Urea buljong hva er, fundament, forberedelse, bruker

Han Urea buljong Det er et flytende kulturmedium, som brukes til å demonstrere tilstedeværelsen av ureasa -enzym i visse mikroorganismer. Ureasa er et mikrobielt enzym som oppstår på en konstitutiv måte, det vil si at det syntetiseres uansett eller ikke ved å være underlaget som det fungerer.

Ureasa -funksjonen er relatert til nedbrytning av organiske forbindelser. Ikke alle mikroorganismer er i stand til å syntetisere dette enzymet, derfor lar dets bestemmelse i laboratoriet deg identifisere visse bakteriestammer og til og med skille mellom arter av samme kjønn.

Det er to typer urea -test: Stuart og Christensen. De er forskjellige i sammensetningen og følsomheten. Den første er spesiell for å vise en stor mengde ureasa produsert av arter av proteiner slekten.

Den andre er mer følsom og kan oppdage små mengder ureasa i det siste av andre bakterielle sjangre, som Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter og Mycobacterium.

Stuarts urea -buljong består av urea, natriumklorid, dipotassiumfosfat.

Mens Christensen's buljong eller urea-grep er sammensatt av Peptonas, natriumklorid, monopotásisk fosfat, glukose, urea, fenolrød, destillert vann og agar-tarm. Sistnevnte bare hvis det er det faste mediet.

Basis

Ureasa -enzymet hydrolyserer urea for å danne karbonanhydrid, vann og to ammoniakkmolekyler. Disse forbindelsene reagerer for å danne sluttproduktet som kalles ammoniumkarbonat.

Urea de stuart buljong

Stuarts urea buljong er mer bufret med en pH på 6,8. Derfor må mikroorganismen kunne danne store mengder ammonium for å snu det røde av fenol. PH må stige over 8.

Derfor er Stuarts urea -buljong selektiv for proteusarter, noe som gir positive resultater i 24 til 48 timers inkubasjon, og er ikke effektiv for bakterier som gir få mengder ureasa eller som sakte hydrolyserer urea.

Dette er fordi proteusarter er i stand til å bruke urea som nitrogenkilde. På den annen side trenger andre ureasa som produserer bakterier en ekstra kilde.

Pérez et al. (2002) slo fast at Stuarts urea -buljong var like effektiv som Christenens urea -agar, for å bestemme ureasa i gjærstammer av den ærlige.

Studieforfatterne hevder å ha oppnådd 100% tilfeldighet med både media (Stuart og Christensen) ved å inkubere i 24 og 48 timer; Å gjøre unntaket at belastningene som klarte å gjøre media til en sterk rosa-fucsia-farge, tok som positive.

Denne forklaringen er nødvendig, siden Lodder (1970) sa at nesten alle gjær klarer å plassere rammen til Urea de Christensen Urea for å bleke Rosado. Dette er fordi de kan hydrolysere urea i minimale mengder, og til dannelse av aminer ved oksidativ dekarboksylering av overflateaminosyrer. Dette skal ikke tolkes som positivt.

Christenens urea buljong eller agar

Christensens urea -buljong eller agar er mindre bufret, og kan oppdage små mengder ammonium. I tillegg er dette mediet beriket med Peptonas og glukose. Disse forbindelsene gjør andre ureasa som produserer mikroorganismer som ikke vokser i Stuart -buljongen til å utvikle seg.

På samme måte tilbyr Christensen's Urea -test raskere resultater, spesielt for Proteus, og kan gi sterkt positivt på bare 30 minutter som et minimumstid og opptil 6 timer som maksimal tid.

Resten av Ureasas produserende mikroorganismer klarer å snu miljøets farge litt etter 6 timer, og sterkt etter 24, 48, 72 timer eller mer, og til og med noen stammer kan gi svake reaksjoner etter 5 eller 6 dager.

Tolkning av både media (Stuart og Christensen)

Mediet er opprinnelig gul-oransje og en positiv reaksjon vil vri fargen fra mediet til rosa-fucsia. Fargeintensitet er direkte proporsjonal med mengden ammonium produsert.

En negativ reaksjon vil etterlate den opprinnelige fargen bortsett fra gjær, som kan gi en blekrosa med Christenens urea -medium.

Forberedelse

Urea de stuart buljong

Vei de nødvendige gramene i henhold til indikasjonene fra det kommersielle huset. Oppløs i fortrinnsvis sterilt destillert vann.  Ikke bruk varme for å løse opp, fordi urea er varmefølsom.

For å sterilisere membranfiltreringsmetoden brukes. For dette brukes et milliporfilter med porer med 0,45 u. Ikke bruk autoklave. Når løsningen er filtrert, er den distribuert i sterile rør. For å oppnå pålitelige resultater, må mellom 1,5 ml overføres som et minimumsmengde ved 3 ml som en maksimal mengde per rør.

Hold i kjøleskap og temperament før du bruker.

Hvis filtreringsmetoden ikke er tilgjengelig, må mediet brukes umiddelbart for å oppnå pålitelige resultater.

En annen måte å forberede Stuarts urea -buljong er som følger:

Noen kommersielle hus selger basemediet for urea -testen, ikke inkludert urea.

Beløpet som er angitt av det kommersielle huset veier. Den løses opp i destillert vann og sterilisert i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter. La stå litt, og når mediet er varmt 100 ml av en 20% forberedt urea -løsning og filtrering ved filtrering tilsettes.

Det er fordelt i sterile rør, som beskrevet ovenfor.

Christenens urea buljong eller agar

-Ureoppløsningsforberedelse

Vei 29 gr dehydrert urea og oppløs i 100 ml destillert vann. Bruk filtreringsmetoden for å sterilisere. Ikke autoklavat.

-Urea base agar

Oppløs 24 gr dehydrert base i 950 ml destillert vann. Steriliser i autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. La stå til den når en temperatur på 50 ° C og tilsett urea som tidligere er forberedt på en aseptisk måte.

Hell 4 til 5 ml i sterile rør og vippe til de stivner. En lang fløytopp må være.

Dette mediet kan også fremstilles i flytende form.

applikasjoner

Urea -testen er ekstremt effektiv for å skille proteussjangeren fra andre sjangre i Enterobacteriaceae -familien, gitt den raske reaksjonen som proteus gir.

Hvis Christensens sammensetning brukes, hjelper testen å skille mellom arter fra samme slekt. For eksempel, S. Haemolyticus og s. Warneri sPÅ Staphylococcus negativ og betahemolytisk koagulase, Men de er forskjellige i hva S. Haemolyticus Det er negativt og S. Warneri Det er positiv urea.

På den annen side brukte McNulty med suksess 2% Christenens urea -buljong for å studere tilstedeværelsen av Helicobacter pylori I biopsiprøver hentet fra mageslimhinnen (Antral region).

Nærværet av H. Pylori Det er bevist med en positiv ureatest. Varigheten for å observere resultatene er direkte proporsjonal med mengden mikroorganismer som er til stede.

Som det kan sees, er det en enkel metode for diagnosen av Helicobacter pylori I gastriske biopsier.

Til slutt er denne testen også nyttig for å skille arter fra sjangrene Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus og Mycobacteria.

Ure -test sådd

De to metodene krever en sterk mikrobiell inokulum for å optimalisere resultatene. Bakteriekoloniene er fortrinnsvis hentet fra Blood Agar og gjærene til Sabouraud Agar, bortsett fra noen unntak. Inokulumet er emulgerte i det flytende miljøet.

For Stuarts urea -buljong blir 37 ºC inkubert i 24 til 48 timer, vel vitende om at den bare leter etter stammer av proteinglensen når stammen er en bakterie. For gjær kan du inkubere ved 37 ° C eller ved romtemperatur i 24 til 48 timers inkubasjon.

Når det. Hvis testen er negativ, kan den inkuberes i opptil 6 dager. Hvis testen gir positiv før 06.00, indikerer det at det er en belastning av proteagangeren.

Når det. Buljongen er incuba og tolker på samme måte.

QA

For å teste mediet kan du bruke kontrollkontroller, for eksempel Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae  ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 og Salmonella typhimurium.  De to første må gi positive resultater og de to siste negative resultatene.

Referanser

1. Britania Laboratories. Christensen Media (Urea Base Agar). Tilgjengelig på: Britanialab.com