Catalase Test Foundation, teknikk og bruk

De katalase Det er en metodikk som brukes i bakteriologilaboratorier for å fremheve tilstedeværelsen av enzymkatalase i de bakteriene som har den. Ved siden av Grams farge er de viktigste testene som bør utføres på fersk isolerte mikroorganismer. Disse testene guider mikrobiologen på trinnene for å følge for den definitive identifiseringen av den aktuelle mikroorganismen.

Generelt har bakterier som inneholder cytokrom katlaseenzymet, det vil si aerobisk og valgfri anaerobe bakterier skal ha det. Imidlertid er det unntak, for eksempel Streptococcus, som til tross for at de er valgfrie anaerobe mikroorganismer, ikke har katalaseenzymet.

Utførelse av katalasetesten, som viser en positiv reaksjon. Kilde: Ingen maskinlesbar forfatter gitt. NASE antatt (basert på krav om opphavsrett)). [CC By-SA 3.0 (http: // creativecommons.Org/lisenser/by-SA/3.0/]]

Det er grunnen til at katalasetesten hovedsakelig brukes til å skille stafylokokaee og mikrokokasae (begge positive katalase) av Streptococaee -familien (negativ katalase) (negativ katalase).

På samme måte skilles slekten Bacillus (positiv katalase) fra slekten Clostridium (negativ katalase), blant andre.

[TOC]

Basis

Katalase er et enzym klassifisert som en hydroperoksidase, dette betyr at de bruker hydrogenperoksyd som et underlag (H₂ENTEN₂).

Det regnes også som en oksidoreduktase, siden i reaksjonen der det er et element som fungerer som en giver av elektroner (reduserer stoffet) og en annen som en elektronmottaker (oksiderende stoff).

Katalase er et protein som inneholder en prostorisk gruppe med fire trivalente jernatomer (tro⁺⁺⁺), derfor er det et homoprotein. Ferrisk ionet forblir oksidert under reaksjonen.

Det kan sies at katalase er et avgiftende enzym, siden dens funksjon er å eliminere stoffer som oppstår under bakteriell metabolisme som er giftig for bakterier. Blant disse stoffene er hydrogenperoksyd.

Hydrogenperoksyd dannes fra nedbrytning av sukker ved aerobic. Denne prosessen skjer som følger:

Superoksydionet (eller₂^-) (Free Radical) er dannet som et sluttprodukt av assimilering av glukose av Aerobic Road. Dette er giftig og elimineres av enzymet superoksyddysmutase som transformerer det til gassformig oksygen og hydrogenperoksyd.

Det kan tjene deg: Holdridge livssoner: Hva er i Latin -Amerika

Hydrogenperoksyd er også giftig for bakterier og må elimineres. Katalaseenzymet utfolder seg hydrogenperoksyd i vann og oksygen.

Katalase kan virke på andre underlag enn hydrogenperoksyd, for eksempel alkoholer, aldehyder, syrer, aromatiske aminer og fenoler. Imidlertid kan hydrogenperoksyd også brukes av katalase for å oksidere andre giftige forbindelser som metyl og etylalkohol.

På samme måte er katalase til stede i fagocytiske celler, og beskytter den mot den giftige virkningen av hydrogenperoksyd.

Rutinemessig teknikk for katalasetest

-Metode i lysbildet

Materialer

3% hydrogenperoksyd (10 bind).

Bærbar lamina

Engangsplasthåndtak eller trepinne.

Fremgangsmåte

Ta nok beløp fra kolonien til å studere uten å berøre agaren som den kommer fra. Kolonien må være frisk, det vil si fra en avling på 18 til 24 timer.

Plasser kolonien på den tørre holderen og på den tilsett en dråpe på 3% hydrogenperoksyd (du kan også bruke H₂ENTEN₂ på 30%). Observer umiddelbart hvis bobler er løsrevet eller ikke.

Tolkning

Positiv reaksjon: Gassavløsning, noe som er tydelig med dannelsen av bobler (sterk boble).

Negativ reaksjon: Det er ingen bobleformasjon.

-Direkte metode i ren kultur

Plasser 1 ml H₂ENTEN₂ 3% på ren avling i plater eller kiler som ikke inneholder blod (helst næringsrikt grep). Observer om det er bobleformasjon eller ikke. Du kan også bruke H₂ENTEN₂ 30%.

Det tolkes akkurat som objektholdermetoden.

-Metode med kapillær eller sopp og petrishko tube

Fyll et 67 mm kapillærrør i en høyde av 20 mm med 3% hydrogenperoksyd per kapillaritet.

Berør den isolerte kolonien du vil studere med kapillæren full av H₂ENTEN₂ 3%_. Observer om kapillæren er fylt med bobler på omtrent 10 sekunder. Denne metoden gjør det mulig å semi-kvantifisere reaksjonen ved kryss:

Uten kryss er det ingen bobler (negativ reaksjon).

Kan tjene deg: Flora og Fauna på Falklandsøyene: Enestående arter

+ --Knappe bobler (svak eller forsinket reaksjon).

++ -Rikelig bobler (moderat reaksjon).

+++ -Bobler når motsatt ende (energisk reaksjon).

-Taylor og Achanzar -metoden for katalasetester som gir tvilsom

I et rent og tørt lysbilde plasserte en isolert koloni, og legg deretter en dråpe H₂ENTEN₂ 0,5% og dekk med deksler. Observer om det er en dannelse av fengslede bobler eller ikke.

Tolkning: Tilstedeværelsen av bobler indikerer en positiv reaksjon. Uten bobler tolkes det som en negativ reaksjon.

Katalasetest for Mycobacterium -arter

Denne teknikken må gjøres ved å kontrollere pH og temperatur. Den må utføres under en laminær flytklokke, siden manipulasjonen av de forskjellige artene av Mycobacterium er farlig.

-Materialer

30% eller 110 volum hydrogenperoksyd (superoksal).

Fosfatbuffer pH 7

Tween 80 til 10%

Mycobacterium Culture in Wedge fra 3 til 4 uker

-Forberedelse av reagenser

Fosfatbuffer pH 7

Veie:

1.361 g av (kh₂Po₄) Anhydra.

1.420 g av (Na2HPO3) Dysodisk fosfat Anhydrous.

Løs begge saltene i litt sterilt destillert vann og komplett med vann opp til 1000 ml.

Tween 80 til 10%

Utfør en fortynning på 1:10 til Tween 80 som kommer kommersielt konsentrert, for at dette skal fortsette som følger:

Ta 1 ml Tween 80 og legg den i litt destillert vann, oppløs og fullfør deretter volumet med vann opp til 10 ml.

Endelig reagens

Bland en mengde fosfatbuffer med en mengde mellom 80 til 10% (i like store deler). Definere i laboratoriet hvor mye du vil forberede deg.

-Fremgangsmåte

Plasser 5 ml fosfatbuffer i et sterilt testrør med trådlokk (Baquelita).

Med et inokulasjonshåndtak, ta nok koloni av en vekst av Mycobacterium sådd i kiler og oppløs i fosfatbufferen.

Dekk røret uten å stramme tråden. Plasser på et bad ved 68 ° C i 20 til 30 minutter. Ta ut og avkjøl ved 22-25 ° C

Mål 0,5 ml av det endelige reagenset (blanding) og tilsett det i røret med den kalde løsningen. Observere eller ikke bobleformasjon.

Det tolkes så vel som de tidligere teknikkene.

Bruk

Når en vekst av kolonier i anrikede medier oppnås, må en Gram -farging og en katalasetest utføres til koloniene oppnådd. Dette vil veilede mikrobiologen om prosedyrene som skal følges for definitiv identifikasjon.

Kan tjene deg: Enkelt flat epitel: Kjennetegn, funksjoner og typer Kilde: Utarbeidet av forfatter MSc. Marielsa Gil

 QA

For å evaluere riktig funksjon av hydrogenperoksydreagenset, bruk nydyrkede kontroller, for eksempel Staphylococcus aureus som positiv kontroll og stammer av Streptococcus sp som negativ kontroll.

Et annet alternativ som fungerer som en positiv kontroll er å plassere en dråpe hydrogenperoksyd på blodagar, erytrocytter har katalase, derfor vil det være en bobling hvis reagenset er i god stand.

Du kan bruke en sjokoladeagar som en negativ kontroll, her er erytrocyttene allerede oppført og testen gir negativ.

Begrensninger

-Ikke bruk gamle avlinger til testen, da dette kan forårsake falske negativer.

-Unngå å ta kolonier fra avlinger i blodagar, hvis du er forsiktig med å berøre agaren; Denne prosedyren kan forårsake falske positive, siden erytrocytter inneholder katalase.

-Hvis du tar kolonien med platinahåndtak, må du ikke investere rekkefølgen på prosedyren fordi dette kan generere falske positiver. Dette er fordi Platinum er i stand til å reagere med hydrogenperoksyd, med opprinnelse av en boble.

-Ikke bruk hydrogenperoksydreagenset hvis det er veldig gammelt, siden reagenset er veldig ustabilt og har en tendens til å bryte sammen over tid.

-Hold reagenset til hydrogenperoksyd beskyttet mot lys og kjøling for å forhindre skade.

-Utføre kvalitetskontroll til hydrogenperoksydreagenset hver gang det brukes.

-Ta hensyn til at hvis h brukes₂ENTEN₂ Ved 30% er reaksjonene sterkere enn de som er utført med H₂ENTEN₂ 3%.

Referanser

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Pan -American redaksjon S.TIL. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 Ed. Pan -American redaksjon S.TIL. Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokjemiske tester for identifisering av bakterier for klinisk betydning. 3. utg. Pan -American redaksjon. Buenos Aires. Argentina.
4. BD Laboratories. Katalase -reagens. Tilgjengelig på: http: // winklerltda.Cl
5. Vadequímica Laboratories. Hydrogenperoksyd. Ekvivalens mellom volum og prosentandel. Tilgjengelig på: Vadequimica.com