May Grünwald-Giemsa flekk

Kronisk myeloid leukemi-prøve, med farging av mai Grünwald-Giemsa. Kilde: Paulo Henrique Orlandi Mourao, CC BY-SA 3.0, Wikimedia Commons

Hva er May Grünwald-Giemsas farging?

De May Grünwald-Giemsa flekk, O Pappenheim, er en differensiell fargesteknikk som blander reagens Giemsa og May Grünwald. Det brukes til differensiering av normale og unormale blodceller i perifert blodutstryking og benmarg, samt for farging av histologiske kutt og cytologiske prøver.

Begge reagenser -giemsa og May Grünwald- er avledet fra Romanowsky -farging, en teknikk basert på kombinasjonen av syre og basiske fargestoffer.

Giemsa forbedret teknikken ved å stabilisere blandingen av eosin, metylenblått og dens derivater, med glyserol. I stedet, kan Grünwald brukte eosin og metylenblått, ved bruk av metanol som løsningsmiddel. Denne strategiske kombinasjonen har gitt utmerkede resultater.

Mens når det gjelder cellemorfologiobservasjon virker som fargene til Giemsa og Wright, forbedrer denne teknikken ovennevnte raffinering av fargelegging av parasittene som forårsaker malaria, ondskapen til chagas, leishmaniasis og trichomoniasis.

I tillegg har det vist seg å være veldig nyttig for den cytologiske studien av sædvæske. Ikke bare har det blitt fremhevet ved å vise de morfologiske egenskapene til sæd, men lar også leukocytter, epitelceller og spermatogeneseceller være veldig differensiert.

Basis

Teknikken følger grunnlaget for Romanowskys farging, der sure fargestoffer har selektiv affinitet for grunnleggende cellekomponenter og sure komponenter tiltrekker seg grunnleggende fargestoffer.

Med andre ord, både cellestrukturer og fargestoffer har positive eller negative elektriske belastninger, like belastninger blir frastøtt og forskjellige belastninger tiltrekker.

For eksempel er grunnleggende fargestoffer, som metylenblå, positivt lastet og tiltrukket av negativt belastede strukturer. Det er grunnen til at dette fargestoffet fargelegger kjernene som er rike på DNA og RNA som har negativt lastede fosfatgrupper.

Granulatene til den basofile segmenterte og cytoplasmer i de mononukleære hvite blodlegemene som inneholder ARN er også farget.

Det kan tjene deg: Jaliscos flora og fauna: Representative arter

Det sure fargestoffet har også en negativ belastning, så det binder seg til positivt belastede strukturer som erytrocytter og granulater av de segmenterte eosinofiler. Når det gjelder granulatene til de segmenterte nøytrofilene, settes begge fargestoffer.

Forskjellige fargestoffer

I denne teknikken er en kombinasjon av reaksjoner mellom ortokromatiske og metakromatiske fargeleggingskoeksister. Ortokromatisk (eosin og metylenblått) er festet til cellestrukturen de er relatert til og gir en stabil farge som ikke varierer.

På den annen side, metakromatisk (de som er avledet fra metylenblå, asurblå og azurblå b), varierer deres opprinnelige farge en gang forenet til den spesifikke strukturen, det kan til og med være en rekke nyanser.

Til slutt trenger trinnet som tar May Grünwald -løsningen tilstedeværelsen av vann, for uten dette vil fargestoffet trenge inn i strukturene, men det vil ikke fikses. For å skje, må fargestoffet bli polar eller ionisere, og dermed være i stand til å presipitere og se på de relaterte strukturene.

Teknikk

Materialer

• Skyv ark.
• Fargebroer.
• May Grünwald Solution.
• Giemsa -farging.
• Destillert vann.

Konsentrert kan grünwald fargestoff

0,25 gr metylen eosin-blå (fargestoff i henhold til mai grünwald) og oppløses i 100 ml metanol bør vektes. Da blandes preparatet i 1 time og la stå i 24 timer. Etter tid blir det filtrert.

For å påføre teknikken, fortynnes May Grünwald -fargestoffet som følger: for 200 ml fortynnet fargestoff, måles 30 ml den konsentrerte oppløsningen, 20 ml bufferoppløsning og 150 ml destillert vann justert til pH 7.2-7.3. Deretter blir den blandet og filtrert.

Konsentrert Giemsa -fargelegging

0,5 gr azur-eosin-topp av metylen (fargestoff i henhold til GIEMSA), oppløs i 50 ml metanol og tilsett 50 ml glyserin.

For å utføre teknikken, fortynnes 1:10 med bufferløsning og la stå i 10 minutter. Det kan filtreres om nødvendig.

Kan tjene deg: mesénquima

Forberedelse av bufferløsningen ved pH 7,2

De skal veies:

• 40 mg di-hydrogen kaliumfosfat (KH2PO4).
• 151 mg hydrogen di-syfotisk fosfat 12-hydrat (Na2HPO4).

Begge forbindelsene blir oppløst i 100 ml vann.

Sanguine eller Bone Medol Srols Tincion Prosedyre

Det er to modaliteter: en klassiker og en rask.

Klassisk modalitet

• Dekk lukten i 2 eller 3 minutter med May Grünwald -løsningen fortynnet.
• Vask med bufret destillert vann for å fjerne den forrige løsningen.
• Dekk til med den samme buffrede vaskeløsningen og la være i 1 minutt. Tanken er at det fremre fargestoffet er festet til strukturene, og at cellene samtidig er hydrert.
• Tilsett 12 fortynnede Giemsa Tinkture dråper på bufret vann og blåse for å blande og homogenisere. La stå i 15 eller 20 minutter.
• Vask smøre med bufret destillert vann og legg det til å tørke i luften.
• Fokuser og observer i et optisk mikroskop farging av blodlegemer ved å bruke 40x -målet. Om nødvendig kan 100x brukes.

Rask modus

• Dekk smøret med May Grünwald -fargestoffet fortynnet i 1 minutt.
• Vask med buffret destillert vann.
• Dekk til med bufret vann og la stå i 1 minutt.
• Plasser det utvannede Giemsa -fargestoffet og la være i 5 minutter.
• Vask med buffret destillert vann og la luft tørke.

Teknikkene som er beskrevet her er en veiledende guide, men det må tas med i betraktningen at prosedyrene og fargeleggstidene varierer i henhold til det kommersielle huset som selger reagensene. Det anbefales å følge trinnene som er strengt indikert av hvert kommersielt hus.

Utvidet sædvæskefargingsteknikk

• Dekk det utvidede med et fint lag av May Grünwald -løsningen i 4 minutter.
• Fjern fargestoffet og vask med destillert vann.
• Plasser et utvannet Giessa -lag (1:10) i destillert vann i 15 minutter.
• Fjern fargestoffet og vask med destillert vann.
• La tørke og observere i mikroskopet.

Kan tjene deg: butiserende gjæring

Viktige spesifikasjoner

Teknikken sier at reagensene og vaskeløsningene har en pH justert til 7.2-7.3, slik at fargestoffets tilhørigheter ikke blir forvrengt og den forventede endelige fargen ikke varierer.

applikasjoner

• Denne teknikken brukes av kliniske laboratorier for å farge perifert blodgni og benmarg, vevskutt og cytologier.
• I det hematologiske feltet er denne teknikken av vital betydning i studiet av abnormiteter i cellene når det gjelder form, størrelse og antall. Det er et veldig verdifullt verktøy for diagnose av visse sykdommer, for eksempel leukemi og anemier.
• Den presenterer et enestående verktøy når de er søkt parasitter i det hematologiske feltet (Plasmodium sp og Cruzi Tripaosoma) eller histologisk (Leishmanias sp).
• Når det gjelder vaginal cytologi, er denne teknikken spesielt fordelaktig for observasjonen av Trichomonas vaginalis. Dette er et viktig funn, siden dets tilstedeværelse simulerer karsinommalerier In situ som deretter forsvinner når parasitten blir eliminert.
• Det har vært et ideelt verktøy for studiet av sædprøver, siden det gir verdifull informasjon om kvaliteten på sædceller. Dataene den tilbyr må gjøre hovedsakelig med antall og morfologi, så vel som med samtidig celler som kan være til stede og som er av vital betydning, for eksempel kimceller, leukocytter og epitelceller. Med denne analysen er det mulig å beskrive abnormiteter observert i sæd på hodet, nakken, midtstykket og hovedstykket. I tillegg kan de også bidra til å vise tilfeller av Hosospermia (tilstedeværelse av røde blodlegemer) og leukospermia eller piospermia (økning i antall leukocytter i sæd).

Referanser

1. Merck KGAA Laboratory. May Grünwald Eosina Blue Microscopy Methylene.
2. May-Grünwald-Giemsa-farging. Gjenopprettet fra Es.Wikipedia.org.
3. Glass Chemicals Panreac Laboratory. Reagenser for histologiske teknikker, hematologi og mikrobiologi. Gjenopprettet etter glasschemicals.com.