EC -brating, forberedelse og bruk

Han EC -buljong eller buljong Escherichia coli Det er et selektivt flytende kulturmedium. Dette mediet anbefales med standardmetodene for telling av totale og fekale koliformer, med den mest sannsynlige tallteknikken (NMP) i vann- og matprøver, der hovedmidlet som er involvert er Escherichia coli.

EC -buljongen består av triptein, laktose, gallesalter, pipotasisk fosfat, monopotasisk fosfat, natriumklorid og vann. Formelen er strategisk designet for å favorisere veksten av totale og fekale koliformer og forhindre utvikling av andre tilhørende mikroorganismer.

Figurativ representasjon av utarbeidelsen av EC -buljongen. Kilde: Pixabay.com

Bakteriene Escherichia coli Det er den viktigste fekale koliformen som er en miljøgifter i vann- og matkilder, og er årsaken til viktige gastrointestinale effekter.

Det skal bemerkes at det er mange serotyper av Escherchia coli; Blant dem kan Enterohemorrágica (EHEC), enteroinvasiv (EIEC), enteopatogen (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) og enteroagregative (EAEC) nevnes.

Dette mediet har muligheten til å tillate utvikling av dem alle, men ikke i stand til å skille dem fra hverandre. For dette må ytterligere tester utføres.

Den mikrobiologiske studien av vann og mat for det mest sannsynlige antallet (NMP) for søket etter totale og fekale koliformer er en protokoll som består av flere faser; formodende fase, bekreftende fase og fullføringsfase. EC -buljong brukes i bekreftende fase.

[TOC]

Basis

EC -buljong

EF -mediet er basert på å gi de nødvendige ernæringselementene for optimal utvikling av totale og fekale koliformer, der bakteriene er inkludert Escherichia coli.

Disse ernæringselementene er levert av Triptein, og er en utmerket kilde til peptider og aminosyrer. I tillegg inneholder den også laktose, et gjærbart karbohydrat som gir energi og lar deg vise om bakterien produserer gass.

På den annen side inneholder mediet gallesalter som gir den selektive naturen, siden det hemmer veksten av gram positive mikroorganismer som kan være til stede i prøven.

Det kan tjene deg: Flora og Fauna av Nuevo León

På samme måte dipotasy fosfat. Dette systemet er nødvendig, fordi laktosen som er inneholdt i buljongen har en tendens til å forsurte mediet når det blir gjæret av mikroorganismer, men dette kompenseres av fosfatsalter.

Derfor er disse elementene essensielle, fordi surhet uten kontroll kan påvirke den gode utviklingen av søkte mikroorganismer.

For sin del stabiliserer natriumklorid miljøet, mens vann er løsningsmidlet til de tilstedeværende oppløste og gir flytende konsistens til miljøet.

EC -buljong modifisert med Novobiocin

Okrend og Rose skapte en rekke EC -buljonger, kalt EC -modifisert EC -buljong. Modifiseringen besto av reduksjonen i konsentrasjonen av gallesalter og aggregatet på 20 mg/dl Novobiocina.

Denne modifiseringen favoriserer utvinning av stammer av Escherichia coli Enterohemorrágica (O157: H7).

Denne bakterielle serotypen forårsaker alvorlig hemoragisk kolitt som kan forårsake hemolytisk uremisk syndrom (SUH); som igjen kan generere akutt nyresvikt, med en høy dødelighet som kan nå opptil 50% hos eldre.

På grunn av den sykelig forårsaket av disse bakteriene for forbruk av forurenset mat, anbefaler USAs landbruksdepartement (USDA) på det sterkeste bruken av dette mediet.

Forberedelse

EC -buljong

Vei 37,4 gr av det dehydrerte mediet og oppløs i 1 liter destillert vann. Blandingen må tillates i 5 minutter. Deretter, i en varmekilde, ender det opp med å bølge ofte.

Når den er oppløst, er det distribuert i testrør som tidligere er betinget med et Durham -rør inni. Steriliser i autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Kan tjene deg: sfingomyeline: hva er, struktur, funksjoner, syntese

Medium pH må være 6,9 ​​± 0,2.  Fargen på det dehydrerte mediet er beige og forberedt er klar rav.

Buljongene lagres i kjøleskap til bruk. På brukstidspunktet må buljongene være ved romtemperatur.

På den annen side kan EC -buljongen også fremstilles i dobbel konsentrasjon.

EC -buljong modifisert med Novobiocin

Vei 36,7 gr av det dehydrerte mediet og oppløs i 1 liter vann. Resten av forberedelsene er lik den som er beskrevet ovenfor.

Bruk

Total og fekal coliform analyse

EC -buljongen er ideell for den bekreftende fasen av coliform -studien ved NMP -metoden, begge i vannprøver, som i farmasøytiske og matprodukter.

Strukere og gassproduksjonsbuljonger som er oppnådd i den formodende fasen, bør gjenopprettes i lysegrønne buljonger ved 2% og i EC -buljong.

For totale koliformer blir EC -buljonger inkubert i aerobiose i 24 til 48 timer ved 37 ° C, og for fekale koliformer blir de inkubert i aerobiose i 24 til 48 timer ved 44 ° C.

I begge tilfeller tolkes det som følger: de grumsete rørene med gassproduksjon anses som positive. Hvis det ikke er noen gassproduksjon på 24 timer fortsetter inkubasjonen i opptil 48 timer.

Positive EC -buljonger går til den komplette bekreftende fasen, som består av givende i selektive medier som Mac Conkey, EMB eller Endo Endo Agar.

Hvis buljongen som brukes er modifisert med Novobiocin, anbefales de positive rørene å ligne i Mac Conkey Agar med sorbitol.

QA

Kvalitetskontroll må gjøres fra hver forberedt middels batch. For det første må miljøets sterilitet. I denne forstand inkuberes en eller to buljonger uten å inokulere i aerobiose i 24 timer ved 37 ° C. Det forventede resultatet er en gjennomsiktig buljong, uten turbiditet eller fargeendring.

Kan tjene deg: Interspesifikk kompetanse: Kjennetegn og eksempler

For det andre må veksten av kjente stammer evalueres, for dette kan du bruke følgende bakterier: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

I alle tilfeller forventes det en tilfredsstillende mikrobiell utvikling, og observerer en overskyet buljong med gassproduksjon for OG. coli og uten gass for salmonella.

Andre stammer som kan inkluderes i kontrollen er: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Disse stammene må hemmeres totalt.

Anbefalinger

-Plasseringen av Durham -rørene er uunnværlig for studiet av coliforms.

-Distribuere mediet i testrørene før sterilisering, aldri etter.

-Ikke bruk hvis mediet har mer enn 3 måneder forberedt.

-Ikke bruk hvis noen endring av de vanlige egenskapene til mediet blir observert.

Referanser

1. Britania Laboratories. Midt -EC. 2015. Tilgjengelig på: Britanialab.com
2. OG. coli Enterohemorrhagic. Center for Food Security and Public Health. 2010. Tilgjengelig på: CFSPH.iastate.Edu
3. Corporation Neogen. Medium EC. Tilgjengelig på: Foodsafety.Neogen.com
4. Neogen. Medified EC modifisert med Novobiocina. Tilgjengelig på: Foodsafety.Neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, av Castillo M. Påvisning, isolasjon og karakterisering av Escherichia coli Shiga toksinprodusent fra ferskt malt kjøtt fra slakter av Concepción, provinsen Tucumán. Rev Arg of Microbiol; 2010, 42 (4): 284-287.  Tilgjengelig på: www.Scielo.org.