Czapek hode, forberedelser, bruk og begrensninger

Han Czapek Agar (CZA) er et selektivt solid kulturmedium spesielt designet for dyrking av bakterier og saprofytter sopp. Det ble opprettet av botanikeren Friedrich Johann Franz Czapek, av polsk opprinnelse, og den amerikanske kjemikeren Arthur Wayland Dox; Det er grunnen til at denne agaren også er kjent som Czapek-Dox Half.

Det opprinnelige mediet var flytende, men senere ble agar tilsatt for å gjøre et solid medium. Czapek -mediet er sammensatt av natriumnitrat, bipotasisk fosfat, magnesiumsulfat, kaliumklorid, jernsulfat, sukrose, agar og destillert vann.

Czapek a. Aspergillus parasiticus b. Aspergillus fumigatus Kilde: a. Medmyco [CC By-SA 4.0 (https: // creativecommons.Org/lisenser/by-SA/4.0)]/ b. Foto: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

Czapek -agaren er 7.3, men det er en variant som 10% melkesyre tilsettes hvis pH er 3,5. Dette sure mediet brukes til dyrking av acidofile mikroorganismer.

På den annen side modifiserte noen kommersielle hus sammensetningen av Czapek -agaren ved å endre magnesiumsulfat og bipotasisk fosfat med glyceofosfat; Denne modifiseringen forhindrer bunnfall av magnesiumfosfat observert med den konvensjonelle formelen. På samme måte er det en annen variant som gjærekstrakt blir lagt til.

Til slutt anbefales Czapek Agar av American Public Health Association APHA for studiet av Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp og Penicillium sp. Disse artene er preget av å være miljømikroorganismer og opportunistiske patogener.

[TOC]

Basis

Dette mediet inneholder sukrose; Dette karbohydratet fungerer som en karbonkilde, mens natriumnitrat er kilden til nitrogen, men i motsetning til andre måter nitrogenet er uorganisk type.

Av denne grunn anses Czapek -mediet som selektivt, fordi det bare kan utvikle mikroorganismer som er i stand til å bruke uorganiske forbindelser som den eneste kilden til nitrogen.

Som et regulatorisk stoff i medium osmolaritet er det bipotasiske fosfatet. På den annen side gir magnesiumsulfat, kaliumklorid og jernsulfat essensielle mineraler for vekst av saprofytter mikroorganismer (fritt liv). Med denne formelen dannes et bunnfall av magnesiumfosfat.

Det kan tjene deg: Agar Standard Account: Foundation, Preparation and Uses

Endelig er agar-adding forbindelsen som gir den faste konsistensen til miljøet, og vannet er løsningsmidlet for alle komponenter.

Med den modifiserte Czapek -agarformelen er det ingen utfellingsdannelse og forbedrer veksten i veksten av noen sopp.

Den ekstreme surheten til den czapek sure agar gjør dette til et mer selektivt middel, og tillater bare vekst av acidofile mikroorganismer, i stand til å bruke uorganisk nitrogen. Mens Czapek-Levadura Agar forbedrer ytelsen til visse sopp.

Forberedelse

Halv Czapek-Dox

Vei 49 gr dehydrert kultur og oppløs i destillert vann. Påfør varme for å koke. Rist blandingen ofte til den er helt oppløst.

-Czapek Agar

Fordel blandingen oppløst i rør og autoklavat ved 121 ° C i 15 minutter. Når du fjernes fra autoklaven, homogeniser før leggetid og la størkning.

-Czapek agarplater

Autoklavat blandingen oppløst ved 121 ° C i 15 minutter, og når du lar avkjøles ved 50 ° C, homogeniserer og hellet 20 ml i petriske sterile plater. La stivne, investere og spare i kjøleskap til bruk.

PH må være 7,3 ± 0,2. Fargen på det dehydrerte mediet er hvit og tilberedt er lett rav, litt skyet på grunn av tilstedeværelsen av et flokkulant bunnfall.

Halv czapek en pH -syre

Forbered deg som beskrevet, men tilsett 10 ml steril steril syre til 10% for hver liter tilberedt medium. Det modifiserte Czapek -mediet må være ved pH 3,5 ± 0,2.

Halv modifisert Czapek

Vei 45,4 gr av det dehydrerte mediet og oppløs i 1 liter vann. Resten av forberedelsene er lik den som er beskrevet ovenfor. Fargen på det dehydrerte mediet er hvit og forberedt er hvitaktig farge. Den endelige pH i mediet er 6,8 ± 0,2.

Det kan tjene deg: Vimentin: Kjennetegn, struktur, funksjoner og bruk

Halve Czapek-Levadura

Også kalt Czapek-Extract of Yeast (CYA). Inneholder elementene i den klassiske Czapek -agaren pluss gjærekstrakt.

Bruk

Czapek -mediet brukes til å se etter saprofytter mikroorganismer i jordprøver, grønnsaker, korn, luft, insekter, blant andre.

Czapek En sur agar brukes til vekst av acidofile mikroorganismer, mens modifisert Czapek -agar er spesielt nyttig for dannelse av klamidosporer i komplekse arter Candida albicans.

Endelig er Czapek -LeVadura Agar veldig nyttig for isolering av Aspergillus og Penicillium.

Sådd

-Czapek Agar

For å søke actinomycetes på bakken, fortsett som følger: Prøven med vannfenolisert med 30 minutter blir behandlet og deretter blir 1 ml av suspensjonen i Czapek -agaren plantet. Inkuberer ved 28 ° C i 5 til 7 dager.

For grønnsaks-, korn- og insektprøver plasseres de direkte på agaren. Fortynninger kan også gjøres og så 0,1 ml på overflaten av agaren.

-Modifisert Czapek Agar

For sådd brukes en rett hånd eller nål, den er gjennomsyret med vattpinnen og inokulerer scoopen som lager en punktering til den berører basen på platen. Inkuber i 24 timer ved 28 ° C og undersøk med et mikroskop over og under platen for å observere om muslen.

Inkubasjonstemperatur og tid

Temperatur og inkubasjonstid varierer avhengig av type mikroorganisme som søkes å isolere. Vanligvis blir platene inkubert med en til to uker i et temperaturområde fra 20 til 25 ° C.

Imidlertid er det spesifikke forhold for noen stammer. For eksempel har de fleste arter av slekten Aspergillus optimal vekst ved 30 ° C; derimot TIL. Fumigatus vokse ved 50 ° C.

Når det gjelder inkubasjonstid, er det imidlertid normalt en eller to uker Candida albicans Det kan utvikle seg på 24 til 48 timer ved 25 ° C.

Kan tjene deg: lipogenese: Kjennetegn, funksjoner og reaksjoner

Kjennetegn på noen kolonier i dette mediet

-Penicillium atravenetum

Det finner sted i 12 dager med inkubasjon ved 27 ° C. Koloniene er små (25 mm).

Koloniene ser velist ut, med en hvit definert kant og i sentrum presenterer den en grønnaktig blå tone som er enig til å bli grå. Det motsatte av kolonien er oransje, og plasserer midt i samme farge ved pigmentproduksjon.

-Aspergillus Niger

Den utvikler seg med et hvitt til gult mycel og svarte sporer.

-Candida albicans

Kremete beige lette kolonier utvikler seg klare. I den modifiserte Czapek -agarformformen.

-Aspergillus parasiticus

Et mørkegrønt mycel utvikler seg på 7 dager ved 25 ° C.

QA

For å evaluere kvaliteten på kulturmediet, kan sertifiserte kontrollstammer sås, for eksempel: Aspergillus Niger Mkta 16404, Candida albicans Mkta 10231.

Aspergillus Niger utvikler et hvitt til gult mycel og svarte sporer på omtrent 5 dager, mens Candida albicans Det vil ha tilfredsstillende vekst i 24 timers inkubasjon ved 25 ° C; Koloniene er kremfarge.

Begrensninger

Noen studier har avdekket at for utvinning av actinomycetes, er agaren med den beste ytelsen pave Dextrose Agar, og etterlater Czapek -agaren på andreplass, men for utvinning av Aspergillus og Penicillium er Czapek Agar den som gir den største utvinningen vurdere.

Referanser

1. Dávila M, et al. Antagonistiske aktinomycetes mot fytopatogene sopp av landbruksbetydning. Rev. Mex. vitenskap. Jordbruk 2013, 4 (8): 1187-1196. Tilgjengelig på: Scielo.org.
2. Luna M, Lozada og, hvete. Isolasjon av stammer av Aspergillus Niger, Ocratoxin A Produsenter, i Café Verde (Arabica Coffea) lagret. Rev. Mex. MIC . 2010; 32: 63-68. Tilgjengelig i.Scielo.org.
3. Wikipedia bidragsytere. Czapek Medum. Wikipedia, gratis leksikon. 13. januar 2019, 20:30 UTC. Tilgjengelig på: i.Wikipedia.org
4. Conda Pronadisa Laboratories. Modifisert Czapek-Dox Agar. Tilgjengelig på: Condalab.com
5. Mikrokitdyrkingsmedier. Czapek-Dox Agar. Godponible in: Media Cultutive.com