Malonate buljong, forberedelse og bruk

Han Malonato buljong Det er flytende kulturmedium som brukes til diagnostisk testen (Malonato -test), brukt til å skille noen sjangre fra Enterobacteriace -familien. Det ble opprettet av Leifson i 1.933 og deretter modifisert av Ewing, som tilførte en liten mengde dekstrose og gjærekstrakt til den opprinnelige formelen.

Mediet er for tiden sammensatt av gjærekstrakt, ammoniumsulfat, dipotassiumfosfat, monopotonisk fosfat, natriumklorid, natriummalonat, dekstrose og bromotimolblått. Denne testen er vanligvis inkludert i det biokjemiske identifikasjonsbatteriet for enterobakterier, og hjelper til med å skille visse slekter og arter.

Grafisk representasjon av Malonato -testen. TIL. Negativ test, B. (Forsuring) Negativ test, C. (Midt alcalinisering) Positiv test. Kilde: Public DomainPicures fargede rør.nett

Malonato -testen er hovedsakelig basert på evnen til noen mikroorganismer til å bruke natrium malonato som en enkelt karbonkilde og som en kilde til nitrogen til ammoniumsulfat.

Malonato -testen gir vanligvis positiv i noen arter av sjangrene Enterobacter, Klebsiella og Citrobacter. Mens de fleste arter av sjangrene Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus og Providencia, gir negativ reaksjon.

[TOC]

Basis

Malonatprøve består av bevis.

De fleste enterobakterier som ikke bruker malonato, er i stand til å vokse i dette mediet, og tar som næringsstoffer dekstrose og gjærekstrakt.

I dette tilfellet vil ethvert alkaliseringsforsøk på grunn av bruk av peptoner bli motvirket ved produksjon av syrer generert ved gjæring av dekstrose. På samme måte fungerer dipotassium og monopotasiske fosfater som en buffer som holder pH på 6,7.

Det kan tjene deg: rundt Donax

Det er grunnen til at når testen er negativ, er buljongen den samme originale fargen (grønn). Sjelden kan mediet bli surgjort på grunn av gjæringen av dekstrose; Uten bruk av Peptonas og pH -indikatoren ville vri fargen fra medium til gult. For dette må pH gå ned til 6.

Når denne testen er positiv til at mikroorganismen brukte malonato og ammoniumsulfat som henholdsvis karbon- og nitrogenkilder, uten å bruke de andre komponentene.

I dette tilfellet er mediet alkalisert på grunn av frigjøring av natrium og den påfølgende NaOH -formasjonen. I denne forstand vender pH -indikatoren (bromotimolblått) fargen på midten av grønt til blå når pH er lik eller større enn 7,6. Blå kan være tydelig eller intens (Preussen blå).

Til slutt opprettholder natriumklorid osmolariteten til mediet og vannet er dilue av alle komponenter.

Tolkning

Buljong av samme farge (grønn): Negativ test

Gul buljong: negativ test

Klar eller intens blå buljong: positiv test

Det er en variant kalt malonato fenylalaninbuljong, også kalt Shaw og Clarke Medium. I dette tilfellet kan to tester analyseres, bruken av malonato som karbonkilde og produksjon av pyruvinsyre fra fenylalanin.

Forberedelse

Malonato buljong

Mengden gram som er spesifisert av innsatsen til det valgte kommersielle huset, veier (det kan variere fra hverandre). Tunge gram er suspendert i en liter destillert vann. Varm litt til den er fullstendig oppløsning. Fordel 3 ml av mediet i 13/100 testrør med bomullslokk.

Steriliser i autoklav ved 121 ° C i 15 eller 20 minutter.

Kul. Hvis de ikke kommer til å bli brukt umiddelbart, kan du lagre i kjøleskapet til bruk. Temper buljongene ved romtemperatur før du inokulerer dem.

Kan tjene deg: Giptodon

Medium pH må være 6,7 ± 0,2. Fargen på det forberedte mediet er flaskegrønn.

Malonato fenylalaninbuljong

Vei 11 gr av det dehydrerte mediet og oppløs i 1 liter destillert vann. Resten av forberedelsene lik den som er beskrevet ovenfor.

Det kan også tilberedes ved å tilsette 2 gr/l fenylalanin til det malonato buljongmediet før det er sterilisert.

Bruk

Det brukes som en del av det biokjemiske testbatteriet som er montert for identifisering av bakterier i enterobacteriaceae -familien.

Bidra til å skille mellom:

-Slekten Klebsiella og Enterobacter (+) av slekten Escherichia og Serratia (-).

-Arten av SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP, SSP SSP Salame Salmonella Salmonella enterica ssp Diarizonae (+), av arten Salmonella enterica ssp enterica (-).

-Av slekten Klebsiella generelt (+) av slekten Actinobacillus (-).

-Noen ganger kan det hjelpe differensieringen av sjangre og arter av bakterier som ikke tilhører enterobacteriaceae -familien, som blant ikke -fermenterende gram -negative baciller Alcaligenes faecalis (+) Acinetobacter sp (-).

Kilde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Pan -American redaksjon S.TIL. Argentina.

Fremgangsmåte

Under en lighter tas en del av en ren koloni ved bruk av et riktig sterilisert og avkjølt platinahåndtak. Prøven tatt (lett inokulum) oppløses i Malonato -buljongen. Det blir inkubert med det late lokket i aerobiose ved 35 ° C ± 0,2 i 24 til 48 timer.

Du kan også inokulere Malonato -buljongen fra en avling på 18 - 24 timer i triptyse soyabuljong. I dette tilfellet tas 0,01 ml med en steril pipette og den malonato buljongen inokuleres. Det blir inkubert med det late lokket i aerobiose ved 35 ° C ± 0,2 i 24 til 48 timer.

Kan tjene deg: sekundære forbrukere

Ferdig tiden resultatene tolkes. Enhver vestige av blå farge fullført 48 timers inkubasjon bør betraktes som positivt. Testen skal ikke tolkes som negativ før inkubasjonstiden på 48 timer er oppfylt.

Når det. En mørkegrønn farge tolkes som en positiv test for fenylalanin. Hvis tvert imot blir mediet blekblått er testen negativ for fenylalanin.

QA

For å utføre sterilitetskontrollen av mediet, må en eller to buljonger inkuberes ved 35 ° C ± 0,2 i 24 timers inkubasjon. Etter denne tiden skal det ikke være noen turbiditet eller fargeendring.

For kvalitetskontroll kan du bruke kjente eller sertifiserte stammer, for eksempel: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP ATCC 13314 og Escherichia coli ATCC 25922.

De forventede resultatene er:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae og SSP Arizonae Entrico Salsonella SSP De gir en positiv reaksjon (halv blå).
• Til Escherichia coli Resultatet må gi negativt, det vil si at det forventes at det ikke er noen fargeendring (grønn) eller at det vil bli gult på grunn av glukosefermentering.

Begrensninger

Ikke bruk buljong som viser turbiditet, utfellinger, fargeendring eller tegn på forverring.

Referanser

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Mikrobiologisk isolasjon av Salmonella spp. og molekylære verktøy for deteksjon. Uninorte helse. Barranquilla (col.) 2014; 30 (1): 73-94. Tilgjengelig på: Scielo.org.co
2. Bbl. Malonatbuljong, Ewing modifisert. 2007. Tilgjengelig på: BD.com
3. Senna Laboratories. Malonato buljong. Tilgjengelig på: Vitenskapelig.com
4. Renylab. Malonato buljong. 2013. Tilgjengelig på: dette.Renylab.ind.Br
5. MBiology Diagnostics. Malonato buljong. Tilgjengelig på: mbiologi.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Pan -American redaksjon S.TIL. Argentina.
7. Conda Pronadisa Laboratories. Malonato fenylalaninbuljong. Tilgjengelig på: Condalab.com