Bakteriell utstryk hva er, egenskaper og forberedelser

Han Bakteriell smør Det er en forlengelse i form av en tynn film av en suspensjon av bakterielle mikroorganismer som er laget på en gjennomsiktig glassplate eller lysbilde, for observasjon under et optisk mikroskop.

Utvidelsen i form av en film utføres for å skille mikroorganismer så mye som mulig, siden hvis observasjonen er gruppert ikke er klar.

I studiet av bakterieavlinger, smør, fiksering og fargeforberedelsesteknikker brukes til å analysere dem bedre. På grunn av den lille størrelsen på mikroorganismer, er bruk av et optisk mikroskop for observasjon nødvendigvis nødvendig.

Optiske mikroskop er uunnværlige instrumenter for observasjon av smøret. Disse bruker optiske linser og lys slik at visualisering av prøver med stor økning i størrelse.

Generelt har levende celler ingen fargede strukturer, synspunkter på optisk mikroskop er fargeløse, gjennomsiktige prøver og viser veldig liten indre kontrast og med omgivelsene.

Observasjonen med det enkle optiske mikroskopet av klart felt, uten bruk av hjelpefargingsteknikker, er veldig begrenset og brukes bare i noen tilfeller, som i observasjonen av mikroorganismebevegelsen.

For observasjon av mikroorganismer optimalt er det nødvendig å oppnå en balanse mellom kontrasten og oppløsningen. Detaljene i cellene kan ikke observeres ved mikroskopet, selv med høy oppløsning; Bruk av fargestoffer gjennom fargingsteknikker er nødvendig, noe som bidrar med kontrast til observasjon.

Kjennetegn på bakteriell smør av god kvalitet

Utmerket kontrast

For å oppnå utmerket kontrast er det sofistikerte mikroskop som kalles Fasekontrastmikroskop, differensiell interferens og mørk feltmikroskop. Denne typen mikroskop brukes til å observere bakteriestrukturer som belg og filamenter, blant andre.

Farging er en enkel teknikk for å øke kontrasten som oppnås med et klart feltmikroskop. I denne teknikken kan forskjellige fargestoffer brukes som forbedrer mikroskopobservasjonen betydelig.

Fargingen er laget direkte på utstryk eller utvidelser av mikroorganismens suspensjoner på lysbildene, tidligere tørket og fikset.

God fikset

Festing er en teknikk som brukes til å bevare cellulære strukturer; forårsaker inaktivering av mikroorganismer og vedheft til glasset i lysbildet. Det er forskjellige fikseringsbehandlinger: varmefiksering og kjemisk fiksering.

Kan tjene deg: palmitholeinsyre: struktur, funksjoner, hvor er det

Varmefiksering

Dette er den mest brukte metoden i observasjonen av bakteriell smør. Teknikken består av å passere smørbakteriesuspensjonen med en lettere flamme. Denne teknikken er i stand til å bevare den ytre morfologien til bakterier, men ødelegger dens indre strukturer.

Kjemisk fiksering

Kjemisk fiksering bruker kjemiske stoffer i bevaring, for eksempel formaldehyd eller formalin, etanol og eddiksyre, blant andre. Fordelen med å bruke å fikse kjemiske midler er at bevaring av de interne cellulære strukturer av mikroorganismer oppnås.

Blod søl. Kilde: Bobjgalindo [GFDL (http: // www.gnu.Org/copyleft/fdl.HTML) eller CC BY-SA 4.0 (https: // creativecommons.Org/lisenser/by-SA/4.0)], fra Wikimedia Commons

God flekker

De vanligste prosedyrene for å utføre farging av en tidligere tørkende og fast smøre er den positive eller enkle farging, differensialfarging og negativ farging. Det er også spesielle teknikker for farging av spesielle cellestrukturer (kapsel, sporer, flagella).

Positiv farging eller enkel farging

Den positive eller enkle fargingen er den mest brukte smørfargingsteknikken. Bruk fargestoffer som har evnen til å slå sammen visse mikrobielle strukturer, slik at de kan observere dem ved mikroskopet.

Disse fargestoffene har kromoforøse grupper (farget del) i sin kjemiske struktur, med alternative dobbeltbindinger og enkle bindinger (konjugering). Disse koblingene kan igjen etablere ioniske eller kovalente bindinger med noen cellulære strukturer.

Fargestoffene som brukes i positiv eller enkel farging er stort sett kjemiske derivater av anilin (fargede organiske salter).

På den annen side, blant fargestoffene kan vi finne noen med basisk pH og andre med syre pH.

Grunnleggende fargestoffer

I grunnleggende fargestoffer har kromoforgruppen en positiv elektrisk ladning. De aller fleste prokaryote mikroorganismer har en intern nøytral pH, og deres celleoverflate har en negativ belastning. Gjennom denne elektrostatiske interaksjonen er kromoforen bindende til cellen og fargestoffet.

Eksempler på grunnleggende fargestoffer er metylenblått, fiolett glass, malakittgrønn, grunnleggende sikring, safranin, blant andre.

Syrefargestoffer

I sure fargestoffer har kromoforgruppen en negativ elektrisk ladning. Disse brukes til proteinfarging med positive ladegrupper. Eksempler på syrefargestoffer er syresikring, Bengal Rose, Kongo rød og eosin.

Det kan tjene deg: Propage: Hva er, typer og deres egenskaper

Differensiell farging

Differensialfargingsteknikken er å bruke to fargestoffer med forskjellig farge eller intensitet, for å skille mikroskopmikroskop. Gramfarging og syre-alkoholresistensfarging er den mest brukte differensialfargingen i bakteriologi.

Grams farging brukes som en foreløpig test for å kjenne formen, størrelsen, cellegruppen, i tillegg til typen cellevegg. Ved gramfargingstest er celleveggbakterier klassifisert som gram positive bakterier og gram negative bakterier.

Negativ farging

I denne teknikken brukes kjemiske fargestoffer som ikke trenger inn i cellulært interiør, men gjør mediet der mikroorganismer vises som en svart bakgrunn.

I den negative fargingsteknikken tilberedes smøringen med en dråpe kinesisk eller nigrosinblekkuspensjon, som etter å ha tillatt tørking ved romtemperatur danner en ugjennomsiktig film til passering av lys. På denne måten blir mikroorganismer observert som lyse former på en mørk bakgrunn.

Forberedelse

TIL. Smøre

1.- Vask veldig godt lysbildene, tørr med absorberende papir og merk dem. Etiketten må indikere innhold i forberedelsene, datoen og navnet på de som har behandlet det.

2.- Tenn lysere og steriliser inokulasjonshåndtaket i flammen til rødt i live.

3.- La håndtaket.

4.- Ta bakterieavlingsrøret, fjern hetten og pass raskt munnen på røret nær den lysere flammen (flamme).

5.- Gå inn i inokulasjonshåndtaket i røret som inneholder bakteriekulturen og ta prøven.

6.- Hvis avlingen er i væske, må du plassere prøven tatt med håndtaket i midten av lysbildet og strekke den forsiktig i en sirkel på omtrent 2 cm i diameter.

7.- Steriliser inokulasjonshåndtaket.

8.- Tillat tørking av smøre i luften.

9.- Gjenta trinnene fra 3 til 8 tre ganger.

10.- Hvis avlingen er i fast stoff, må en dråpe destillert vann tidligere plasseres på lysbildet. Dette gjøres for å blande en liten prøve av avlingen tatt med inokulasjonshåndtaket, i henhold til indikasjonene på trinn 2 til 5 (Asepsisforhold).

Det kan tjene deg: Utviklingsbiologi: Historie, hvilke studier, applikasjoner

elleve.- Utvid prøven fortynnet med dråpen vann på lysbildet og gjenta tre ganger.

B. Fiksering

1.- Legg til tørrutstrykt -Crop -lærere i flytende medium -to dråper metanol eller absolutt etanol.

2.- Tillat lufttørking vekk fra lighteren.

3.- Hvis utstrykningen kommer fra en solid kultur, er det faste av den tørre lukten laget med varme, og passerer den 2 til 3 ganger raskt.

4.- Berør bunnen av smøret med ryggdelen av venstre hånd (for høyre håndte; ellers, bruk høyre hånd) og bekreft at det er kaldt.

C. Enkel farging

1.- Legg til smøret 2 dråper av det valgte fargestoffet og la handle for tiden som kreves i de spesifikke protokollene til hvert fargestoff (vanligvis mellom 1 og 5 minutter).

2.- Noen fargestoffer krever varmebruk for aktivering, i hvilket tilfelle du må være veldig forsiktig når du varmer opp bagasjen i flammen til lighteren (manipulerer den med pinsett og unngår koking). En overoppheting av smøret kan ødelegge de ønskede cellene.

3.- Fjern overflødig fargestoffvask med destillert vann fra et bilde. Fjern vaskevann, og treffer lysbildet forsiktig for sangen, skråstilt på arbeidsbordet.

4.- Tillat lufttørking.

5.- Avhengig av observasjonstypen brukes et deksel eller ikke på dette stadiet. Dekkingen og bevarer smøret. Hvis en observasjon av oljedykk blir utført på dette stadiet, brukes ikke utstrykket, men smøret kan ikke bevares.

D. Definitiv bevaring av smør

1.- Senk smøret suksessivt i hver av løsningene som er angitt nedenfor, i minimum 5 minutter. Hensikten med disse "badene" er å forlate smøret helt dehydrert. Hvert reagens må tappes godt, før du kommer inn i smøre på følgende bad.

Rekkefølgen på dehydratiserende bad er som følger:

1. 70 % etanol
2. 95 % etanol
3. Ren aceton
4. Acetonblanding -xilol 1: 1
5. Xilol

Tillat deretter lufttørking.

2.- Monter dekslene, helst 22 × 22 mm, ved hjelp av Canada Balm eller andre måter for montering.

Referanser

1. Cappucino, J.G. og Welch, C.T. (2017). Mikrobiologi: Et manuelt laboratorium. Pearson.
2. Holt, J.G. Redaktør. (1977). Den kortere Bergeys manual for bestemmende bakteriologi. 8^th Baltimore: Williams og Wilkins co.