Coagulase Test Foundation, prosedyre og bruk

De Koagulasetest Det er en laboratorieteknikk som brukes til å fremheve tilstedeværelsen av koagulaseenzymet. Dette enzymet har egenskapen til koagulært plasma. Loeb i 1903 var den første som beskrev dette enzymet.

Denne testen utføres til gram positive kokosnøtter, positiv katalase, og tillater belastningene til Staphylococcus aureus av resten av stafylokokken, siden han er den eneste mikroorganismen av klinisk betydning som produserer den.

Begge bildene avslører en positiv koagulasetest. Kilde: Venstre bilde: Philippinjl [CC BY-SA 3.0 (http: // creativecommons.Org/lisenser/by-SA/3.0/]]. Høyre bilde: Foto tatt av forfatteren MSc. Marielsa Gil.

I denne forstand kalles medlemmene av Staphylococaee -familien som gir denne negative testen ofte Staphylococcus coagulase negativ.

Det er noen stammer som er forskjellige fra S. aureus  som kan produsere koagulase, for eksempel Staphylococcus schleiferi spp coagulans, s. Hyicus, s. Intermedius og s. Delphini.

Imidlertid er de tre første av klinisk betydning på veterinærnivå og kan sjelden bli funnet som et årsaksmiddel for menneskelige infeksjoner, mens S. Delphini Det finnes bare i marine miljøer.

I tillegg skiller de seg lett fordi S. Hyicus og S. Mellommedius De gjærer ikke mannitol og S. Schleiferi spp coagulans gjærer ikke maltosen, og heller ikke trehalosa, mens S. aureus Ja gjæring disse karbohydratene.

Tilstedeværelsen av koagulaseenzymet har blitt koblet til virulensen av stammer.  Imidlertid har denne teorien falt, med tanke på at andre virulente negative koagulasearter blir observert i stand til å produsere viktige infeksjoner.

[TOC]

Basis

Staphylococcus aureus Den produserer to typer koagulase, en som forblir knyttet til celleveggen, også kalt en agglutinasjonsfaktor eller reaktiv faktor av koagulase (FRC), og en ekstracellulær som frigjøres i flytende avlinger. Derfor kalles de henholdsvis United Coagulase og Free Coagulase.

Koagulase -enzymet skylder navnet til handlingen det produserer. Dette har evnen til å transformere fibrinogen til fibrin, og skaper en tydelig koagulasjon når det er i plasma, det vil si at dette enzymet simulerer trombinaktiviteten til koagulasjonsfosset.

En av de mest aksepterte teoriene er faktisk at United Coagulase reagerer med fri koagulase for å aktivere koagulasjonsfaktorer. Denne aktiveringen genererer et stoff som virker som hvordan protrombin gjør, og skaper en forbindelse med trombinfunksjon.

Kan tjene deg: skjoldbruskprofil: hormonfunksjon, betydning, kvantifisering

Forskjellen med den normale koagulasjonsfossen er at denne reaksjonen ikke trenger tilstedeværelsen av kalsium og ikke påvirkes av heparin.

For å utføre coagulase -testen er det nok å møte en fersk stafylokokkeravling med et helst kaninplasma og dermed observere dannelsen eller ikke av blodproppen.

Det er spesifikke teknikker for å oppdage United Coagulase og United og Free Coagulase samtidig.

Noen belastninger av S. aureus De gir et raskere positivt resultat enn andre. Hastigheten på koagulasjonsdannelse er direkte proporsjonal med den nåværende koagulasekonsentrasjonen.

Teknikken til koagulasetesten i lysbildet oppdager United Coagulas.

Fremgangsmåte

-Koagulasetest i holderen

Materialer

-Rengjør glideark

-Kaninplasma helst, menneskelig eller hesteplasma kan også brukes. Plasmaet kan anskaffes kommersielt lyofiliseres og rekonstituerte når det skal brukes eller kan brukes fersk (nylig tatt). Et annet levedyktig alternativ er bruken av fibrinogen.

-Saltoppløsning (0,85%) Steril (SSF).

Oppnå fersk plasma

Trekke ut mennesker eller dyr venøst ​​blod. Noe av følgende antikoagulantia kan brukes: EDTA, kalsiumoksalat, heparin eller natriumcitrat. Bland godt og sentrifuge. Fjern aseptisk supernatanten (plasma), uten røde blodlegemer og avsetning i et sterilt rør.

Plasmaseparasjon. Kilde: Foto tatt av forfatteren: MSc. Marielsa Gil.

Lyofilisert plasma

Rekonstituert som spesifisert av Commercial Kit Vial.

Frisk fibrinogen

Fra et sitrert plasma, bland plasma med en mettet løsning av natriumklorid. La.

Kast supernatant, rekonstitutt bunnfallet opp til 5 ganger volumet med sterilt destillert vann. Tilsett 5 heparinenheter for hver ml fibrinogen. Lagre.

Teknikk

I en lysbilde plasseres en dråpe saltoppløsning og en dråpe plasma hver for seg. Ta med platinahåndtak 1 eller 2 rene kolonier av mikroorganismen for å prøve.

Bland bakteriebelastningen i plasmadråpen og gjenta operasjonen i SSF -dråpen. Legg merke til resultatene umiddelbart. Et positivt resultat vil være det der dannelsen av et makroskopisk agglutinert (hvitt bunnfall) blir observert etter ett minutt på slippsiden med plasma.

Det kan tjene deg: Økofysiologi: Hvilke studier og anvendelser i dyr og grønnsaker

SSFs dråpe fungerer som en negativ kontroll. Hvis agglutinering med SSF observeres, betyr dette at mikroorganismen er selv-aglutin, og kan gi falske positive resultater. I dette tilfellet må det bekreftes med rørprøven.

Det anbefales også å montere en positiv kontroll med en kjent belastning av S. aureus.   

Tolkning

Agglutinasjon innen 5 til 20 seg (sterk positiv test).

Variabel agglutinering mellom 20 sekunder og ett minutt (positiv forsinket test).

En viss grad av agglutinering etter et øyeblikk (tvilsom test). Det anbefales å gjenta testen eller bekrefte med rørmetoden.

Det er ingen agglutinasjon (negativ test).

Resultat med SSF. Det må alltid gi negativt, hvis resultatet av testen automatisk er.

-Rørkoagulasetest

Materialer

-Sterilt testrør

-Plasma

-Maria -bad ved 37 ° C.

Teknikk

Mål med en steril 0,5 ml pipette plasma og plasser den i et testrør på 12 x 75. Last platinahåndtaket med 2 til 4 rene kolonier for å studere fra en solid avling fra 18 til 24 timer og se på det i plasmaet nøye, bland og inkuber ved 37 ° C i 4 timer.

Undersøk røret den første timen uten å riste det, bare vippet forsiktig. Hvis det fremdeles observeres noen koagulering, kan du fortsette å observere hvert 30. minutt til du fullfører 4 timer. Hvis det fremdeles er negativt, kan det være igjen opptil 24 timer, men ved romtemperatur. Observer og rapportere resultatet.

Basert på opplevelsen, anbefaler noen mikrobiologer å bruke 500 ul av en bakteriesuspensjon fra en 18 -timers avling i et flytende medium for å utføre testen.

Tilsynelatende tilbyr det raskere og mer pålitelige resultater enn når kolonier fra solide medier er emulgerte, spesielt hvis menneskelig plasma oppnådd fra blodbanken har blitt brukt.

Bruken av stammer fra en buljong hjelper til.

Tolkning

Hvis en blodpropp som dekker all væske (fullstendig koagulering) eller koagulasjon, at ingenting i den gjenværende væsken (delvis koagulering) bør betraktes som en positiv test.

Kan tjene deg: grener av biologi og hva studerer de

Hvis det ikke dannes, det vil si at suspensjonen er homogen, testen er negativ.

-Koagulasetest ved bruk av fibrinogen

Fibrinogen brukes akkurat som plasma og serverer både for holderprøven og rørprøven. Fortsett som beskrevet for plasma og tolk på samme måte.

Bruk

Det brukes til å skille Staphylococcus aureus av negativ koagulase -stafylokokker.

QA

Har friske avlinger av en belastning av S. aureus Som skal brukes som positiv kontroll. Du kan også ha en belastning av S. epidermidis som negativ kontroll.

Begrensninger

-En positiv test skal ikke være igjen i inkubering i 24 timer, som S. aureus produserer fibrinolisin som løser opp blodproppen.

-For pålitelig test bør fersk eller ny rekonstituert plasma brukes, så vel som det er viktig å bruke friske bakterieavlinger (18 til 24 timer). Dette unngår falske negativer.

-Testen må utføres i fellesskap med en negativ kontroll og en positiv.

-Noen solide medier kan forstyrre koagulasetesten. Det anbefales ikke.

-Hvis sitrert plasma brukes, anbefales det å plassere 5 heparinenheter per ml plasma for å unngå falske positiver. Dette er fordi noen forskjellige mikroorganismer fra S. aureus De kan dekomponere citrat og lage plasmagox. I dette tilfellet anbefales det å gjøre gram og en katalasetest.

-Det er viktig, i rørprøven, overvåker reaksjonen hvert 30. minutt, ettersom det er belastninger av S. aureus som produserer høye konsentrasjoner av fibrinolisin og vil fortynne den nyopprettede blodproppen. Unngå falske negativer.

-Når du overvåker testen, må røret unngås brått, dette kan ødelegge starten på dannelsen av blodproppen som ikke vil bli gjenopprettet, noe som forårsaker falske negativer.

Referanser

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Pan -American redaksjon S.TIL. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 Ed. Pan -American redaksjon S.TIL. Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokjemiske tester for identifisering av bakterier for klinisk betydning. 3. utg. Pan -American redaksjon. Buenos Aires. Argentina.
4. Pro-lab-laboratorier. Kanin koagulerer plasma. Tilgjengelig på: Pro-lab.com
5. "Coagulase."" Wikipedia, gratis leksikon. Feb 2019, 04:23 UTC. ABR 2019, 15:50 Wikipedia.org.