Tetrasjonsbuljong Hva er, fundament, forberedelse, bruker

Han Tetrasjonsbuljong O tt buljong er et selektivt flytende kulturmedium for berikelse og utvinning av stammer av slekten Salmonella. Det ble opprettet av Müeller og senere modifisert av Kauffmann, så det er de som kaller ham Müeller-Kauffmann Buljone.

Det opprinnelige mediet inneholdt Peptonas -protein, kalsiumkarbonat og natriumtiosulfat. Kauffmann tilsatte gallesalter og skapte en annen modalitet med lysegrønn. Disse stoffene hemmer veksten av koliformer, og etterlater det frie mediet for utvikling av patogene bakterier, i dette tilfellet Salmonella.

Aggregat av jodet jodoppløsningen til tetrationato -buljongen. Kilde: Manuel Almagro Rivas [CC BY-SA 4.0 (https: // creativecommons.Org/lisenser/by-SA/4.0)]

Modifiseringen var veldig vellykket fordi følsomheten til mediet økte betydelig. Derfor er det foreløpig nyttig for søket etter salmonellas i alle typer prøve, men spesielt for fast eller flytende avføring og mat.

Forberedelsen består av to faser; Det kommersielle mediet er et grunnlag for å forberede tetrationato -buljongen, og senere slik at tetrationato kan dannes en jodeløsning som fullfører mediet.

American Public Health Association (APHA) anbefaler bruk av tetrasjonsbuljongen supplert med lysegrønn for berikelse av prøver på jakt etter Salmonella, siden den er mer selektiv enn tetrasjonsbuljongen og Selenito -buljongen.

Generelt er tetrationato -buljongen ideell når tilstedeværelsen av bakterier i Salmonella -slekten mistenkes i små mengder eller som blir mishandlet ved eksponering for hemmende stoffer eller ved industrielle prosesser som minimerer deres levedyktighet.

Basis

De tilstedeværende peptonene tilsvarer digreatisk kasein og digret digreal peptisk vevspeptisk. Disse gir kilden til karbon, nitrogen og næringsstoffer generelt for bakterievekst.

Kan tjene deg: mastozoologi: opprinnelse, hvilke studier, eksempel på forskning

For sin del reagerer natriumtiosulfat med jodidløsningen for å danne tetrationato. Dette hemmer veksten av koliformer og favoriserer utviklingen av bakterier som inneholder enzymet tetrationato reduktase, blant dem er kjønnssalmonellaen, men også proteus.

Gallesalter fungerer også som et hemmende stoff av mest positive grambakterier og noen gramnegative (coliforms).

Kalsiumkarbonat absorberer de giftige stoffene som genereres ved nedbrytning av tetrationato, som danner svovelsyre. I denne forstand nøytraliserer kalsiumkarbonat surhet og holder pH i det stabile mediet.

Når det.

Forberedelse

-Tetrasjonsbuljong

Jodrada jodløsning

Veie:

• 6 gr av jod.
• 5 gr kaliumjodid.

Kaliumjodid oppløses i omtrent 5 ml sterilt destillert vann, deretter tilsettes jod litt etter litt mens blandingen blir oppvarmet. Etter at den er helt oppløst, er den flush med sterilt destillert vann til det når et sluttvolum på 20 ml.

Halv base for tetrationato buljong

Vei 46 gram av det dehydrerte mediet og suspenderer i 1 liter sterilt destillert vann. Bland og varm opp til den totale oppløsningen, kan bare føre i noen minutter. Ikke steriliser i autoklave. Basen på mediet får avkjøle opp til 45 ° C omtrent, og på den tiden tilsettes 20 ml av jodeløsningen.

Etter å ha tilsatt den iodurerte løsningen til mediet, må den brukes umiddelbart. Hvis du ikke vil bruke hele blandingen, fortsett som følger:

Kan tjene deg: Intra -spesifikk konkurranse: Kjennetegn, typer og eksempler

10 ml av basismediet er fordelt i rør, og bare til de som skal inokuleres med prøver tilsettes 0,2 ml av den jodurerte løsningen.

De som ikke kommer til å bli brukt, kan fremdeles lagres i kjøleskapet, da mediet ikke er sterilisert, er idealet å tilberede den nøyaktige mengden som er nødvendig.

Fargen på mediet før tilsetning av jodid -oppløsningen er melkehvit med hvitt bunnfall og etter at aggregatet er brunt med et tett bunnfall. Det observerte bunnfallet er normalt og tilsvarer kalsiumkarbonatet som ikke er oppløst. Den endelige pH i mediet er 8,4 ± 0,2.

-Tetrasjonsbuljongvariant med lysegrønn

For å tilberede tetrationato -buljongen med lysegrønn, utføres alle trinnene beskrevet ovenfor, men i tillegg vil den bli lagt til blandingen av den 0,1% lysegrønne løsningen fremstilt.

Skinner grønt

Denne løsningen er utarbeidet som følger:

Vei 0,1 gr lysegrønn og suspenderer 100 ml destillert vann. Varm opp til å koke for å oppnå sin totale oppløsning. Spar i ravflaske.

Bruk

For avføring prøver (coproulture) er protokollen som følger:

Inokuler 1 gr faste avføring eller 1 ml flytende avføring i et rør med 10 ml tetrasjonsbuljong klar til bruk. Strekk sterkt og inkuber aerobiose ved 43 ° C i 6-24 timer.

Deretter kan du ta en alikvot på 10 til 20 ul buljongen og stige i et selektivt medium for Salmonella, som SS Agar, XLD Agar, Bright Green Agar, Hektoen Enteric Agar, blant andre.

Parallelt må selektive midler for Salmonella inokuleres med den direkte prøven (Feces) uten berikelse. For rektal pinneprøver, last ned materialet samlet i røret og fortsett på den måten beskrevet ovenfor.

Kan tjene deg: lipogenese: Kjennetegn, funksjoner og reaksjoner

For matprøver veier 10 gr fast mat eller 10 ml flytende mat og inokulerer en flaske med 100 ml tetasjonsbuljong klar til bruk. Fortsett på samme måte som beskrevet ovenfor, men inkuberer 37 ° C.

Som det kan sees forholdet mellom prøven og buljongen vil alltid være 1:10.

QA

For å teste kulturmediet kan du bruke stammer kjente kontroller. De mest brukte er ATCC -sertifiserte stammer.

Belastningene å bruke er Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella Abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 og Staphylococcus aureus ATCC 25923.

For Salmonella -stammer forventes det utmerket utvikling, mens Escherichia coli Det kan ha svak eller regelmessig utvikling, og Gram -positive stammer (Enterococcus og Staphylococcus) er delvis eller fullstendig hemmet.

Anbefalinger

-Siden dette mediet ikke hemmer veksten av proteus, plasserer noen laboratorier vanligvis 40 mg/l Novobiocin for å unngå utvikling av denne mikrobielle belastningen. Antibiotikumet må tilsettes før jodjodløsningen.

-Etter å ha forberedt mediet inkludert jodjodoppløsningen, bør det ikke bruke mer enn 2 timer på å bli inokulert.

-På tidspunktet for distribusjon av mediet i rørene, må blandingen homogeniseres kontinuerlig for å resuspendere det dannede bunnfallet.

-I mindre forurensede prøver inkuberes 35-37 ° C-prøvene, og i veldig forurensede prøver anbefales inkubasjonen ved 43 ° C.

Referanser

1. BBL Media. 2005. Tilberedt i rør for dyrking av Salmonella -arten.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 Ed. Pan -American redaksjon S.TIL. Argentina.