Hektoen Foundation, forberedelse og bruk

Han Haktoen agar o agar hektoen enterisk er et solid, selektivt og differensialkulturmedium. Det ble opprettet ved Hektoen Institute av King og Metzger for isolering av enteropatogene bakterier fra Shigella og Salmonella -sjangre.

Mediet er sammensatt av peptonprotein, gjærekstrakt, gallesalter, laktose, sukrose, salicin, natriumtiosulfat, natriumklorid, jerncitrat, ammoniumcitrat, bromoolblått, syre fuchsin og agar og agar. Denne formuleringen gjør det mulig å skille Shigella- og Salmonella -sjangrene fra resten av bakteriene som er i stand til å vokse i dette mediet.

TIL. Hektoen Virgen B Ague B. Haktoen agar sådd. Kilde: Flickr.com/den originale opplasteren var Philippinjl på French Wikipedia. [CC By-SA 2.0 fr (https: // creativecommons.Org/lisenser/by-SA/2.0/fr/gjerning.i)]

Selv om det er andre medier med samme funksjon som Hektoen Agar, har dette en større fordel sammenlignet med andre medier, spesielt når de vil gjenopprette arter av Shigella.

Arten av begge slektene gir alvorlige gastrointestinale problemer hos mennesket på grunn av forbruk av forurenset mat; Derfor er overføringen fekal - oral. Det er grunnen til at bruken av Hektoen Agar hovedsakelig er indikert i den mikrobiologiske analysen av avføring og matprøver.

[TOC]

Basis

Hektoen Agar inneholder peptoner og gjærekstrakt som en kilde til næringsstoffer, og gir de essensielle elementene for mikrobiell utvikling.

Imidlertid har den også gallesalter som virker som hemmer veksten av noen bakterier, spesielt gram positive og noe gramnegative. Det er av denne grunn at det regnes som et selektivt medium.

På den annen side er Hektoen Agar et differensialmedium. Denne egenskapen tildeles ved tilstedeværelsen av gjærbare karbohydrater som laktose, tegning og salicyin, ved siden av pH -indikatorsystemet, representert med bromotimolblått og sur fuchsin.

Kan tjene deg: Sismonetia

Alle bakterier som er i stand til å vokse i dette mediet som ikke tilhører slekten Salmonella og Shigella vil utvikle laks- eller oransje kolonier bortsett fra slekten Proteus. Dette skyldes gjæringen av en eller flere av karbohydratene som er til stede, som surifiserer mediet, noe som får pH -indikatoren til å vri.

På den annen side er ikke slekten Shigella og Salmonella i stand til å gjære noen av karbohydratene som er til stede, og bruker bare Peptones som energikilde, som alkaliserer mediet og derfor er koloniene deres grønnblå.

Også i dette mediet kan bakterier som er i stand til å danne hydrogensulfid (fargeløs gass) skilles ut i dette mediet. Natriumtiosulfat fungerer som en sulfidkilde mens jerncitrat er det avslørende middelet. Begge forbindelsene muliggjør dannelse av et svart bunnfall av jernsulfid som viser reaksjonen.

Det svarte bunnfallet i sentrum av kolonien med en gjennomsiktig glorie rundt gir et utseende av fiskeøye. Denne funksjonen antyder tilstedeværelsen av Salmonella -sjangeren.

Til slutt opprettholder natriumklorid den osmotiske balansen og agaren gir solid konsistens til miljøet.

Forberedelse

Vei 76 gr dehydrert medium og oppløs i en liter destillert vann. Se opp blandingen og la deretter ligge i ro i 10 til 15 minutter. Den kan varmes opp og koker, og gir roterende bevegelser til den totale oppløsningen. Dette mediet er ikke sterilisert i autoklav.

Når mediet når en omtrentlig temperatur på 45 ° C, helles et volum på 20 ml i petriske sterile plater direkte.

Kan tjene deg: Befolkningsdynamikk

Agaren er stivnet. På den tiden er de allerede klare til bruk. Det anbefales å bruke dem umiddelbart. Hvis ikke mulig, oppbevares de i kjøleskapet til deres bruk.

Platene må fjernes på forhånd fra kjøleskapet før de så dem for å ta omgivelsestemperatur.

Medium pH må være 7,5 ± 0,2. Fargen på det dehydrerte mediet er lilla og tilberedt farge er brungrønn.

Bruk

Bruken av Hektoen Agar anbefales for søket etter bakterier av slekten Shigella og Salmonella i mat- og matprøver.

Muligheten for å isolere disse bakteriene økes betydelig hvis prøven i spesielle buljonger tidligere er beriket.

Inokulumet må være sterk og plantingen gjøres ved stressing. Platene inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer i aerobiose.

Inkubasjon i 48 timer anbefales fordi koloniene egenskaper er tydeligere for tolkning og differensiering på dette tidspunktet.

QA

For å utføre kvalitetskontroll til dette mediet, brukes sertifiserte bakteriestammer, for eksempel: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella Flexneri ATCC 12022 og Shigella Sonnei ATCC 25931.

De forventede resultatene er som følger: Salmonella typhimurium og  Salmonella enteritidis De må utvikle grønne - blålige kolonier med eller uten svart senter. Mens Shigella -arter vil vokse som grønne - blålige kolonier.

Du kan også inkludere stammer av Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 og Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Kan tjene deg: Lactosado -buljong

I disse tilfellene er egenskapene som er observert følgende: OG. coli og K. pneumoniae De vil utvikle seg i dette medium koloniene fargelaks til oransje, med et bunnfall av samme farge rundt. Mens Proteus vil utvikle blågrønne kolonier med eller uten svart sentrum.

Samtidig som S. aureus og  OG. Faecalis De må hemmeres, noen ganger OG. Faecalis klarer å vokse som gule, veldig små kolonier.

På den annen side, fordi dette mediet ikke er sterilisert i autoklave, er det viktig å evaluere steriliteten til mediet. Derfor må de fra hvert forberedt parti inkuberes fra en til to plater uten å inokulere 37 ° C i 24 timer i aerobiose.

Det er tydeligvis forventet at ingen vekst på platen.

Begrensninger

-Proteus -arter kan utvikle seg i dette mediet, og egenskapene til koloniene kan forveksles med Salmonella eller Shigella -arter. Av denne grunn må enhver mistenkelig koloni bekreftes med biokjemiske tester.

-Det er nødvendig å følge bruken av dette mediet med andre mindre selektive aldre, fordi hvis den etterspurte mikroorganismen er i lave konsentrasjoner, kunne det ikke utvikle seg i dette mediet.

-Ikke overopphetet under forberedelsene, siden overdreven varme endrer miljøets sammensetning.

-Uvanlig kan kolonier av laktosegjærende salmonella vises som kan gå upåaktet hen.

Referanser

1. Wikipedia bidragsytere. Hektoen Enterric Agar. Wikipedia, gratis leksikon. 13. mars 2019, 23:38 UTC. TILGJENGELIG I: .Wikipedia.Org/ tilgang 16. mars 2019.
2. BD Laboratories. BD Hektoen Enterric Gang (han gank). 2013. Tilgjengelig på: BD.com
3. Britania Laboratories. Hektoen Entérico Agar. 2015. Tilgjengelig på: Britanialab.com
4. Diffco Laboratories Francisco Soria Melgizo. Haktoen agar. Tilgjengelig på: F-Soria.er
5. Difco & BBL Manual, Hektoen Enterric Agar. 2. utgave. Tilgjengelig i: BD.com/Europa