biokjemisk er forskjellige.

Den presenterer til og med den samme ulempen som klassisk MacConkey Agar i Swarmings produksjon for kjønn Proteus. Derfor, for å unngå dette fenomenet, kan konsentrasjonen av agaren økes med opptil 5%.

Basis

Selektiv

EMP -agaren er subtilt selektiv fordi den inneholder anilinisk (eosin og metylenblå) fargelegging, som fungerer som hemmere, og forhindrer veksten av de fleste gram -positive bakterier og noen krevende krevende krevende baciller.

Imidlertid har denne agaren ulempen med at noen gram -positive bakterier kan motstå tilstedeværelsen av hemmende stoffer og vokse som små fargeløse punktering, for eksempel Enterococcus faecalis og noe Staphylococcus.

Visse gjær kan også vokse, for eksempel Candida albicans Complex, som vil gi veldig små rosa kolonier. Clamidospores kan til og med utvikle seg fra denne gjæren hvis prøven blir sådd etter dybde.

Differensial

På den annen side er EMB Agar også et differensialmedium, siden disse fargestoffene sammen (eosin og metylenblått) har egenskapen til å danne et bunnfall i syre pH, derfor fungerer de som indikatorer på produksjonen av det samme.

Kan tjene deg: allometri

Derfor produserer svakt gjæring eller sukrose -bakterier lilla farger på 24 til 48 timer. For eksempel sjangre Klebsiella, Enterobacter og Serratia.

De bakteriene som sterkt gjærer laktose, for eksempel Escherichia coli, eller sukrose, som Enterokolittisk Yersinia enten Proteus Penneri, De danner et grønnaktig svart bunnfall, og gir et utseende av metallisk lysstyrke, karakteristisk i disse artene.

Det skal bemerkes at hvis EMB LEVINE -mediet brukes (uten sukrose), Enterokolittisk Yersinia og Proteus Penneri De vil produsere gjennomsiktige kolonier.

Bakterier som ikke gjærer laktose eller sukrose, næres av tilstedeværelsen av Peptonas, som gir aminosyrer og nitrogen som er nødvendig for bakteriell utvikling, og produserer gjennomsiktige kolonier. For eksempel sjangre Salmonella og Shigella, blant andre.

Det er også viktig å understreke det kjønn Acinetobacter Den kan presentere blå lavendelkolonier, selv om det ikke er laktosefermeter, eller sukrose, men de har egenskapen til å fikse metylenblå på celleveggen. Dette kan også skje med andre oksidative bakterier.

Forberedelse

Det originale dehydrerte mediet er lys beige. For å fremstille dette kulturmediet, må 36 gram av det dehydrerte mediet vektes og suspenderes i en løsning som inneholder en liter destillert vann.

Etter å ha forlatt blandingen 5 minutter i ro, ta Fixola til en varmekilde, og bland inn en kraftig og konstant måte til den koker og løses helt opp.

Deretter må det allerede oppløste kulturmediet steriliseres ved bruk av autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

Tiden ferdig, den fjernes fra autoklaven og la stå kort. Da er den fremdeles varm (45-50 ° C) mellom 15 til 20 ml agar på hver petrisk steril plate. Mediet må være blå lakmus.

Kan tjene deg: Amilase: Kjennetegn, klassifisering, struktur, funksjoner

Etter servert blir platene igjen litt avdekket til agaren avkjøles litt. Da blir de dekket og får stivne helt. Deretter bestilles de i en omvendt blodplater og lagres i kjøleskap (8 ° C til bruk.

Denne prosedyren utføres fortrinnsvis i en laminær strømningsklokke eller foran Bunsens lighter for å forhindre forurensende.

Det er viktig å huske på at hvert kommersielt hus vil indikere mengden som må veies for å forberede kulturmediet.

Den endelige pH i mediet må være 7.2 ± 0.2

applikasjoner

• Dette mediet brukes til å så urin og avføring eller noen form for kliniske prøver, spesielt hvis tilstedeværelsen av ikke -følgende gram -negative baciller er mistenkt, for eksempel bacilliene som tilhører Enterobacteriaceae -familien, som vokser veldig bra i dette mediet.
• De enteropatogene bakteriene i sjangrene Shigella og Salmonella De kjennetegnes med sine fargeløse eller litt ravkolonier.
• Andre ikke -fermenterende baciller vokser, for eksempel Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, blant andre.
• Dette mediet er også veldig nyttig i den mikrobiologiske analysen av mat og vann, siden det er ideelt for den komplette bekreftelsesfasen av bestemmelsen av coliforms, det vil si for å bekrefte tilstedeværelsen av OG. coli Fra grumsete EC -buljonger, fra den mest sannsynlige nummerteknikken (NMP).

QA

For å bekrefte at det nylig forberedte kulturmediet fungerer bra, kan kontroller sås for å observere kolonienes egenskaper og bekrefte at de gir som forventet.

For å gjøre dette, kan du bruke ATCC -stammer eller godt identifiserte stammer av OG. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella Flexneri, Pseudomonas aeruginosa og noen gram -positive bakterier, for eksempel S. aureus.

Det forventes at OG. coli generere godt utviklede blålige svarte kolonier med grønn metallisk glans. Samtidig som Enterobacter aerogenes og Klebsiella sp De må gi velutviklede slimete kolonier blåaktig svart.

Det kan tjene deg: Winograsky Column

For sin del, Salmonella Typhimurium og Shigella Flexneri De må utvikle store, fargeløse kolonier eller med en lys ravfarge.

Endelig sjangeren Pseudomonas aeruginosa Den vokser som fargeløse kolonier av uregelmessig størrelse, mens gram -positive bakterier skal bli helt hemmet eller vokse opp med veldig små kolonier.

Endelige hensyn

Noen ganger får sterilisering av metylenblått til å redusere, og observerer et oransje medium. For at metylenblått skal oksydes og gjenopprette den lilla fargen, må den blandes forsiktig til fargen gjenoppretter.

Etter sterilisert kan fargestoffet også presipitere, så det må blandes godt før betjener petriskallene.

Referanser

1. Eosina og metylenblå agar. Gjenopprettet fra kalab.com.
2. Levine e.M.B. (Med eosina og metylenblått). Gjenopprettet fra Britanialab.com.