Foundation of High Efficacy Liquid Chromatography (HPLC), utstyr, typer

De Væskekromatografi med høy effektivitet Det er en instrumentell teknikk som brukes i kjemisk analyse som den har lov til å skille blandinger, rense og kvantifisere komponentene, samt utføre andre studier. Det er kjent med HPLC -forkortelsen, avledet fra engelsk: Høy ytelse væskekromatografi.

Dermed, som navnet påpeker, fungerer det ved å manipulere væsker. Disse består av en blanding sammensatt av analytten eller utvalget av interesse, og ett eller flere løsningsmidler som fungerer som mobilfasen; Det vil si den som drar analytten gjennom HPLC -teamet og kolonnen.

HPLC -utstyr. Kilde: DQWYY [CC BY-SA 4.0 (https: // creativecommons.Org/lisenser/by-SA/4.0)]

HPLC formidles mye av kvalitetsanalyselaboratorier i mange selskaper; som farmasøyter og mat. Den aktuelle analytikeren må forberede prøven, mobilfasen, sjekke temperaturen og andre parametere og plassere veiene inne i hjulet eller karusellen slik at utstyret utfører injeksjonene automatisk.

HPLC -utstyr er koblet til en datamaskin der de genererte kromatogrammer kan observeres, samt starte analysen, kontrollere strømmen av mobilfasen, programmerer typen eluering (isokratisk eller etter gradient), og slå på detektorene (UV -Vis eller massespektrofotometeret).

[TOC]

Basis

I motsetning til konvensjonell væskekromatografi, for eksempel papir eller kolonne fylt med gel -silika, avhenger ikke HPLC av tyngdekraften slik at væsken våter den stasjonære fasen. Arbeid i stedet med høye pressepumper, som irrigerer mobil- eller elueringsfasen gjennom kolonnen med større intensitet.

På denne måten er det ikke nødvendig.

Kan tjene deg: Karbonoider: Elementer, egenskaper og bruk

Men effektiviteten til denne teknikken skyldes ikke utelukkende denne detaljene, men også på de bittesmå fyllingspartiklene som utgjør den stasjonære fasen. Å være mindre, dets kontaktområde med mobilfasen er større, så den vil samhandle i bedre grad med analytten og dens molekyler vil bli skilt mer.

Disse to egenskapene, pluss det faktum at teknikken tillater detektorkobling, gjør HPLC mye høyere enn fin eller papirlagskromatografi. Separasjonene er mer effektive, mobilfasen beveger seg bedre gjennom den stasjonære fasen, og kromatogrammer gjør det mulig å oppdage en viss analyse i analysen.

Utstyr

Forenklet diagram over driften av et HPLC -utstyr. Kilde: Gabriel Bolívar.

Et forenklet diagram er vist ovenfor hvordan et HPLC -team fungerer. Løsningsmidlene finnes i sine respektive beholdere, ordnet med slanger for pumpen for å bære et lite volum av dem inn i utstyret; Vi har mobilfasen.

Mobil- eller elueringsfasen må være slitasje først, slik at boblene ikke påvirker separasjonen av analytmolekylene, som er blandet med mobilfasen når utstyret har gjort injeksjonene.

Den kromatografiske kolonnen er plassert inne i en ovn som tillater å regulere temperaturen. For forskjellige prøver er det således tilstrekkelige temperaturer for å oppnå høye ytelsesseparasjoner, samt en bred katalog med kolonner og type fyllinger eller stasjonære faser for spesifikk analyse i spesifikk analyse.

Den mobile fasen med den oppløste analytten kommer inn i kolonnen, og fra den eluser først molekylene som "føles" mindre affinitet for den stasjonære fasen, mens de deretter eluerer de som blir mest beholdt av den. Hvert eluida -molekyl genererer et signal visualisert i kromatogrammet, der retensjonstidene for de separate molekylene blir observert.

Kan tjene deg: Liativ: konsept, gasser, jordsmonn og seismikk, sæd

Og på den annen side ender den mobile fasen etter å ha passert gjennom detektoren i en avfallsbeholder.

HPLC -typer

Det er mange typer HPLC, men blant dem er de mest fremragende følgende fire.

Normal fasekromatografi

Normal fasekromatografi refererer til den der den stasjonære fasen er polar natur, mens den apolare mobilen. Selv om det kalles normalt, er det faktisk den minst brukte, og er den omvendte fasen den mest utbredte og effektive.

Inverse fasekromatografi

Å være en omvendt fase, nå er den stasjonære fasen apolar og den polare mobilfasen. Dette er spesielt nyttig i biokjemisk analyse, ettersom mange biomolekyler oppløses bedre i vann og polare løsningsmidler.

Ionutvekslingskromatografi

I denne typen kromatografi beveger analytten, med positiv eller negativ belastning, gjennom kolonnen som erstatter ionene den huser. Jo større belastning, jo større er dens oppbevaring, så den er mye brukt til å skille ionovergangsmetaller.

Molekylær eksklusjonskromatografi

Denne kromatografien, snarere enn å skille seg, er ansvarlig for å rense den resulterende blandingen. Som navnet tilsier, er analytten atskilt ikke lenger avhengig av hvor relatert til den stasjonære fasen, men i henhold til molekylstørrelse og masser.

De minste molekylene vil bli mer beholdt enn store molekyler, ettersom sistnevnte ikke er fanget mellom porene til de polymeriske fyllingene av søylene.

applikasjoner

HPLC tillater både kvalitativ og kvantitativ analyse. Når det gjelder de kvalitative, kan tilstedeværelsen av en bestemt forbindelse påvis. Denne tilstedeværelsen kan være en indikasjon på en sykdom, forfalskning eller medikamentbruk.

Kan tjene deg: løst og løsningsmiddel

Derfor er det et team er en del av diagnostiske laboratorier. På samme måte er det innenfor legemidler. Startmaterialene sender også til HPLC for å rense dem og garantere en bedre ytelse i medikamentsyntese.

HPLC lar deg analysere og skille komplekse proteinblandinger, aminosyrer, karbohydrater, lipider, porfyriner, terpenoider, og i hovedsak er det et utmerket alternativ å jobbe med planteekstrakter.

Og til slutt lar molekylær eksklusjonskromatografi deg velge polymerer i forskjellige størrelser, siden noen kan være mindre eller store. På denne måten oppnås produkter med lave eller høye gjennomsnittlige molekylære masser, dette er en avgjørende faktor i dens egenskaper og fremtidige anvendelser eller syntese.

Referanser

1. Dag, r., & Underwood, a. (1989). Kvantitativ analytisk kjemi. (Femte utg.). Pearson Prentice Hall.
2. Bussi Juan. (2007). Høyeffektivitetsvæskekromatografi. [PDF]. Gjenopprettet fra: finger.Edu.Åh
3. Wikipedia. (2019). Væskekromatografi med høy ytelse. Hentet fra: i.Wikipedia.org
4. Clark Jim. (2007). Høy ytelse væskekromatografi. Gjenopprettet fra: Chemguide.co.Storbritannia
5. Matthew Barkovich. (5. desember 2019). Høy ytelse væskekromatografi. Kjemi librettexts. Gjenopprettet fra: Chem.Librettexts.org
6. G.P. Thomas. (15. april 2013). High Performance Liquid Chromatography (HPLC) - Metoder, fordeler og applikasjoner. Gjenopprettet fra: azom.com