Neubauer kamerahistorie, egenskaper, bruk

De Neubauer -kamera, Varmeimeter eller hechocytometer, er et laboratorieinstrument som består av en spesiell glassplakk. Dette kammeret tjener til å utføre noen celletyper som røde blodlegemer, hvite blodlegemer og blodplater, selv om det kan brukes til å telle sporer, sæd, parasitter, etc.

Den presenterer veldig særegne egenskaper, siden den består av 3 soner, en sentral for tellingen og to støttesoner. Hvert kamera har to telleområder eller retikler, ett øverst og ett i bunnen.

Neubauer -kamera. Kilde: Santibadia [CC BY-SA 4.0 (https: // creativecommons.Org/lisenser/by-SA/4.0)]. Redigert bilde.

Disse har flere divisjoner i en rutenettform. Telleområdene er de mellomstore boksene som finnes i de 4 hjørnene av begge retiklene, pluss den sentrale torget.

Kamera -enheten skal gjøres veldig nøye, da alle detaljer påvirker celletellingen. Det er mange feil som kan gjøres, men hvis noen av dem oppstår, må kameraet demonteres, rene og monteres på nytt. Blant hovedfeilene kan følgende nevnes:

Rebosar kameraet eller lag en utilstrekkelig fylling, la kameraet tørke, prøv å fjerne overflødig væske med gasbind, vippe kameraet ved å transportere det, fylle et skittent eller vått kamera, ikke blande fortynningen eller prøven godt, blant andre. Alle disse feilene vil resultere en uvirkelig verdi.

[TOC]

Historie

Neubauers kamera er et presisjonsinstrument, og i produksjonsprosessen går det gjennom streng kvalitetskontroll. Den ble opprettet for presise partikler eller former av MM³, for eksempel celler i forskjellige væsker. Den delikate grafikken er skåret med diamantblyant.

Kjennetegn på Neubauer -kammeret

Det komplette kameraet er på størrelse med et normalt lysbilde slik at det kan plasseres på mikroskopplaten.

Kameraet består av tre sentrale rektangulære overflater (A, B, C). I sone “B” er R- eller tellesonen lokalisert, også kalt retikulum. En på hver side av kameraet, atskilt med "D" -sonen.

Grafisk ordning av Neubauer -kameraet. Kilde: Practical Hematology Guide. Bioanalyseskole ved University of Carabobo, Venezuela.

Hvert retikulum er et polert område som inneholder bidragsområdet gravert. Den består av et kvadrat med et område på 9 mm² Og det er internt delt inn i 9 bilder med 1 mm² flate. De fire hjørnene er delt inn i 16 mindre rutenett (0.0625 mm² Av overflaten).

Disse rutenettet er dannet av en serie millimeter linjer som krysser hverandre, og utgjør perfekt grafiske rutenett og avgrenset til de spesifiserte målene. Disse linjene er registrert med diamanttips.

Forbedret Neubauer Reticulum. Kilde: Practical Hematology Guide of the Bioanalysis School of University of Carabobo, Venezuela.

De fire sidene tilsvarer telleområdet. På disse sidene eller hjørnene er det der beretningen om de fleste celler (røde blodlegemer og leukocytter) utføres, mens blodplater telles i det sentrale området.

Kan tjene deg: Malakittgrønn: Kjennetegn, forberedelser, applikasjoner, toksisitet

Den sentrale sonen har flere divisjoner, den består av en 1 mm kvadrat² delt inn i 25 malerier som har et område på 0,04 mm² Hver. Disse igjen er delt inn i 16 rutenett med et område på 0,0025 mm².

Beskrivelse av den forbedrede Neubauer -retikulum. a) kvadrat i hjørnene, b) sentralt kvadrat, c) middels kvadrat på den sentrale torget. Kilde: Practical Hematology Guide of the Bioanalysis School of University of Carabobo, Venezuela.

“A” og “C” -området fungerer som en støtte for å plassere et spesielt objektdeksler som kalles hematimetrisk lamella eller hematimeter deksler.

Høyden mellom lamella og telleoverflaten er 0,1 mm. Overflatemålene på telleskassene, samt høyden på kameraet og fortynning av prøven, er nødvendige data for å utføre de endelige beregningene.

applikasjoner

Det brukes til celletelling. Spesielt det er veldig nyttig i hematologiområdet, siden det gjør det mulig å lage 3 blodcelle -serien; det vil si røde blodlegemer, hvite blodlegemer og blodplater.

Imidlertid kan det brukes i andre områder, for eksempel for å telle sæd, sporer, bakterier eller andre viktige elementer avhengig av type prøve.

Hvordan brukes?

Prøveforberedelse

For å utføre celletellingen, starter det vanligvis fra en tidligere fortynning. Eksempel: For å telle hvite blodlegemer, tilberedes en 1:20 fortynning med tyrkvæske. Fortynningen er godt blandet før du laster pipetten og setter opp Neubauer -kameraet.

Det er anledninger når en 1:20 fortynning ikke er nok til å telle. For eksempel hos pasienter som lider av visse typer kroniske leukemier. I disse tilfellene bør høyere fortynninger gjøres som 1: 100.

Hvis kontoen tvert imot er veldig lav, som i alvorlige leukopenier, kan mindre fortynninger gjøres for å konsentrere prøven. Eksempel: Du kan gjøre en fortynning 1:10.

Endringene som blir gjort påvirker beregningene.

Montering av Neubauer -kammeret

Neubauer's Chamber er samlet ved å plassere den hematimetriske lamellaen i den sentrale sonen. Begge må være veldig rene og tørre. For å plassere lamellaen, blir den tatt av kantene og dråper forsiktig på kameraet.

Dette fylles ved å plassere spissen av en automatisk pipette eller Thoma -pipette i en vinkel på 35 ° på kanten av lasteområdet. Væsken slippes ut forsiktig og lastesonen fylles av kapillaritet. Dette gjøres på begge sider for å laste de to retiklene.

Ingen retikler skal ikke overbelastes og væske skal ikke nektes. Lasten må være nøyaktig. Det er viktig at fyllingen gjøres homogent, det vil si at det ikke skal være noen bobler.

Når kameraet er satt i ro i 2 minutter for cellene å utfelle i bakgrunnen og visualiseringen og tellingen er enklere.

Etter at hviletiden er montert på lyset av lysmikroskopet for observasjon. Først fokuserer det med et 10x mål, og om nødvendig blir det sendt til 40x.

Kan tjene deg: gap anion

For å forbedre visualiseringen din reduseres mikroskoplyset. For å gjøre dette senkes kondensatoren og mellomgulvet lukkes litt.

Regnskap

For beretningen om de hvite blodlegemene eller leukocytter, må hele overflaten av de fire middels rutene i hjørnene og den sentrale kvadratet på hvert retikulum telles.

Tellingen begynner på torget i øverste venstre hjørne. Det starter fra første torg på første rad, det vil si fra venstre til høyre for å nå motsatt ende.

Der senkes den og utseendet blir returnert fra høyre til venstre til det når den andre enden og så på cellene i hvert rutenett i form av sikksakk. De 16 rutenettene på hvert middels kvadrat telles.

For å unngå å telle en celle to ganger er det regler for cellene som er plassert på grenselinjene i hvert rutenett. Cellene som er plassert i venstre og øvre linjer, telles og de som ligger på høyre og nedre linjer blir ignorert.

En manuell celleteller skal være tilgjengelig slik at operatøren undertrykker enhetstasten så mange ganger som observasjonsceller. Med bruk av regnskapsfører kan operatøren telle uten behov for å slå opp fra det mikroskopiske feltet. På slutten av kontoen vil du observere det totale antallet celler som telles.

Beregninger

For beregninger kan du fortsette på flere måter. Du kan telle en enkelt retikulum, eller begge kan telles og et gjennomsnitt av begge deler. I disse to situasjonene må de tellede cellene multipliseres med en faktor, som i dette tilfellet ville være 40. Og derfor oppnås det totale antallet per mm³.

Men hvis de to retiklene telles og det ikke er gjennomsnittlig, må det multipliseres med en annen faktor, i dette tilfellet med 20.

-Multiplikasjonsfaktor

Deretter beregnes multiplikasjonsfaktoren.

For beregningene tas flere data i betraktning, inkludert tittelen på fortynningen, høyden på kammeret og overflaten fortalt.

Fortynning

Fortynningen som brukes på en standard måte er 1:20 for leukocyttantallet.

Kammerhøyde

Høyden mellom kameraet og den hematimetriske laminaen er 0,1 mm.

Tellet overflate

Hvis 5 firkanter på 1 mm telles² overflaten, det betyr at den totale beretningen for tellingen er 5 mm². Disse dataene må multipliseres med kamerahøyden for å få det totale volumet som er fortalt. Det vil si 5 mm² x 0,1 mm = 0,5 mm³.

Formler og beregninger

Med dataene som sies, sies det:

Hvis på 0,5 mm³ -det er ° av celler talt

I 1 mm³ --det vil være - x antall celler

X celle n ° = (n ° av celler kalte x 1) /0,5 mm³

Men fortynning må også tas i betraktning. Derfor er formelen som følger:

(N ° av tellede celler x 1) x 20/0,5 mm³

Til slutt, for å oppsummere, kan du multiplisere antall celler telt med 40. Dermed oppnås verdien av leukocytter per mm³.

Kan tjene deg: Osmose: prosess, typer, forskjeller med diffusjon og eksempler

I tilfelle de to retiklene telles, endres datatataene at i dette tilfellet vil være 10 firkanter, det vil si 10 mm². Og et totalt volum fortalt om 1 mm3. Formelen vil forbli:

(N ° av celler telt x 1) x 20/1 mm³

Derfor ville multiplikasjonsfaktoren i dette tilfellet være 20.

Feil

-Hvis det overskrides eller overskrides når du laster inn kameraet, vil det variere høyden på kameraet. Dette resulterer i tellingen av det virkelige. Hvis du prøver å fjerne overflødig med gasbind eller bomull, representerer dette en karafalfeil. Denne handlingen vil få cellene til å konsentrere seg og øke tellingen.

-Hvis det blir ladet dårlig, vil tellingen under det virkelige.

-I tilfelle kameraet er montert og slipper ut, er det ikke lenger mulig å gjøre tellingen fordi det vil kringkaste feilaktige resultater.

-Hvis fortynningen av prøven ikke er blandet godt, er det en risiko for å lese feil, da cellene ikke vil bli distribuert homogent homogent. Derfor vil det være mindre eller større konsentrasjon av celler, avhengig av om prøven er hentet fra henholdsvis overflaten av væsken eller bunnen av røret.  

-Tilstedeværelsen av bobler reduserer mengden væske som må komme inn i retikelen, og forstyrrer riktig visualisering og fordeling av celler. Alt dette påvirker resultatene betydelig.

-Under tellingen, ikke løft mikroskopet før hvert stort firkant er fullført for å unngå å gå seg vill.

-En grunn til feil er å bøye kameraet etter montert. Derfor bør du laste opp mikroskopplaten forsiktig.

Anbefaling

Hvis du av en eller annen grunn oppdager en unormalitet i innleveringen av kameraet, anbefales det mest at du demonterer det forberedelsen, rengjør kameraet og sett sammen fra bunnen av.

Vær veldig forsiktig når du rengjør kameraet for å unngå riper av retiklene. På den annen side, husk at den hematimetriske lamelen er delikat og skjør. Mangelfull manipulasjon kan bryte den.

Før du begynner å telle, må du sørge for at cellene har blitt godt distribuert. En ulik fordeling av celler skjer ved en dårlig blanding av prøven eller fortynningen. Hvis dette skjer, må forsamlingen gjentas.

En måte å vite om cellene er godt distribuert, sammenligner beretningen om hvert stort firkant, antallet celler som telles av hvert kvadrat ikke skal være overdrevet forskjellig mellom den ene og den andre.

-Hvis hvite blodlegemer teller over 50.000 mm³ Det anbefales å gjenta kontoen, gjøre en større fortynning.

-Hvis den endrer fortynningen, må multiplikasjonsfaktoren beregne igjen, siden dette påvirker formelen.

Referanser

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Sammenligning av sædkonsentrasjon ved bruk av Maklers kamera og Neubauers kamera. Urol esp 2008; 32 (4): 443-445. Tilgjengelig på: Scielo.
2. Neubauer -kamera. (2018, 27. mars). Wikipedia, gratis leksikon. Konsultasjonsdato: 04:10, 23. juni 2019 fra ES.Wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Anvendelse av en alternativ tellemetode i Neubauer's kammer for å bestemme konsentrasjonen av vaginalis trichomonas. Rev. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Tilgjengelig på: ResearchGate.nett
4. Gómez-Pérez Roald e. Expermogram Analyse. Rev. Venez. Endokrinol. Metab.  2007; 5 (2): 19-20. Tilgjengelig på: VE.Scielo
5. Praktisk hematologeguide for Bioanalysis School ved University of Carabobo. Venezuela.1998