Hematoksylin-eosinfargingskarakteristikker, bruksområder, teknikker

De Hematoksylinfarging - Eosin Det er en fargesteknikk som bruker kombinasjonen av hematoksylin og eosinfargestoffer. Dette par fargestoffer lager en perfekt duo, siden hematoksylin fungerer som et grunnleggende fargestoff og eosin er et surt fargestoff.

Betegnelsen av grunnleggende eller sure fargestoffer refererer ikke til pH de oppnår i løsning, men snakker heller om andelen som råder når det.

Sylindrisk epitel farget med hematoksylin - Eosin (HE) Kilde: Todd Straus og Vladimir Osipov [CC med 3.0 (https: // creativecommons.Org/lisenser/av/3.0)]

I denne forstand regnes hematoksylin som et grunnleggende (kationisk) fargestoff og har derfor en affinitet for syrestrukturer, for eksempel kjernen i celler. Mens eosin er et surt (anionisk) fargestoff har en affinitet for alkaliske eller grunnleggende strukturer, for eksempel cellcytoplasma.

Av denne grunn er denne kombinasjonen av fargestoffer mye brukt til å flekke. Kjernene er farget mørkeblå eller lilla og den rosa cytoplasma.

Hematoksylin-eosinfarging er en av de mest brukte fargeleggsteknikkene innen histologi og cytologi, på grunn av dens enkle håndtering og lave kostnader. Det brukes til visualisering av celler, tykke nervefibre og tilstedeværelsen av visse vevsmikroorganismer, for eksempel: parasitter, sopp og bakterier, blant andre.

[TOC]

Kjennetegn

Hematoksylin

Hematoksylin er et nøytralt fargestoff. Imidlertid er komponenten som gir farge (kromofor) lokalisert i det kationiske eller grunnleggende sentrum av molekylet. Derav dens affinitet for sure strukturer. Dens kjemiske formel er C₁₆H₁₄ENTEN₆ og hans vitenskapelige navn 7.11b-dihydroindeno [2,1-c] Kromen-3, 4.6a, 9,10 (6H) -Pentol.

Behold sentrene til cellene hovedsakelig, siden disse er veldig rike på nukleinsyrer. Du kan også farge cytoplasmatiske inneslutninger av viral opprinnelse.

Slik at hematoksylin kan fargestoff må være i en oksidert tilstand og festet til et metall. Sistnevnte vil tjene til å se på stoffet, det vil si at det vil fungere som en mordant.

Når hematoksylin oksyderes, kalles hematein. Oksidasjon oppnås ved eksponering for oksygen (aldring) av reagenset eller ved stoffer som hjelper dens oksidasjon (kjemisk oksidasjon).

Det kan tjene deg: metoder for separasjon av heterogene blandinger

Eosina

Eosina er et fargestoffrødt eller rosa. Det er uoppløselig i vann, selv om det er en hydrosoluble versjon. Generelt forbereder Eosina oppløsende alkohol (etanol på 95).

Flekkcytoplasmer, muskelfibre, cytoplasmatiske organeller og kollagen, men fargelegger ikke cellesentre. Dette er fordi det er negativt ladet, derfor har den en tilhørighet til positivt belastede strukturer.

Det er to typer Eosina "Y" og "B". Eosina "y" er kjent som gul eosina. Det vitenskapelige navnet er tetrabrome fluorescein og dens kjemiske formel er c_tjueH₈Br₄ENTEN₅.

På den annen side kalles eosin "B" noen ganger blåaktig erytrosine B. Det vitenskapelige navnet er dibromodinitro fluorescein og formelen er c_tjueH₈Br₂N₂ENTEN₉. Begge er veldig like, og forskjellen i å bruke det ene eller det andre er ikke virkelig merkbar. Imidlertid er den mest populære Eosina "y".

Eosin har egenskapen til å skille mellom en levende og død celle, fordi den bare er i stand til å krysse membranen til å farge dens cytoplasma når cellene er døde, og etterlater cytoplasmaet til den fargeløse cellen hvis den forblir i live.

applikasjoner

Nervøs fiberfarging

Med hematoksylin-eosin kan tykke nervefibre farges og identifiseres. Det er imidlertid ikke nyttig å fargelegge de tynne nervefibrene, for for å visualisere sistnevnte er det nødvendig med en sølvfarge.

Tinions av histologiske hudkutt

I flekkene av hornhinnelaget på huden er fargestoffet som virker eosin, siden cellene på dette nivået ikke har en kjerne.

I granuloselaget av huden, flekker hematoksylin sterkt til keratahialingranulatene som finnes inne i granulære celler. Tvert imot, hudens tornete stratum er svakt farget med hematoksylin, mens basal- eller kimlaget hvis det er ganske farget.

Eosin flekker cytoplasmaet til alle celler og fargeintensitet kan variere mellom ett lag og et annet.

Farging av farging med hematoksylin-eosin

Gómez og samarbeidspartnere, i 2005 demonstrerte de at farging med hematoksylin -eosin var mer effektivt for å identifisere tilfeller av amibiasis ved Entamoeba histolytica og Entamoeba ulik at den ferske visualiseringsmetoden (saltvann og lugol -løsning) hos pasienter med akutt diaré sykdom.

Kan tjene deg: sekundær alkohol: hva er, struktur, egenskaper, bruk

Det ble også demonstrert at det har stor følsomhet for å oppdage erytrofagocytose (amøber som har fagocytt erytrocytter).

Farging av histologiske kutt for diagnose av infeksjon

Walwyn og samarbeidspartnere, i 2004 foreslo de bruk av histologisk farging for å oppdage mikroorganismer som forårsaker infeksjoner.

Ved å bruke fargelegging av hematoksylin-eosin klarte å visualisere infeksjoner forårsaket av Clostridium, Actinomyces, Spiril eller Candida. De klarte også å observere tilstedeværelsen av parasitten SARCOPTES ESCABIEI I lærkutt og virale inneslutninger av cytomegalovirus og herpes i kutt i forskjellige vev.

Teknikker

For histologiske prøver

Farging av histologiske kutt går gjennom en serie trinn. Den første er å få den histologiske skjæring. Dette må parafineres og deretter skaffe kutt (ultra-fin) med et mikrotom. Teknikken består av følgende trinn:

1-salmasjon av overflødig parafin: Xilol eller hemo -d kan brukes, senkes i 3-5 minutter.

2-lettelse av prøven: Dette oppnås ved å fordype prøven i forskjellige konsentrasjoner av alkoholer (etanol) i synkende rekkefølge (100 °, 90 °, 70 °). I alle tilfeller i 7 minutter.

3-eliminering av overflødig alkohol: For å gjøre dette er det nedsenket i vann i 7 minutter.

4-samling med hematoksylin: Prøven er nedsenket 6-10 minutter på et brett som inneholder hematoksylin. Eksponeringstiden avhenger av størrelsen og tykkelsen på prøven.

5-eliminering av overflødig hematoksylin: Vann ble vasket i 5 minutter, og deretter blir en rask passasje (10-20 sekunder) laget av syre alkohol. Deretter vasket med vann igjen i 5 minutter. Deretter nedsenket i etanol ved 96 ° per 1 minutt.

6-farge med Eosina: For å gjøre dette er prøven i 5 minutter i Eosina -brettet nedsenket.

7-Deshydrering av prøven: For å gjøre dette blir alkoholbrett (etanol) passert igjen, men denne gangen i stigende rekkefølge. (70 °, 90 °, 100 °). (I 5 sekunder, henholdsvis 5 sekunder, 1 minutt).

8-prøve avklaring: Dette blir utsatt for xylol i 5-10 minutter og tørker for permanent å forsegle med Canada Balm eller annet lignende materiale.

For avføringsprøver på jakt etter OG. histolytica

I en lamella utvidet med pasientens avføring og er fikset med 80% alkohol i 5 minutter. Arket er nedsenket i hematoksylin i 5 minutter og vaskes umiddelbart med vann.

Kan tjene deg: bidrag fra kjemi til medisin

Deretter blir det raskt nedsenket i sur alkohol og deretter i ammoniakkvann. Vask med vann. Den er farget i 5 minutter i Eosina. Prøven er dehydrert som forklart i den forrige teknikken og til slutt avklart med Xileno.

Reagenspreparat

- Hematoksylin

I en liter destillert vann, løse opp 50 gram kalium eller ammoniumaluminiumsulfat. Når du er helt oppløst, tilsett 1 gram krystallisert hematoksylin. Når du oppløses i sin helhet, tilsettes 1 GR av sitronsyre sammen med 50 gr klorhydrat og 0,2 grn natriumjodinus.

Blandingen kokes i 5 minutter, så er den lov til å avkjøle og filtreres for å eliminere de faste partiklene som har gjenstått. Reagenset som er fremstilt kan brukes umiddelbart.

- Eosina

Det kan tilberedes med alkoholisk eller vandig base.

Alkoholisk eosin

I 100 ml etanol ved 95 ° løst opp 0,5 gram eosina "y". Tilsett deretter noen dråper iseddik.

2% vandig eosin

I 1250 ml destillert vann, løse opp 25 gram eosin “y” hydrosoluble. Tilsett deretter noen dråper iseddik.

Syre alkohol

Mål 0,5 ml konsentrert saltsyre og fullfør 100 ml med absolutt alkohol.

Ammoniakalt vann

Mål 0.5 ml konsentrert ammoniakk og fullfør 100 ml med destillert vann.

Referanser

1. Navarrete, g. Hudhistologi. Rev Fac Med Unam 2003; 46 (4): 130-133. Tilgjengelig på: Medigrafisk.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela eller.
3. Identifisering av Entamoeba histolytica/e. ulik For den ferske amiba-teknikken kontra dens farging med hematoksyin-eosin i akutt diaré. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Tilgjengelig på: Medigrafisk.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Nytten av histologiske teknikker for diagnose av infeksjon i anatomiske stykker. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Tilgjengelig på: Scielo.Sld
5. PanReac AppliChem Itw Reagnts. Hematoksylin-eosinfarging. 2017, Spania. Tilgjengelig på: ITWREGNTS.com
6. “Eosina."" Wikipedia, gratis leksikon. 7. nov 2018, 08:18 UTC. 4. 2019, 22:13 er.Wikipedia.org
7. "Hematoksylin."" Wikipedia, gratis leksikon. Mai 2019, 11:23 UTC. 4. 2019, 22:48 Wikipedia.org