Kinyoun -farging

Cryptosporidium parvum farget med kinyoun farging. Kilde: Punlop Anusonpornperm, Wiikimedia Commons

Hva er Kinyouns farging?

De Kinyoun -farging Det er en fargesteknikk som brukes til å farge bakterier og syre -alkoholresistente parasitter. Han ble født fra modifiseringen av Ziehl-Neelsens farge. Begge teknikkene tolkes på samme måte, men de skiller seg i to elementer: ved fremstilling av hovedreagenset og hvor Kinyoun -teknikken ikke bruker varme.

Av denne grunn er det også kjent som Ziehl-Neelsen i kald modifisert, eller Kinyouns kalde farging. Er indikert for fargen på Mycobacterium tuberculosis, Leprae Mycobacterium, Atypiske mykobakterier, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium Meleagridis, Cryptosporidium Felis, Cryptosporidium Muris og Cyclosporras cayetanensis.

Det er verdt å merke seg det Nocardias De er farget svakt med denne teknikken siden de er delvis sure alkohol, så for denne sjangeren er det en modifisering av metodikken.

På sin side har Kinyouns teknikk blitt kombinert med den trikromiske teknikken modifisert av Didier for påvisning av Coccidios (Cryptosporidium parvum og Isospora Belli) og mikrosporidære sporer (Enterocytozoon bieneusi og Enchelitozoon intestinalis).

Basis

Hovedreagenset for farging er karbolfucsin eller fenicada fuchsin, som har egenskap til å bli sammen med de eksisterende karbolsyrene inne i riddercelleveggen, rik på lipider (mykolsyrer) av mykobakterier og visse parasitter.

Denne foreningen blir ikke motvirket av syren avfarget, derfor er mikroorganismer definert som resistent alkoholsyre.

I motsetning til Ziehl-Neelsen-teknikken-som fikser fargestoffet gjennom varme-, i Kinyoun-teknikken, er dette trinnet ikke nødvendig, siden Fenicada Fuchsin-løsningen som tilberedes inneholder en høy konsentrasjon av fenol.

Det kan tjene deg: Salmonella-Shigella Agar

Fenolen løser opp lipidmaterialet til celleveggen, som tillater inntreden av karbolfucsin -fargestoffet. Etter at fargestoffet trenger inn.

På denne måten tar resistente alkoholsyremikroorganismer den karakteristiske røde fargen, mens alt som ikke er sur alkohol blir misfarget og farget blått.

Teknikk

Materialer

• Modifisert foenikert fuchsin.
• Alkohol-syre.
• Metylenblått.

Kinyoun Phoenicated Fuchsina Preparation

• Grunnleggende Fuchsina: 4 GR.
• Fenol: 8 ml.
• Alkohol (95%): 20 ml.
• Destillert vann: 100 ml.

Den grunnleggende fuchsin i alkohol skal sakte oppløses, og blandes hele tiden. Deretter smelter den krystalliserte fenolen på et bad ved 56 ° C. Når den er oppløst, tilsettes 8 ml til Fuchsin -løsningen som tidligere er fremstilt.

Alkohol-syreforberedelse

• Konsentrert saltsyre: 3 ml.
• Etanol (95%): 97 ml.

Du må måle, bli med og blande.

Metylenblå kontrastfargestoffforberedelse

• Metylenblått: 0.3 g.
• Destillert vann: 100 ml.

Den veier og oppløses.

Kinyouns fargingsteknikk

• Forbered en smøre direkte fra prøven, som kan være sputum, lungevæske, urinsediment, cerebrospinalvæske eller avføring, eller fra en suspensjon av mikroorganismer oppnådd fra rene kolonier utviklet i mediemedier.
• Fix smøret med varme.
• Plasser utstrykning på fargebroen og dekk til med Fenicada Fuchsin -reagenset til Kinyoun utarbeidet. La stå i 3 eller 5 minutter.
• Vask med destillert vann.
• Dekorere med sur alkohol i 3 minutter og vask igjen med destillert vann.
• Dekorere igjen med sur alkohol i 1 eller 2 minutter til det er mer fargelegging.
• Vask med destillert vann og la avløp, plasser lysbildet i vertikal stilling.
• Dekk preparatet med metylenblått og la være i 4 minutter.
• Vask med destillert vann og la luft tørke.
• Undersøk 40x og deretter 100x.

Kan tjene deg: klart feltmikroskop: egenskaper, deler, funksjoner

Hvis du vil forbedre og akselerere farging av resistente alkoholsyremikroorganismer, tilsettes 1 dråpe et fuktighetsgivende middel (for eksempel frosk nr. 7) til 30 eller 40 ml fenikat fuchsin av Kinyoun.

Noen laboratorier endrer den blå metylenkontrastfargestoffet på grunn av lysegrønn eller pikrinsyre. Den første gir en grønn farge til bakgrunnen, og den andre genererer en gul farge.

Spesiell Kinyoun -teknikk for Nocardias

For å forbedre farging av kjønnsbakterier Nocardia En modifisering av Kinyouns farging brukes. Teknikken er som følger:

• Dekk smøret med Fenicada Fuchsina fra Kinyoun i 3 minutter.
• Vask med destillert vann.
• Kort misfarging med 3% tilberedt alkohol til det er mer fargelegging.
• Vask igjen med destillert vann.
• Dekk preparatet med metylenblått og forlate ACT i 30 sekunder.
• Vask med destillert vann og la luft tørke.

Kombinert teknikk for fønikert og trikromisk Fuchsina modifisert av Didier

Denne teknikken anbefales for analyse av avføringsprøver på jakt etter Coccidios og sporer av Microsporidium sp samtidig. Prosedyren å følge er som følger:

• Dekk smøret med Fenicada Fuchsina fra Kinyoun i 10 minutter.
• Fjern fargestoffet og vask med destillert vann.
• Dekorere i 30 sekunder med saltsyrealkohol.
• Vask igjen med destillert vann.
• Dekk smøret med trikromisk løsning i 30 minutter ved 37 ° C.
• Vask med destillert vann.
• Dekorere i 10 sekunder med eddiksyrealkohol.
• Vask lukten i 30 sekunder med 95% etanol.

QA

Som positiv kontroll blir smøret utarbeidet med stammer av Mycobacterium tuberculosis Og de er farget med reagensene som er forberedt på å bekrefte at bakteriene tar riktig farge (rød-fucsia).

Det kan tjene deg: gametoogenese

Negative kontroller kan også brukes ved å tilberede smør.

Kinyoun-teknikk sammenlignet med Ziehl-Neelsen-teknikken

Kinyouns teknikk er enklere siden han eliminerer passering av oppvarming, men dens viktigste fordel er at den unngår utslipp av damper, svært giftig og forårsaker kreft i lang tid. Derfor er Kinyouns farging tryggere for personellet som har ansvaret for å utføre farging.

Det er viktig å ta hensyn til at du må være forsiktig med at reagensene ikke kommer i direkte kontakt med huden, ettersom de er etsende og misfargen er brennbar.

Når det gjelder ulemper, indikerer ikke et negativt utstrykning nødvendigvis at mikroorganismen ikke er til stede. I tillegg kan tilstedeværelsen av cellulær detritus forårsake falske positiver, noe som genererer forvirring i diagnosen.

Henvisning

1. Anvendt klinisk kjemi. BK Kinyoun Kit. Cromakit kom seg.er.
2. Orozco-rico, m. Kinyoun -farging og to koksidier i HIV. MD Medical Magazine. 
3. Forbes, f., SAHM, d., Weissfeld, a. Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. Pan -American redaksjon S.TIL.