Lactosado -buljong

Lactated buljonger turbid. Kilde: Foto tatt av MSc -forfatteren. Marielsa Gil

Hva er Lactosado -buljong?

Han Lactosado -buljong Det er en flytende kultur, ikke selektiv, hovedsakelig brukt som et middel til å beregne i isolasjonen av stammer av Salmonella, Fra den mikrobiologiske analysen laget til bearbeidet mat, meieriprodukter eller vann. Dette anbefales av Den internasjonale kommisjonen for mikrobiologiske spesifikasjoner for mat (ICMPF).

Mediet inneholder enzymatisk gelatin, kjøtt og laktoseekstrakt, stoffer som er nødvendige for bakterievekst. I tillegg er laktose et gjærbart karbohydrat, derfor er noen koliformer i stand til å utfolde det med gassproduksjon.

Derfor anbefales Lactosado -buljongen av American Public Health Association (APHA) for den presumptive studien av totale og fekale koliforme bakterier. Det beskrives som et utmerket alternativ for å erstatte Lauril Sulfate Triptose -buljongen i standardteknikken til det mest sannsynlige antallet (NMP), brukt for mikrobiologisk analyse av matprøver, melk og overflatevann, underjordisk, rekreasjons-, innenlandsk og industrielt rester.

Basis

For den mikrobiologiske analysen av noen prøver er passering av forberikelse viktig for å gjenvinne en spesifikk mikroorganisme som kan være i veldig lav mengde eller under ikke-gunstige forhold som bryter eller minimerer dens levedyktighet. 

Slik er tilfellet med tørr og bearbeidet mat, muligens forurenset med Salmonellas sp. I disse tilfellene, hvis bakterier er til stede, har de fått fysiske og kjemiske overgrep under produktproduksjonsprosessen.

På en slik måte at mikroorganismer blir utsatt for bivirkninger som dehydrering, eksponering for hemmende eller giftige produkter, og overlappingen generert av tilstedeværelsen av andre bakterier i større mengde, blant andre.

I denne forstand har Lactosado -buljongen en reparasjonseffekt av de skadede strukturene i mikroorganismen, noe som får den til å komme seg og reprodusere, på en slik måte at den kan oppdages.

På samme måte har Lactosado -buljong evnen til å fortynne hemmende stoffer som kan påvirke dens levedyktighet, og tillater dens utvikling. I tillegg er ernæringssammensetningen til den melkende buljongen strategisk for å favorisere veksten av Salmonella sp over andre mikroorganismer.

Kan tjene deg: paleobiologi: historie, spesialiteter, funn

For den endelige identifikasjonen må den være underkulturell mot andre definitive kulturer.

På den annen side tillater sammensetningen av mediet også å oppdage laktosefermentære mikroorganismer som produserer gass.

Forberedelse

For å tilberede en liter laktosebuljong, må 13 gram av det dehydrerte mediet veies og oppløses i 1.000 ml destillert vann.

For å hjelpe oppløsningen av mediet i vannet kan du varme opp løsningen, men ikke for mye.

Når den er homogen, blir løsningen fremstilt som følger: Hvis buljongen vil bli brukt til søket etter coliforms, er et sjokk med testrør fremstilt, som introduseres et Durham -gjæringslør ned.

Durhams rør er en veldig viktig detalj, fordi det vil tillate dannelse av gass, data av stor verdi i jakten på coliforms.

Forberedt rørene, 10 ml av laktosadobuljongen blir dispensert i dem, mengden som må være tilstrekkelig til å dekke hele Durham -røret.

Hvis Lactosado-buljongen skal brukes som en pre-Enrique-buljong, er det ikke nødvendig å plassere Durham Fermentation Tube. I dette tilfellet er det nødvendig med mer medium (225 ml), som vil bli servert i 500 ml krukker, bred munn og med termisk resistent tråddeksel.

Deretter blir rørene eller flaskene ført til autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

Mediet må være på en endelig pH på 6.9 ± 0.2 til 25 ° C.

Buljongene lagres i kjøleskap til bruk. Før de brukes, må de temperere ved romtemperatur.

På den annen side kan laktosadobuljong også fremstilles ved dobbel konsentrasjon.

Kan tjene deg: herpetologi: historie, samlinger, herpetologfunksjon

Noen laboratorier legger til brome. I dette tilfellet tar buljongen en lilla farge, og hvis det er fermenteringsendringer til gult.

applikasjoner

I mikrobiologilaboratorier er Lactosado-buljongen mye brukt fordi det er et relativt økonomisk medium som tilbyr pålitelige og raske resultater (24-48 timer).

Det kan brukes til analyse av totale og fekale koliformer i vann og mat, eller som en pre-Enrique-buljong for Salmonella.

Forhåndsberikelse

Forhåndsberikelse er et skritt før berikelsen av prøven, noe som forbedrer utvinningen av kjønnsbakterier kraftig Salmonella I bearbeidet mat.

For å gjøre dette blir prøven av fast mat (25 gram) eller væske (25 ml) sådd i 225 ml laktosadobuljong, inkubering i 24 til 48 timer. Deretter vil den være underkulturell i et medium beriket som en selenito buljong cistina eller tetrationato buljong. Gå deretter til selektive medier XLD og SS.

Total og fekal coliform analyse

Det er et utmerket medium som en indikator på fekal forurensning.

Derfor er laktosadobuljong ideell for den formodende fasen av den coliforme studien med den mest sannsynlige tallmetoden.

For prøver der det er mistanke om et stort antall koliformer, vil en lavere mengde av samme (1 ml) bli inokulert, mens for prøver der mindre koliformer er mistenkt, blir mer prøvetakingsvolum inokulert (10 ml).

For analysen er 10 laget^-1, 10^-2, 10^-3, danner et 3-5 rørbatteri for hver konsentrasjon som brukes.

Fra hver fortynning blir det samme volumet sådd til laktosadobuljonger.

Rørene inkuberes i 24 timer. Buljongene som er negative blir inkubert i 24 timer mer.

Det kan tjene deg: Fauna og flora i det peruanske hav

Tolkningen av resultatene gjøres ved observasjon av to egenskaper: den første er tilstedeværelsen eller fraværet av turbiditet, og siden dette mediet ikke inneholder pH -indikator, vil det ikke være noen fargeendring.

Den andre er gassproduksjon. Gassen bevises lett i Durham -røret, ved utseendet til en eller flere luftbobler inni.

Det anses som positivt hvis begge egenskapene blir observert, det vil si turbiditet med gassproduksjon. Positive rør må avvises i bekreftelsesmedier (2% lys galle grønn buljong og EC -buljong).

Middels kvalitetskontroll

• Ved utarbeidelse av mediet er det viktig å ikke glemme å plassere Durhams -rørene hvis formålet med det samme er studiet av coliforms.
• Ikke overopphet med mediet før sterilisering.
• Fordel i testrørene før sterilisering, aldri etter.
• Ikke bruk hvis mediet har mer enn 3 måneder forberedt.
• Ikke bruk hvis noen endring av de vanlige egenskapene til mediet blir observert.
• Når du forbereder en laktosado buljong, må du bevise kvaliteten på de samme såstammene kjent som Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter Freundii og Klebsiella pneumoniae. De vokser veldig bra, med gassproduksjon (positiv kontroll).
• Det kan også inkludere Pseudomonas aeruginosa, Salmonella Typhimurium enten Enterococcus faecalis, De vokser godt, men uten gassproduksjon (negativ kontroll).
• Det må være i påvente at den opprinnelige fargen på det dehydrerte mediet er beige og det av det veldig klare og gjennomsiktige gule tilberedte mediet. Hvis endring i farge eller utseende observeres, kan det være forverring av det samme.

Referanser

1. Acevedo r., Severiche, c., Castillo, m. Miljøbiologi og mikrobiologi. University of Cartagena, Colombia.
2. Conda Pronadisa Laboratories. Laktosebuljong dobbeltkonsentrasjon (European Pharm).