Vismut sulfittbyrå, forberedelse og bruk

Han vismut sulfittagar Det er en solid, selektiv og differensialkultursmidler, spesielt formulert for isolering av Salmonella enterica subgrupo enterica typhi seretypo, Blant andre arter av Salmonella. Miljøet er kjent som BSA er enig i engelsk vismut sulfittagar.

Den originale Bismuth Sulphite Agar -formelen ble opprettet i 1927 av Wilson og Blair (glukose -vismut sulfitt jernmedium); Dette inneholdt natriumsulfitt, glukose, vismutløsning, ammoniumcitrat, jernholdig sulfat og agar-tilsetning.

48 -timers vekst av Salmonella SP -inkubasjon i vismut sulfittagar. Kilde: Pixnio.com forfatter: dr. W. R. Erving, USCDCP

I dag er det en modifisering av det originale mediet, sammensatt av kjøttekstrakt, peptoner av kjøtt og kasein, vismut sulfittindikator, glukose, desodiumfosfat, jernholdig sulfat, lysegrønn og agar-agar.

Det er mange måter for isolering av Salmonella -arter, men når det gjelder å gjenvinne Typhi -serotypen, presenterer vismut -sulfittagaren en bemerkelsesverdig fordel i forhold til dem, siden en veldig lav eller null utvinning av denne mikroorganismen oppnås i flertallet.

Imidlertid er det nødvendig å bruke mer enn en type medium når det gjelder å isolere enteropatogen, fordi vismut sulfittagar er mindre effektiv for andre Salmonella -arter og for Shigella -slekten, som er hemmet eller utvikler seg veldig dårlig i denne agaren.

Det skal bemerkes at Typhi -serotypen av alle arter av Salmonella er en av de viktigste enteropatogener hos mennesket, og dette er det eneste reservoaret. Denne serovariteten produserer tyfusfeber, gastroenteritt, bakterieremia og septikemi.

Av denne grunn er det relevant å inkludere denne agaren når prøver av vann, avføring eller mat blir analysert der din tilstedeværelse er mistenkt.

[TOC]

Basis

Som de fleste dyrkingsmedier inneholder vismut sulfittagar ernæringsmessige stoffer for å fremme bakteriell utvikling, for eksempel peptoner og kjøttekstrakt. På samme måte fungerer glukose som en kilde til energi og karbon.

Kan tjene deg: biogenetiske elementer

Nå vil ikke alle bakterier vokse i dette mediet, siden vismut sulfittagar er et selektivt medium. Dette inneholder forbindelser som hemmer veksten av gram positive mikroorganismer og visse gramnegative bakterier. Disse forbindelsene er: vismut sulfittindikatoren og lysegrønn.

På den annen side opprettholder desodiumfosfat osmolariteten og pH i mediet.

I tillegg er Bismuth Sulphite Agar et differensialmedium takket være tilstedeværelsen av jernholdig sulfat, som viser dannelsen av H₂S.  H₂S dannet av bakterier reagerer med jernholdig sulfat og danner et tydelig synlig uoppløselig bunnfall.

Endelig gir Agar -Agar solid konsistens til miljøet.

Forberedelse

Vei 52,3 gr av det dehydrerte mediet og oppløs i en liter vann. Varm for å koke blandingen i 1 minutt med hyppig omrøring, til den totale oppløsningen. Ikke overopphetes for mye. Dette mediet er ikke sterilisert i autoklav, fordi den ekstreme varmen skader kulturmediet.

La avkjøle ved 45 ° C og riste før servering på petrisk sterile plater. Det anbefales å lage plater med god tykkelse. For dette må 25 ml helles i hver plate. La stivne. Som det er et middel som ikke er sterilisert, er det normalt at den umiddelbare bruken blir foreslått.

En studie av D'Aust i 1977, viste imidlertid at det er bedre utvinning av Salmonella typhimurium og Salmonella enteritidis Som vismut sulfittmedium aldre, påvirkes ikke ytelsen for serovaries Typhi og Parathyphi b.

D'Aous anbefaler å bruke platene til kjølingens dag 4, selv om det advarer om at når mediet eldes selektiviteten avtar, utvikler utviklingen lettere stammer av Proteus vulgaris.

Det er grunnen til at det, for veldig forurensede prøver, for eksempel avføring, er å foretrekke å bruke det nylig forberedte mediet. Ellers bruk til dag 4 av forberedelsene. Andre forfattere anbefaler å bruke platene dagen etter forberedelsen, lagret i kjøling.

Kan tjene deg: uracil: struktur, funksjoner, egenskaper, syntese

Nedkjølte tallerkener skal være temperament før bruk. Medium pH må være 7,5 ± 0,2. Fargen på det ubetalte mediet er beige og tilberedt er Opalescente grønnaktig grå.

applikasjoner

Blant prøvene som kan sås i dette mediet er avføringsprøver, forbruksvann eller mat og mat.

For å forbedre isolatene anbefales det å utføre en behandling før berikelse med laktosebuljong og etter berikelse med tetasjonsbuljong eller selenito buljong cystin, før jeg så i vismut sulfittagar.

Platene inkuberes ved 35 ° C ± 0,2 i 24 til 48 timer, i aerobiose.

Kjennetegn ved koloniene i vismut sulfittagar

Koloniene til Salmonella typhi De sees vanligvis i denne agaren på 24 timer med et svart senter og omgitt av en lysegrønn glorie. Mens, i 48 timer, svinger svart helt på grunn av dannelse av hydrogensulfid.

Salmonella parathyphi a presenterer kolonier med varierende egenskaper. Etter 18 timers inkubasjon kan svarte, grønne eller gjennomsiktige kolonier observeres, med mucoid utseende. Mens de etter 48 timer blir de observert helt svarte og noen ganger med en uttalt metallisk lysstyrke.

S. Parathyphi a Det har en tendens til å tømme mediet rundt kolonien.

Salmonella sp Black eller Greyercolonias Grounds, med eller uten metallisk lys, blir maying overflaten eller ikke.

Koliformstammer er vanligvis helt hemmet, men hvis de vokser utvikler de seg som ugjennomsiktige grønne eller brune kolonier uten metallisk lysstyrke. Ikke farge mediet rundt kolonien.

Begrensning

-Veldig svake inokulum kan forårsake kolonier av Salmonella typhi lysegrønn, går upåaktet hen og rapporterer kulturen som negativ.

Kan tjene deg: filialer av fysiologi

- Vismut sulfittagar kan hemme utvinningen av noen salmonellaarter som som som S. Sendai, s. Berta, s. Gallinarum, s. abortus-equi.

-Dette mediet hemmer de fleste av artene til Shigella -slekten.

- S. Typhi og s. Arizonae De kan gi veldig like kolonier.

-Coliformene produsert av h₂S som Proteus og Citrobacter produserer kolonier som ligner på Salmonella, så det er nødvendig å utføre biokjemiske identifikasjonstester.

-En god Estria må gjøres for å få isolerte kolonier; Det er den eneste måten å observere de typiske egenskapene til koloniene i slekten Salmonella.

QA

For sterilitetskontroll blir en plakk inkubert uten å inokulere ved 37 ° C, er det forventet at det ikke er vekst eller fargeendring.

For kvalitetskontroll kan du så kjente stammer som:

Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhi ATCC 19430, Shigella Flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Det forventes at Escherichia coli og Shigella Flexneri er delvis hemmet og utvikler henholdsvis grønnaktige og brune brune kolonier. Mens begge Salmonglars må ha utmerket utvikling med svarte kolonier med metallisk lysstyrke, og til slutt Enterococcus faecalis Må bli helt hemmet.

Referanser

1. Wilson, w., & E. M. McV. Blair. Bruk av en glukose -vismut sulfitt jernmedium for isolering av B. Typhosus og B. Proteus. Journal of Hygiene, 1927; 26(4), 374-391. Innhentet fra .Jstor.org
2. D'Aust Jy. Effekt av lagringsbetingelser av ytelsen til vismut sulfittagar. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122-124. Tilgjengelig i: NCBI.NLM.NIH.Gov
3. IVD Laboratories. Vismut-sulfite agar ifølge Wilson-Blair. 2009. Tilgjengelig på: vismuthsulfitagar_span_jan_2009%20 (2).PDF
4. Himedia Laboratories. Vismut sulfittagar. 2017. Tilgjengelig på: Himediabs.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 Ed. Pan -American redaksjon S.TIL. Argentina.
6.  Morales R, fra La Cruz D, Leyva G og Ybarra M. Bakteriologisk kvalitet på rå geitemelk produsert i Miravalles, Puebla. Rev Mex of Ing Chem 2012; 11 (1): 45-54