Agar Count Standard Foundation, Preparation and Uses

Han Agar Standard Det er et solid, ikke -selektivt kulturmedium, designet for kvantifisering av den aerobe mikrobielle belastningen som er til stede i forbrukervann, avløpsvann, melkedrikker, blant annet mat. Dette mediet er også kjent som PCA Agar) for sitt forkortelse i engelsk plate count agar. Det ble opprettet i 1953 av Buchbinder, Baris og Goldstein.

Standard kontomedium er sammensatt av gjærekstrakt, triptein, glukose, agar og destillert vann. Denne formuleringen inneholder ernæringsmessige grunnleggende elementer som tillater utvikling av nåtiden, FN -krevende aerob mikrobiell belastning.

Desimale fortynninger for UFC -telling av standardtelling. Kilde: Quentin Geissmann [CC BY-SA 3.0 (https: // creativecommons.Org/lisenser/by-SA/3.0)]

Siden mediet ikke inneholder hemmere, kan bakterier utvikle seg uten noen begrensninger, så det er ideelt for de generelle koloniene teller. Imidlertid vil plakk kvantifiseringsteknikken ikke oppdage alle bakteriene som er til stede, men bare de som er i stand til å vokse under miljøforholdene som agaren blir utsatt for.

I denne forstand bestemmes vanligvis plakk kvantifiseringsteknikken av mengden aerobe bakterier av mesofilt type, det vil si de som er utviklet i temperaturer mellom 25 og 40 ° C, med en optimal veksttemperatur ved 37 ° C.

Denne bakteriegruppen er veldig viktig, fordi det er mest patogene bakterier for mennesket.

Det skal bemerkes at noen ganger interesse kvantifisere mengden psykrofile bakterier som er til stede i mat. Disse bakteriene er de som utvikler seg ved lave temperaturer (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

På samme måte kan termofile bakterier, som utvikler seg i et område mellom 50 ° C ved 80 ° C eller mer, være viktig i visse typer matvarer som hermetisert.

Mikrobiell kvantifisering er uttrykt i tykktarmsformende enheter (UFC) per gram eller prøve milliliter.

[TOC]

Basis

Standardkontoen er designet for å tillate den tilfredsstillende utviklingen av ikke -avanserte aerobe bakterier, siden gjærekstrakt, tripteine ​​og glukose gir de nødvendige næringsstoffene for god mikrobiell utvikling.

Det kan tjene deg: Alizarina: Kjennetegn, forberedelser, bruk og toksisitet

På den annen side har mediet en lysfarge og et gjennomsiktig utseende, så det er ideelt for visualisering av koloniene utviklet av den dyptgående såsmetoden (platesøl).

Det er også mulig kolonier som teller med den overflateplantede metoden med Drigalski Spatula.

Når den mikrobielle belastningen er høy, må desimale fortynninger av prøven under studien gjøres for å kunne utføre UFC -antallet.

Det skal bemerkes at dette mediet anbefales av American Public Health Association (APHA) for de aerobe messophils -antallet.

Forberedelse

Vei 23,5 gr av det dehydrerte mediet og oppløs i en liter destillert vann. For å løse opp fullstendig, bør blandingen varmes opp ved å vifte ofte til den koker. Følgende trinn avhenger av den plantede teknikken som skal brukes.

For platedumpingteknikken

Distribuer ved å gi 12 til 15 ml i testrør. Deretter steriliserer du i autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. La stivne vertikalt i form av en taco. Spar til bruk.

Smelt tacoen når den skal brukes. Når du kan holde den i Maria til 44-47 ° C mens prøvene er utarbeidet.

For overflate sådd

Steriliser mediet i autoklav ved 121 ° C og distribuer deretter 20 ml i petriske sterile plater. La stivne, investere og spare i kjøleskap til bruk.

Temper platene før du bruker. Medium pH må være 7,0 ± 0,2.

Bruk

Standardkontoen brukes i den aerobe mesofile telleteknikken under den mikrobiologiske analysen av vann og mat. Beretningen om de aerobe Mesophilos er nødvendig, siden den bestemmer helsekvaliteten til utvalget som studeres.

Bruken av denne teknikken (ved bruk av dette mediet) tillater makroskopisk visualisering av isolerte kolonier for kvantifisering.

Plateutladningsteknikk (sådd med dybde)

-Fremgangsmåte

Teknikken består av følgende:

1) homogeniser prøven for å omfordele bakteriene som er til stede.

2) En innledende suspensjon utføres i en steril flaske eller pose, og respekterer forholdet 10 gr eller 10 ml i 90 ml fortynningsmiddel (10^-1).

Det kan tjene deg: fikologi

3) Fra den første suspensjonen blir de relevante desimalfortynningene gjort avhengig av type prøve. Eks: (10^-2, 10^-3, 10^-4). Fortynninger utføres med Peptonada vann- eller fosfatbufferløsning.

For dette^-2 og så videre.

4) 1 ml av hver fortynning tas og plasseres på tomme sterile petrieplater.

5) Legg til hver plate 12 til 15 ml agar som tidligere er smeltet og hvilte ved 44 - 47 ° C.

6) Gi myke rotasjonsbevegelser til platene for å distribuere prøven ved siden av agaren jevnt og la størknet.

7) Invester platene og inkuberte ved 37 ° C i aerobiose i 24 til 48 timer.

8) Kulminerte tiden for å undersøke platene og telle koloniene i fortynningen som tillater den. De platene som har mellom 30 og 300 UFC er valgt for kontoen.

Tellingen kan gjøres manuell eller kan bruke Colony Accountant Team.

Verdiene som er tillatt av ML av utvalg kan variere fra et land til et annet i henhold til reglene de styres.

-UFC -beregning

Den generelle beregningen gjøres ved hjelp av følgende formel:

Formel for den generelle beregningen av UFC -kvantifiseringen. Kilde: National Drug Administration and Medical Technology (ANMAT). Mikrobiologisk analyse av mat, offisiell analytisk metodikk, indikatormikroorganismer. 2014 bind 3. Tilgjengelig på: Anmat.Gov.ar

Uttrykk resultatene i 1 eller 2 sifre, multipliser med passende base 10. Eksempel: Hvis resultatet er 16.545 er avrundet basert på tredje siffer på 17.000 og vil bli uttrykt som følger: 1,7 x 10⁴. Nå, hvis resultatet var 16.436 er avrundet til 16.000 og uttrykker 1.6 x 10⁴.

Overflate sådd teknikk

-Fremgangsmåte

-Inokulert med 0,1 ml av den direkte prøven hvis den er flytende, innledende suspensjon 10^-1 eller av påfølgende fortynninger 10^-2, 10^-3 osv., Midt på en standard kontoplate.

Kan tjene deg: Flora og Fauna av Tamaulipas: Mer representative arter

-Distribuere prøven med Drigalski Spatula eller glassstang i form av L. La stå i 10 minutter.

-Invester platene og inkuberte i aerobiose ved 37 ° C i 24 til 48 timer.

-Fortsett med å telle koloniene, velg de platene som er i et område mellom 20 - 250 UFC.

-UFC -beregning

For beregningen blir fortynningsfaktoren brukt, som er den omvendte. Antallet til 2 betydelige sifre er avrundet (avrunding i henhold til tredje siffer) og kommer til uttrykk i basiskraft 10. For eksempel, hvis 224 UFC telles i prøven uten fortynning (10^-1), 22 x 10 er rapportert¹  UFC, men hvis figuren var 225 rapporteres det 23 x 10¹ UFC.

Nå, hvis 199 UFC telles i fortynning 10^-3, 20 x 10 vil bli rapportert⁴ UFC, men hvis 153 UFC telles i samme fortynning vil bli rapportert 15 x 10⁴ UFC.

QA

Standard kontomedium kan evalueres ved hjelp av sertifiserte kjente stammer, for eksempel: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus Fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella Flexneri ATCC 12022.

Hvis kulturmediet er under optimale forhold, forventes tilfredsstillende vekst i alle tilfeller, med unntak av L. Fermentum som kan ha regelmessig ytelse.

For å evaluere steriliteten til kulturmediet, må en eller to plater av hvert forberedt parti (uten inokulering) ved 37 ° C i aerobiose i 24 timer inkuberes. Etter denne tiden skal ingen vekst eller fargeendring av mediet observeres.

Begrensninger

-Ikke smelt agaren mer enn en gang.

-Det forberedte mediet kan vare opptil 3 måneder så lenge det forblir i et kjøleskap og beskyttet mot lys.

-Dette mediet er ikke egnet for å kreve mikroorganismer, eller anaerober.

Referanser

1. National Administration of Medicines Food and Medical Technology (ANMAT). Mikrobiologisk analyse av mat, offisiell analytisk metodikk, indikatormikroorganismer. 2014 bind 3. Tilgjengelig på: Anmat.Gov.ar
2. Diffco Laboratories Francisco Soria Melgizo, S.TIL. Platetall agar. 2009. Tilgjengelig på: http: // f-soria.er
3. Conda Pronadisa Laboratories. Agar for standardmetoder (PCA) i henhold til APHA og ISO 4833. Tilgjengelig på: Condalab.com
4. Britania Laboratories. Agar Plate Count. 2015. Tilgjengelig på: Britanialab.com
5. Camacho A, Giles M, Ortegon A, Palao M, Serrano B og Velázquez eller. 2009. Teknikker for matmikrobiologisk analyse. 2. utg. Fakultet for kjemi, UNAM. Mexico. Tilgjengelig på: Depa.Fquim.Unam