Agar tsi hva er, fundament, forberedelse, bruker

Han Tsi Agar o Triple Sugar Iron Agar er et solid kulturmedium som fungerer som en biokjemisk test for å veilede den første identifiseringen av Gram -negativ bacilli. Det er basert på bevis.

Sammensetningen og grunnlaget er veldig lik Kigler Hierro -testen, med forskjellen som sistnevnte bare inneholder glukose og laktose. På den annen side, - som navnet indikerer - trippel sukkerjernsagar inneholder tre gjærbare karbohydrater: glukose, laktose og sukrose.

I tillegg har TSI -mediet fire proteinderivater som gjør det til en veldig næringsrik agar: gjærekstrakt, kjøttekstrakt, pepton og peptonprotein. Den inneholder også jernholdig ammoniumsulfat, natriumtiosulfat, natriumklorid, fenolrød og agar.

Manglende evne til en mikroorganisme i å gjære glukosen som er til stede i miljøet, utelukker umiddelbart den fra å tilhøre enterobacteriaceae -familien. Derfor er denne testen viktig for å avgjøre hvilken identifikasjonsrute som skal tas for å bestemme kjønn og art.

Hvert laboratorium bestemmer om det fungerer med TSI Agar eller med Kligler Hierro.

Basis

Hver av forbindelsene oppfyller en funksjon i mediet.

Natrium og agarklorid

Natriumklorid er nødvendig for å opprettholde den osmotiske balansen i mediet. Mens agaren gir deg solid konsistens.

PH -indikator (fenolrød)

Den tilberedte medium pH er balansert ved 7,3 og pH -indikatoren (fenolrød) blir gul under 6,8. Dette betyr at små mengder syrer produsert ved gjæring av sukker vil vri det røde oransje til gult medium.

Hvis det ikke forekommer gjæring, vil det være alkalisering av mediet på grunn av bruk av peptoner, og dreier seg fra rød-oransje til sterk rød.

Proteinderivater (gjærekstrakt, kjøttekstrakt, pepton og peptonprotein)

Når bakterier metaboliserer proteinene som er til stede i TSI -agaren, produseres aminer som alkaliserer mediet (hovedsakelig på nivået av rammen), fordi reaksjonen trenger oksygen. Aminene gjør rammen til sterk rød.

Men dette vil avhenge av evnen til å gjære bakterier eller ikke karbohydrater.

Karbohydratfermentering (glukose, laktose og sukrose)

Studien av fermentering av sukker kan gi flere bilder, og hver enkelt tolkes annerledes. Tolkningen av testen deler mikroorganismer i 3 kategorier: ikke -glukosefermenter, ikke -laktosegjærere og laktose/sukrose gjærere.

Det skal bemerkes at mengden glukose i midten er begrenset, mens konsentrasjonen av laktose og sukrose er 10 ganger høyere.

Bakterier i enterobacteriaceae -familien og andre glukosefermenterende mikroorganismer vil begynne å gjære dette sukkeret fordi det enkleste karbohydratet er å oppnå energi for å oppnå energi.

Kan tjene deg: Isotonisk løsning: Komponenter, forberedelser, eksempler

På den annen side er laktose og sukrose komplekse karbohydrater som må dekomponeres og bli glukose, slik at de kan komme inn i Embden-Meyerhof-syklusen.

-Ikke -fermenterte mikroorganismer

Når den inokulerte mikroorganismen ikke er i stand til å gjære glukose, kan mye mindre gjære andre karbohydrater. Derfor dannes ikke syrer her, men det er amindannelse i rammen på grunn av bruk av peptoner.

I dette tilfellet blir skråpen en sterk.

Tolkning: K / K betyr alkalisk skrå / alkalisk eller nøytral bakgrunn

I bildet funnet i begynnelsen av artikkelen, se bildet av røret d.

Dette resultatet indikerer at mikroorganismen ikke tilhører enterobacteriaceae -familien.

-Ikke -fermentary mikroorganismer av laktose/sukrose

Hvis bakteriene er i stand til å gjære glukose, men ikke laktose eller sukrose, vil følgende skje:

Bakteriene vil konsumere all glukosen som er til stede etter omtrent 6 til 8 timer, og kunne forsurende både rammen og tacoen; det vil si at agaren vil ha blitt helt gul. Men når glukose er utmattet og gitt umuligheten av å bruke laktose og sukrose, vil bakteriene begynne metabolismen av proteiner.

Denne reaksjonen trenger oksygen, så PEPTONAS -nedbrytning oppstår på overflaten (Bezel). Aminene produserte alkleiniserer den svingete gule til rød. Denne reaksjonen er vist ved 18 til 24 timers inkubasjon.

Tolkning: K/A betyr alkalisk ramme og syretaco.

I bildet funnet i begynnelsen av artikkelen se bildet av rør B.

-Fermentary/sukrose Fermenting Microorganisms

Mikroorganismer som er i stand til å gjære laktose og sukrose, kan åpenbart gjære glukose. Etter at den minimale mengden glukose som er til stede i mediet er utmattet, begynner den dannede pyruvaten å metabolisere for å danne syrer gjennom Krebs aerobe syklus, og i perioden 8 til 12 timer vil hele mediet være gult.

Hvis bakteriene er i stand til å utfolde laktose eller sukrose, vil det fortsette å bli produsert syrer, og etter 18 til 24 timer vil hele røret - Bisel og taco- fortsette gult.

Det skal bemerkes at bruken av glukose tar.

Tolkning: A/ A betyr syre skrå/ syre bakgrunn. Kan presentere gass eller ikke.

I bildet funnet i begynnelsen av artikkelen, se bildet av røret a.

Kan tjene deg: cytosin: struktur, funksjoner, egenskaper, syntese

Gassproduksjon

Noen mikroorganismer er i stand til å produsere gass under sukkerfermentering. Gassen er vist i røret på grunn av trykket det utøver inne i agaren. Trykket forårsaker dannelse av bobler eller forskyvningen av agaren. Noen ganger kan gassdannelse brudd i miljøet.

Det er viktig at når jeg så TSI -mediet, blir punkteringen gjort rent gjennom midten av agaren til den når bunnen av bunnen. Hvis punkteringen avviker til veggene i røret, kan det forårsake falske positiver i gassproduksjonen, siden den vil slippe unna kanalen som er dannet feilaktig.

Gassproduksjon, så vel som reaksjoner som oppstår i agarfeltet, trenger oksygen, derfor anbefales det at røret dekkes med bomullsdeksel, og hvis baquelite lokk brukes, skal det ikke justeres fullstendig.

Gassproduksjon er rapportert som positiv (+) eller negativ (-).

Natrium tiosulfat og jernholdig ammoniumsulfat (hydrogensulfidproduksjon)

Bakterier som er i stand til å produsere hydrogensulfid (fargeløs gass), ta svovel av natriumtiosulfat som er til stede i mediet. Når H er dannet₂S reagerer med jernholdig ammoniumsulfat, produserer jernsulfid (tydelig synlig svart bunnfall).

H₂S rapporteres som positiv (+) eller negativ (-).

I bildet funnet i begynnelsen av artikkelen se bildet av rør C.

Forberedelse

Vei 62,5 gr av halvsugar jernagar (TSI) dehydrert og oppløses i en liter destillert vann.

Varmt for å løse opp agaren. Kok opp. Fordel 4 ml av mediet i 13/100 testrør med bomullslokk.

Steriliser i autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og la stå skråstilt. Det bør tas vare at både basen og skråningen har samme avstand.

Oppbevares i et kjøleskap på 2-8 ° C. La et temperament før såing av bakteriell belastning.

Fargen på det dehydrerte mediet er lys beige og det forberedte mediet er rød-oransje

Den endelige pH for det fremstilte mediet er 7,3 ± 0,2.

applikasjoner

TSI -testen er mye brukt på mikrobiologilaboratorietivå. Denne testen er uunnværlig for å veilede typen test som må brukes for å nå identifiseringen av slekten og arten. Din gode utførelse og tolkning kan spare materiale og arbeid.

Hvis resultatet er en TSI K/K K og cytokromoksidasetesten gir positive, bør tester brukes for å identifisere ikke -fermenterende Gram -negative bacillier, som Pseudomonas, Alkaline, Achromobacter, Burkholderia, blant andre sjangre. Hvis det er negativ oksidase, er den orientert mot Acinetobacter, Stenotrophomonas, etc.

Det kan tjene deg: Totipotensialitet: Historie, egenskaper og betydning

På den annen side, hvis en TSI A/A eller K/A oppnås og cytokromoksidasetesten er negativ, reduserer de nitrater til nitritter, vil vi være sikre på at det er en mikroorganisme som tilhører Enterobacteriace -familien. I dette tilfellet vil identifikasjonsveien være orientert mot spesifikke tester for denne gruppen av bakterier.

På den annen side, hvis et bilde K/A eller A/A oppnås og cytokromoksidasetesten er positiv, vil tilleggstestene bli rettet mot identifisering av gjæringsstammer som ikke tilhører Enterobacteriaceae -familien, for eksempel: Aeromonas , Plesiomonas, Vibrio og Pasteurella.

En TSI med hydrogensulfid, negativ oksidase, vil lede følgende sjangre fra Enterobacteriaceae -familien: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella eller Salmonella.

En TSI med knapp eller moderat hydrogensulfid i det alkaliske rammen med alkalisk bakgrunn og en positiv oksidase, vil lede tester for identifisering av ikke -fermenterende Gram -negative bacilli som produserer produsenter av H₂S, som Shewanella putrefaciens.

Endelig kan TSI brukes til å undersøke produksjonen av hydrogensulfid i gram positive baciller, spesielt når det er mistenkt for Erysipelothrix Rhusiopathiae.

Sådd

TSI -mediet må inokuleres med rene kolonier, isolert i primære eller selektive avlinger. Hvis kolonien er hentet fra selektive midler som ble sådd med prøver med blandet flora, må det bare tas forsiktighet fra overflaten, siden i den nedre delen av kolonien kan det være levedyktige stammer hemmet i det mediet.

Derfor skal håndtaket aldri avkjøles i et selektivt medium og deretter ta kolonien og inokulere et TSI -medium.

Sådden vil bli gjort med en rett eller nål. Punktering vil bli utført, og pass på at det er gjennom midten av midten til det når bunnen, og deretter er sådden ferdig med å inokulere sikksakk -formet overflate. Ikke lag to punkteringer.

Inkuber ved 37 ° C ved aerobiose i 18-24 timer. Tolke på dette tidspunktet, verken før eller etter.

Begrensninger

TSI -testen skal leses mellom 18 til 24 timers inkubasjon. En lesning før denne tiden kan gi en falsk gjæring a/a. Mens en lesning etter denne tiden kan føre til et falskt negativt bilde av ikke -fermenter, på grunn av forbruket av peptoner som alkaliserer mediet.

Referanser

1. Britania Laboratories. TSI Agar (Triple Sugar Iron Agar). 2015. Tilgjengelig på: Britanialab.com
2. BD Laboratories. Triple Sugar Iron Agar (TSI Agar). 2003. Tilgjengelig på: BD.com