Thayer Martin Agar hva er, grunnlag, forberedelse, bruker

Han Thayer Martin Agar Det er et svært næringsrikt og selektivt fast medium for isolering av Neisseria meningitidis og Neisseria gonorrhoeae; begge kjent som patogen eller klinisk betydning.

En av de viktigste spesialfunksjonene som er presentert av Thayer Martin Agar er det høye innholdet i næringsrike kosttilskudd. Denne egenskapen er uunnværlig, fordi neisseries er veldig krevende mikroorganismer fra ernæringsmessig synspunkt og derfor ikke vokser i felles medier.

På den annen side, fordi disse mikroorganismene normalt finnes i ikke -sterile områder, er tilsetning av hemmere som forhindrer vekst av den medfølgende floraen, uten å påvirke utviklingen av slekten Neisseria.

Denne agaren er sammensatt av GC baseagar, hemoglobin, ytterligere kosttilskudd og et kompleks av hemmende stoffer (antibiotika og soppdrepende). Kommersielle hus selger hvert av tilskuddene separat.

Utvalget for å så i dette mediet vil avhenge av mikroorganismen som blir søkt. Til Neisseria gonorrhoeae Ideelle prøver er vaginale og urinrørs sekresjoner. Mens for Neisseria meningitidis De mest brukte prøvene er CSF, utstråler svelg og nasopharyngeal.

Basis

Neisseries er mikroorganismer som er katalogisert som irriterende, og derfor er deres isolasjon vanskelig.  Derfor er Thayer Martín et sammensatt medium og hver av komponentene oppfyller en funksjon som er forklart nedenfor:

GC Base Agar

GC -agaren inneholder peptonprotein, maisstivelse, natriumklorid, dipotassiumfosfat. Komponentene gir grunnleggende næringsstoffer for mikrobiell utvikling, nøytraliserer giftige fettsyrer, bidrar til å opprettholde den osmotiske balansen, definere pH og gi solid konsistens til miljøet.

Hemoglobin

Hemoglobin gir faktorer V og X (henholdsvis nikotinamid adenin dinukleotid NAD og Hemina). Derfor dyrker også i dette mediet arter fra Haemophilus. Hemoglobin kan oppnås kommersielt dehydrert eller kan legge til ny defibrinert bovine til miljøet.

Kan tjene deg: biogenetiske elementer

Anrikningstilskudd

På den annen side bør Thayer-Martin-mediet også tilsettes et berikelsestilskudd, siden næringsstoffene som baseagaren inneholder ikke er nok for kravene til slekten Neisseria.

Det mest brukte anrikningstilskuddet kalles isavalex. Dette inneholder glutamin, adenin, NAD, kokarboksylase, guanin, jernnitrat, benzoisk p-aminosyre, vitamin B12, tiamin og glukose. Alle disse forbindelsene er nødvendige for god utvikling av patogene neisseries.

Hemmere

Fordi det er et svært næringsrikt mediuminhibitorer som forhindrer vekst av mikroorganismer fra den vanlige floraen i området og dermed favoriserer isolasjonen av slekten Neisseria.

Inhibitorkomplekset er sammensatt av vankomycin, colistin og nistatin. Vancomycin inhibits the growth of gram positive bacteria, colistin prevents the development of gram negative bacteria such as pseudomonas and some saprophytic neisseries, and nistatin acts on yeasts as yeasts such as Candida albicans.

Imidlertid ble Thayer Martin Agar endret; Endringene besto av tilsetning av trimetoprim, økningen i mengden agar og aggregatet av ekstra glukose. Disse endringene forbedret utvinningen av arten av arten betydelig Neisseria gonorrhoeae.

Det skal bemerkes at trimetoprim hemmer veksten av proteinsjangeren og den påfølgende svermende formasjonen. I denne forstand er antibiotika de som gir den selektive karakteren til medium Thayer Martin.

Forberedelse

Thayer Martin Original Agar

-GC Agar

Vei 8,2 gr av det dehydrerte GC -mediet og suspenderer 100 ml. Bland og kok i 1 minutt med hyppig agitasjon for å oppløse i sin helhet. Steriliser blandingen i autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Kan tjene deg: hominiseringsprosess: Kjennetegn og faser

-2% hemoglobin

Suspender 2 gr dehydrert hemoglobin i 2 eller 3 ml varmt destillert vann for å danne en jevn blanding. Tilsett gradvis vann for å fullføre et volum på 100 ml. Suspensjonen må være homogen før sterilisering.

Steriliser i autoklav i 15 minutter.

-Anrikningstilskudd

Rekonstitut. Bland godt. Mengden dilue å bruke vil bli spesifisert i settet instruksjon.

-Inhiberingstilskudd v.C.N (vancomycin, colistin, nistatin)

Rekonstitut. Bland godt. Mengden dilue å bruke vil bli spesifisert i settet instruksjon.

-Forberedt

For hver 100 ml GC Agar fortsett som følger:

Når GC -agaren forlater autoklaven, la deg avkjøle seg til en omtrentlig temperatur på 50 ° C og tilsett 2 ml av den fremstilte hemoglobinoppløsningen, 2 ml av anrikningstilskuddet (Isoobalex eller Balex), og 2 ml av hemmingstilskuddet. Bland og server i petri sterile plater.

La stivne og spare i kjøleskapet til bruk.

Fargen på det forberedte mediet er kirsebærrødt. Den endelige pH i mediet er 7,2 ± 0,2

Thayer Martin Agar modifisert

Vei 8,2 gr av det dehydrerte GC -mediet og suspenderer 100 ml. Tilsett 1 gr agar-vann og tilsett 0,3 gr glukose. Bland og kok i 1 minutt med hyppig agitasjon for å oppløse i sin helhet. Steriliser blandingen i autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Forbered hemoglobin og anrikningstilskudd som beskrevet ovenfor.

Inhiberingstilskuddet som brukes er v.C.N.T (vancomycin, colistin, nistatin, trimetoprim).

Kan tjene deg: pre -evolusjonistiske teorier, dets forfattere og ideer

-Forberedt

Fortsett på den måten som er beskrevet for Thayer Martin Original Agar.

Bruk

Thayer Martin Agar skal være temperament før hun så på prøvene. Vanlige brukte prøver er faryngeal ekssudater, nasale ekssudater, vaginal, urinrør og/eller rektal og CSF.

Bruk nyopptatte prøver og lag sterke inokulmer om agaren. Prøvene blir sådd direkte på grunn av materialutslipp og skilte seg deretter ut på grunn av utmattelsen på overflaten.

Platene inkuberes ved 35-37 ° C i 24 til 48 timer i mikroaerofili kanne (5% CO₂). Etter inkubasjonstiden blir platene undersøkt på jakt etter små kolonier, grå og noen ganger mucoid utseende.

Utfør gram og bekreftende biokjemiske tester til mistenkelige kolonier.

QA

For å utføre kvalitetskontroll kan Thayer Martin bruke følgende mikrobielle stammer.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 og Neisseria meningitidis ATCC 13090; I begge stammer forventes det en tilfredsstillende utvikling.

Følgende stammer må også inkluderes: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 og Candida albicans ATCC 10231. I dem alle forventes det en total eller delvis hemming i dette mediet.

Begrensninger

-Husk at i de midterste bakteriene som er resistente mot de brukte hemmere kan vokse.

-Det er belastninger av Neisseria gonorrhoeae som kan være følsom for konsentrasjonen av vankomycin brukt. Av denne grunn anbefales det å bruke parallell sjokoladeagar supplert med isovalex, men uten hemmere.

-Det er nistatin -resistente gjærstammer som kan vokse i dette mediet og forstyrre isolasjonen av patogene neisserier, spesielt Gonococci.

Referanser

1. Britania Laboratories. Thayer Martin Media modifisert. Tilgjengelig på: Britanialab.com