Histochemistry Foundation, Processing, Staining

De Histokjemi Det er et veldig nyttig verktøy i studiet av morfologien til forskjellige biologiske vev (grønnsaker og dyr), på grunn av dens prinsipp om reaksjon av vevskomponenter som karbohydrater, lipider og proteiner, med fargelegging av fargelegging fargelegging.

Dette verdifulle verktøyet lar ikke bare identifisere sammensetningen og strukturen i vevene og cellene, men også de forskjellige reaksjonene som oppstår i disse. På samme måte mulig vevsskade, forårsaket av tilstedeværelse av mikroorganismer eller andre patologier.

Histokjemisk farging. Nile virus, Gram -positive og gramnegative bakterier (Gram), Histoplasma capsulatum (Grocott), Mycobacterium tuberculosis (Ziehl Neelsen). Kilde: Pixinio.com/wikipedia.org/nefron [CC BY-SA 3.0 (https: // creativecommons.Org/lisenser/by-SA/3.0)]/CDC/DR. George s. Kubica [Public Domain]

Histokjemi har siden tidligere århundrer gitt viktige bidrag, for eksempel demonstrasjon av eksistensen av blodcellebarrieren av Paul Ehrlich. Dette var mulig takket være det faktum at hjernen til eksperimenteringsdyret som ble brukt av Ehrlich, ikke farget med anilin, som er et grunnleggende fargestoff.

Dette førte til bruk av forskjellige fargestoffer som metylen og indofenolblått, for å farge de forskjellige typer celler. Dette funnet ga opphav til klassifisering av celler i acidofile, basofile og nøytrofiler, i henhold til deres spesifikke farging.

Nyere studier har brukt denne teknikken for å demonstrere tilstedeværelsen av forskjellige forbindelser, inkludert fenoler, så vel som karbohydrater og ikke -strukturelle lipider i arten av arten Litesa glaucescens, Mest kjent som Laurel. Å være disse, både i arket og i treverket.

På samme måte identifiserte Colares et al, 2016 medisinsk interesseanlegg Tarenaya Hassleriana, gjennom histokjemiske teknikker. I denne arten ble tilstedeværelsen av stivelse, mirosina, så vel som fenoliske og lipofile forbindelser bevist.

[TOC]

Basis

Histokjemi er basert på farging av cellulære strukturer eller molekyler som er til stede i vevene, takket være deres tilknytning til spesifikke fargestoffer. Fargereaksjonen til disse strukturene eller molekylene i sitt opprinnelige format, blir deretter visualisert i det optiske mikroskopet eller elektronisk mikroskop.

Spesifisiteten til farging skyldes tilstedeværelsen av ion aksepterende grupper som er til stede i cellene eller vevsmolekyler.

Til slutt er målet med histokjemiske reaksjoner å kunne bevis gjennom farge. Fra de største biologiske strukturene til den minste av vev og celler. Dette kan oppnås takket være at fargestoffene reagerer kjemisk med molekylene i vevene, cellene eller organellene.

Det kan tjene deg: Hva er gastrasjon?

Tiltale

Den histokjemiske reaksjonen kan føre til trinn før realiseringen av teknikken, for eksempel fiksering, inkludering og skjæring av vevet. Derfor bør det tas i betraktning at du i disse trinnene kan skade strukturen du vil identifisere, og kaste falske negative resultater, selv om den er til stede.

Til tross for dette er den forrige fiksering av vevet som er utført ordentlig viktig, siden hun forhindrer autolyse eller celle ødeleggelse. For dette.

Inkluderingen av vevet gjøres slik at det opprettholder sin fasthet når du skjærer og dermed forhindrer at det blir deformert. Til slutt gjøres kuttet med et mikrotom for studiet av prøver ved optisk mikroskopi.

I tillegg, før du fortsetter med å utføre histokjemisk farging, anbefales det å innlemme eksterne eller interne positive kontroller i hver gruppe tester. Så vel som bruk av spesifikke fargestoffer for strukturer å studere.

Histokjemisk farging

Fra fremveksten av histokjemiske teknikker til i dag har et bredt spekter av fargestoffer blitt brukt, blant dem den hyppigste bruken som: Schiff (PAS), Grocott, Ziehl-Neelsen og Gram.

På samme måte har andre fargestoffer blitt brukt sjeldnere, for eksempel kinesisk blekk, orcein eller Massons trikromiske farging, blant andre.

Schiff's Periódic Acid (PAS)

Med denne fargen kan du se molekyler med høyt karbohydratinnhold, for eksempel: glykogen og mucin. Imidlertid er det også nyttig for identifisering av mikroorganismer som sopp og parasitter. I tillegg til visse strukturer (basalmembran) i huden og i andre vev.

Grunnlaget for denne fargingen er at fargelegging av karbonbindinger som er til stede mellom to nærliggende hydroksilgrupper. Dette produserer frigjøring av aldehydgruppen, og dette oppdages av Schiff -reagenset, og kaster en lilla farge.

Schiff -reagenset består av grunnleggende fuchsin, natriummetabisulfitt og saltsyre, disse komponentene er ansvarlige for lilla fargelegging, når aldehydgruppene er til stede. Ellers genereres en fargeløs syre.

Kan tjene deg: isomerase: hva er, funksjoner, nomenklatur, typer

Fargeleggingsintensitet vil avhenge av mengden av hydroksiljegrupper som er til stede i monosakkaridene. For eksempel i sopp, basale membraner, mucinas og glykogen kan fargen gå fra rød til lilla, mens kjernene er farget blå.

Grocott

Det er en av flekkeren som presenterer den største følsomheten i identifiseringen av sopp i vev inkludert i parafin. Dette tillater identifisering av de forskjellige soppstrukturene: hyfer, sporer, endosporer, blant andre. Derfor regnes det som en rutinemessig farging for mykosediagnose.

Spesielt den brukes i diagnosen lungemykose som pneumocystose og aspergilose forårsaket av noen sjangre sopp Pneumocystis og Aspergillus, henholdsvis.

Denne løsningen inneholder sølv- og kromsyrenitrat, sistnevnte er en fikseringsmiddel og fargestoff. Stiftelsen er at denne syren produserer oksidasjon av hydroksilene til aldehydos, av mukopolene som er til stede i de plukkede strukturer, for eksempel i celleveggen til soppen.

Til slutt oksideres sølv som er til stede i løsningen av aldehyder, noe som forårsaker en svart farge, som kalles argentafinreaksjon. Du kan også bruke kontrastfargestoffer som lysegrønn og dermed soppstrukturer i svart med lysegrønn bakgrunn vil bli observert.

Ziehl-Neelsen

Denne fargingen er basert på tilstedeværelsen av syre-alkoholresistens, delvis eller total, i noen mikroorganismer som sjangre Nocardia, Legionella og Mycobacterium.

Bruken av denne farging anbefales, fordi celleveggen til de tidligere siterte mikroorganismer, inneholder komplekse lipider som hindrer penetrering av fargelegging. Spesielt i luftveiene prøver.

Sterke fargestoffer som Fenicada Fuchsin (grunnleggende fargestoff) brukes i det og varmen påføres slik at mikroorganismen kan beholde fargestoffet og ikke misfarges med syrer og alkoholer. Til slutt brukes en metylenblå løsning for å fargelegge strukturer som er misfarget.

Tilstedeværelsen av syre-alkoholresistens observeres i røde strukturer, mens strukturer som ikke motstår misfarging er farget blå.

Gram og kinesisk blekk

Gram er en veldig nyttig farge i diagnosen bakterie- og soppinfeksjoner, blant andre. Denne fargen gjør det mulig å skille mellom de gram -positive mikroorganismer av det negative gram, og tydelig viser forskjellene som finnes i sammensetningen av celleveggen.

Kan tjene deg: Saponifiable lipider: Kjennetegn, struktur, funksjoner, eksempler

Mens kinesisk blekk er en farging som brukes til å kontrastere strukturene som inneholder polysakkarider (kapsel). Dette er fordi en ring dannes i miljøet, og er mulig i Cryptococcus neoformans.

Orcein

Med denne farging er elastiske fibre og kromosomer av forskjellige celler farget, noe som tillater evaluering av modningsprosessen til sistnevnte. Av denne grunn har det vært veldig nyttig i cytogenetiske studier.

Dette er basert på samlingen av fargestoffet med den negative belastningen av molekyler som DNA, til stede i sentrene til det store utvalget av celler. Så disse er farget blå til mørk fiolett.

Massons trikromiske

Denne fargingen brukes til å identifisere noen mikroorganismer eller materialer som inneholder mellatiske pigmenter. Dette er tilfellet med mykose, forårsaket av dematiac sopp, ugohifomicosis og i svart korn eumicetoma.

Endelige hensyn

De siste årene har det vært mange fremskritt i opprettelsen av nye diagnostiske teknikker, der histokjemi er involvert, men knyttet til andre grunnlag eller prinsipper. Disse teknikkene forfølger et annet formål, som tilfellet er med immunhistokjemi eller enzymohistokjemi.

Referanser

1. Acuña U, Elguero J. Histokjemi. An. Chem. 2012; 108 (2): 114-118. Tilgjengelig på: er.Iqm.CSIC.er
2. Mestanza r. Hyppigheten av histokjemisk farging av PAS, Grocott og Ziehl-Neelsen som ble brukt til identifisering av mikroorganismer, utført i den patologiske anatomi-tjenesten til Eugenio Espejo Specialies Hospital i 2015. [Bacheloroppgave]. Central University of Ecuador, Quito; 2016. Tilgjengelig på: DSPACE.Uce.Edu
3. Tapia-Torres N, de la Paz-Pérez-Olvera C, Román-Guerrero A, Quintanar-Isaías A, García-Márquez E, Cruz-Sosa F. Histokjemi, total fenoler innhold og blad- og tre -antioksidantaktivitet Litesa glaucescens Kunth (Laureaceae). Tre og skog. 2014; 20 (3): 125-137. Tilgjengelig på: redalyc.org
4. Colares, MN, Martínez-Alonso, S, AramBarri, AM. Anatomi og histokjemi av Tarenaya Hassleriana (Cleomaceae), en slags medisinsk interesse. Latinamerikansk og karibisk oppslag av medisinske og aromatiske planter 2016; 15 (3): 182-191. Tilgjengelig på: redalyc.org
5. Bonifaz a. Grunnleggende medisinsk mykologi. 4. utgave. Mexico: McGraw-Hill Inter-American Editors, S.TIL. Av c.V. 2012.
6. Silva Diego Filipe Bezerra, Santos Hellen Bandeira de Pontes, León Jorge Esquiche, Gomes Dalian. Klinikk patologisk og immunhistokjemisk analyse av spindelcellen plateepitelkarsinom i tungen: et sjeldent tilfelle. Einstein (São Paulo) 2019; 17 (1): ERC4610. Tilgjengelig fra: Scielo.Br