Agar Lia (Iron Lysina) Hva er, grunnlag, forberedelse, bruker

Han Agar lia (Iron Lysina) Det er en biokjemisk test som brukes til identifisering av bakterier i enterobacteriaceae -familien. Dette mediet ble opprettet av Edwards og Fife, basert på Falkow -formelen.

Opprinnelig var denne testen en buljong som inneholdt peptoner, gjærekstrakt, glukose, L-lisin, bromocresh og destillert vann lilla. Edwards og Fife tilsatte agar-adagar, jern citratus av ammonium og natrium tiosulfat.

Positiv og negativ test av lysindekarboksylering. Kilde: Foto og ordning som eies av MSC -forfatteren. Marielsa Gil

Testen består i utgangspunktet av å demonstrere tilstedeværelsen av enzymet rudboxylase, i stand til å reagere med karboksylgruppen til L-lisin-aminosyren. En deaminering av aminosyren kan også oppstå på grunn av tilstedeværelsen av enzymet lysin hjertesorg.

I tillegg tillater sammensetningen av mediet å demonstrere evnen til noen bakterielle slekter til å produsere hydrogensulfid. Til slutt er det også mulig å observere generasjonen eller ikke av gass i midten.

Basis

Peptonas og gjærekstrakt

Som de fleste avlingsmedier inneholder lisin jernagar komponenter som gir den nødvendige næringskilden for bakterievekst. Disse komponentene er representert av Peptones og gjærekstrakt.

Glukose

På samme måte inneholder denne agaren som gjærbar karbohydrat glukose. Det er kjent at alle bakteriene i Enterobacteriaceae Family gjæring glukosen.

Dette trinnet er avgjørende, fordi det vil være ansvarlig for å forsurende miljøet, en uunnværlig tilstand for enzymet lysin -dekarboksylase - hvis det er til stede - virker på underlaget.

I noen bakterielle sjangre kan gassproduksjon observeres på grunn av glukosefermentering.

Gassen bevises når en forskyvning av agaren OCC.

Kan tjene deg: biomaterialer

L-Lisina

Når lysinet er dekarboksylert, dannes en diamin (kadaverin) og karbonanhydrid.

Disponering oppstår i nærvær av pyridoksalt fosfatkoenzym. Denne reaksjonen er irreversibel.

PH -indikator (Bromocresol Purple)

Alle pH -endringer skjedde i midten av de forskjellige reaksjonene, blir påvist av pH -pH -indikatoren på bromokresol.

I denne forstand, når det er forsuring, blir mediet gult, og når det er alkalisering går mediet tilbake til den originale lilla eller lilla fargen.

Når Lysines hjertesorg oppstår på grunn av tilstedeværelsen av enzymet lysin, dannes en rødlig farge på overflaten, typisk i proteus, forsyn og noen Morganella -arter.

Dette skyldes det faktum at under disaminasjonsprosessen dannes alfa-ZO-karbonsyre, noe som reagerer med ammoniumcitrat i nærvær av oksygen, noe som forårsaker den nevnte fargen.

Ferric citrat av ammonium og natrium tiosulfat

På den annen side vil bakterier som produserer hydrogensulfid være bevis₂S.

Bakteriene som har redusert tiosulfatenzym har evnen til å virke ved å redusere det nåværende natriumtiosulfat, danne sulfitt og hydrogensulfid (H₂S).

Sistnevnte er en fargeløs gass, men når du reagerer med jernsaltform formmetallisk sulfid, som er en uoppløselig forbindelse (synlig svart bunnfall).

Imidlertid treningskapasiteten til H₂S med dette mediet er ikke veldig pålitelig, fordi noen negative dekarboksylasebakterier kan produsere h₂S vil ikke danne det svarte bunnfallet, fordi surheten til mediet forstyrrer. Derfor anbefales det å bekrefte med andre midler som inneholder jern.

Kan tjene deg: nevroner

Tolkning av testen

Rekboksylering av lysin

Rørene skal leses etter fullført 24 timers inkubasjon, ellers er det fare for å misforstå reaksjonen, rapportere falske negativer.

Husk at den første reaksjonen som vil oppstå vil være gjæringen av glukose, derfor vil alle rørene etter 10 til 12 timer bli gule.

Hvis det på slutten av inkubasjonstiden (24 timer) er en gul bakgrunn med en lilla eller lilla overflate, er reaksjonen negativ. Den lilla fargen på overflaten tilsvarer alkaliseringen av mediet ved bruk av peptoner.

En positiv reaksjon er at der bunnen og overflaten på røret er helt lilla, det vil si at den går tilbake til den opprinnelige fargen.

Derfor, som bestemmer testens positivitet er basen eller bunnen av mediet. Hvis du er i tvil om fargen, kan den sammenlignes med et ikke -inokulert Lia -rør.

Lysindeaminering

Et rør som viser hjerteskjæringen av lysin vil ha en granat rødlig overflate og en gul bakgrunn (syre), eller hele granalen rødlig rør.

Denne reaksjonen tolkes som en negativ for dekarboksyleringen av lysinen, men positiv for lysina deaminering.

Denne reaksjonen er definert og tolket i skråningen.

Hydrogensulfidproduksjon (h₂S)

En positiv reaksjon observeres ved utseendet til et svart bunnfall i midten eller delen av det. Generelt mellom rammen og basen.

Hvis bunnfallet oppstår i hele røret, vil det ikke sees de andre reaksjonene som oppstår i midten.

Registrering av resultater

Ved tolking av testen blir resultatene registrert som følger:

Kan tjene deg: Miller og Urey Experiment

Først blir rammen lest, deretter bakgrunnen eller tacoen, deretter produksjonen av h₂S, og til slutt gassproduksjon.

Eksempel: K/A + (-). Dette betyr:

• K: Alkalisk ramme (lilla farge)
• A: Sur bakgrunn (gul), det vil si negativ dekarboksyleringsreaksjon og negativ hjertesorg.
• +: Hydrogensulfidproduksjon
• (-): Uten gass.

Forberedelse

Vei 35 gr av det liggende medium jern dehydrert og oppløs i en liter destillert vann.

Varm til den er helt oppløst agaren, for å koke et øyeblikk som viftet ofte. Fordel 4 ml av mediet i 13/100 testrør med bomullslokk.

Steriliser i autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og la stå skrå, slik at det er en dyp base og en kort skråning.

Oppbevares i et kjøleskap på 2-8 ° C. La et temperament før såing av bakteriell belastning.

Fargen på det dehydrerte mediet er beige og det forberedte rødlige lilla mediet.

Den endelige pH for det forberedte mediet er 6,7 ± 0.2

Mediet blir gult med pH lik eller mindre enn 5,2, og er lilla ved pH 6,5 opp.

applikasjoner

Denne testen, sammen med andre biokjemiske tester, brukes til identifisering av baciller i Enterobacteriaceae -familien.

Mediet blir sådd med en rett eller nål, en eller to punkteringer er laget til bunnen av røret, og deretter sto overflaten på mediet i sikksakk.

Det er incuba i 24 timer ved 35-37 ° C ved aerobiose. Om nødvendig blir det igjen inkubering i 24 timer mer.

Det er hovedsakelig nyttig for å skille negative Citrobacter -arter fra Salmonellas sp.

Referanser

1. Mac Faddin J. (2003). Biokjemiske tester for identifisering av bakterier for klinisk betydning. 3. utg. Pan -American redaksjon. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 Ed. Pan -American redaksjon S.TIL. Argentina.