Agar m.R.Hva er, grunnlag, forberedelse, bruker

Han Agar m.R.S. Det er et selektivt fast kulturmedium, brukt til isolasjon og telling av melkesyrebakterier, spesielt av slekten Lactobacillus. Denne agaren ble opprettet i 1960 av Man, Rogosa og Sharpe, og bærer mediet med samme navn, men på grunn av dets kompleksitet brukes forkortelsen M ofte.R.S.

Det er sammensatt av peptonprotein, kjøttekstrakt, gjærekstrakt, glukose, sorbitan monoleato, dipbotassiumfosfat, natriumacetat, ammoniumcitrat, magnesiumsulfat, mangansulfat og agar.

Han og Sharpe Man Agar (m.R.S.) sådd med Lactobacillus sp. Kilde: Donert bilde for denne artikkelen av forfatterne: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto tatt under undersøkelsen med tittelen: Evaluering av melkesyrebakterier og bifidobakterier med probiotisk potensial i morsmelk og spedbarnsavføring.

Denne sammensetningen tillater god utvikling av melkesyrebakterier fra kliniske prøver, for eksempel avføring, vaginal sekresjon, orale prøver og morsmelk, samt meieri- og kjøttmatvarer.

Det brukes ikke rutinemessig i kliniske laboratorier, fordi melkesyrebakterier sjelden er involvert i patologiske prosesser. Imidlertid, i matmikrobiologiområdet, er bruken av agar m hyppigere.R.S.

På den annen side brukes dette mediet av noen forskningssentre hvis mål er studiet av melkesyrebakterier.

Basis

Mannen, Rogosa og Sharpe har en ganske sammensatt komposisjon. Ved å rive funksjonen som hver av komponentene oppfyller, kan du forklare grunnlaget.

Peptonprotein, kjøttekstrakt, gjærekstrakt og glukose, er næringsstoffer som gir kilden til karbon, nitrogen, vitaminer og mineraler som er nødvendige for bakteriell vekst. I tillegg er glukose den universelle energikilden som brukes i de fleste dyrkingsmedier.

På den annen side, for å favorisere veksten av melkesyrebakterier, er tilstedeværelsen av uunnværlige kofaktorer (kationer) nødvendig i metabolismen av Lactobacillus og relaterte bakterier; Disse forbindelsene er natrium-, magnesium- og mangansalter.

Det kan tjene deg: opssonisering: hva er, typer, funksjoner, molekyler

På samme måte er sorbitan- eller polysorbatmonoleoate 80 en viktig kilde til fettsyrer når den absorberes som næringsstoffer.

I tillegg hemmer sorbitanmonoleoat- og ammoniumsitratloven utviklingen av den medfølgende floraen, spesielt gramnegative bakterier, og gir den selektive karakteren til denne agaren.

Endelig er Agar -Agar den som gir den solide konsistensen til miljøet.

Det er andre varianter av Rogosa Sharpe Agar; En av dem er supplert med cystein (m.R.S.c), veldig nyttig for isolering av bifidobakterier, blant andre mikroorganismer. På den annen side er det MRS supplert med neomycin, paromomycin, buttical acid og litiumklorid, spesielt for det selektive antallet bifidobakterier i meieriprodukter.

Forberedelse

Vei 68,25 gram av det dehydrerte mediet og oppløs i en liter destillert vann. La stå i 5 minutter. Å oppløses i sin helhet fører til en varmekilde som vinker ofte og koker i 1 til 2 minutter. Steriliser i autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Når du forlater autoklaven, kan du stå i noen minutter og distribuere fortsatt varmt på petrisk sterile plater.

La stivne og investere platene, bestille i blodplater og spare i kjøleskap til bruk. La platene ta romtemperatur før du bruker dem.

Medium pH må være 6,4 ± 0,2. Noen kommersielle hus anbefaler pH mellom 5,5 og 5,9.

Det dehydrerte mediet er beige og forberedt er mørkt rav.

Både dehydrert medium og tilberedte plater må lagres fra 2 til 8 ° C.

applikasjoner

Agar m -platene.R.S. De kan sås på overflaten (utmattelse eller med Drigalski Spatula). Det kan også sås av dybde. Platene må inkuberes ved 37 ° C i mikroaerofili (4% av eller₂ og 5-10% CO₂) I 24 til 72 timer.

Kan tjene deg: amensalisme: egenskaper, eksempler, forskjeller med spisestue

SOWN -metoden er valgt i henhold til formålet (isolasjon eller telling).

Kjennetegn på koloniene

De presumptive koloniene i Lactobacillus vokser av hvitaktig farge og har et mucoid eller kremet utseende i denne agaren. Deretter må de identifisere.

Isolering av melkesyrebakterier

For dette brukes overflaten sådd. Prøver som skal saksøkes krever en tidligere prosedyre. 

Når det gjelder morsmelkprøver anbefales det å sentrifuge 1 ml av prøven ved 14.000 RMP i 10 minutter, for å fjerne fettlaget. 900 ul blir kastet, og i de resterende 100 ul er sedimentet suspendert og overflaten på agaren m.R.S. Da må du distribuere jevnt med en Drigalski Spatula.

Når det. Deretter utføres serielle fortynninger, inntil en endelig fortynning på 10^-4.

Endelig blir 100 ul fortynninger 10 tatt^-2, 10^-3 og 10^-4 Og hver fortynning blir sådd på fru Agar, fordeler jevnt med en Drigalski -spatel.

Melkesyrebakterier teller

I dette tilfellet gjøres sådden av dybde.

For morsmelkprøver tas 1 ml og plasseres i et sterilt konisk plastrør. Agar MRS tilsettes ved en omtrentlig temperatur på 40 ° C til et sluttvolum på 25 ml, og oppnår en homogen blanding. Deretter helles det i steril petrier.

For avføringsprøver utføres fortynninger, som beskrevet ovenfor. 1 ml av hver fortynning tas og plastrør sterile. Masted agar mrs legges til et volum på 25 ml.

Kan tjene deg: Aquatic Biomes: Egenskaper, typer, flora, fauna, eksempler

Blandingen av hver fortynning helles jevnt i petriske sterile plater. La til slutt stå til polymerisasjonen din.

Kolonier stoler på mann og skarpe agar (m.R.S.). Kilde: Donert bilde for denne artikkelen. Forfattere: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto tatt under undersøkelsen med tittelen: Evaluering av melkesyrebakterier og bifidobakterier med probiotisk potensial i morsmelk og spedbarnsavføring.

På forskningsnivå

Hver dag blir studiet av melkesyrebakterier mer interesse; Spesielt forskere søker å kjenne nye stammer og potensialet deres som initiativ fermenter for standardisering i fremstilling av meieriprodukter, blant annet bruk.

I denne forstand har Alvarado et al. (2007) brukte agar m.R.S. For å gjennomføre en studie der de isolerte, identifiserte og karakteriserte melkesyrebakterier som var til stede i en Ahumado andean håndverksost.

I osten fant de tilstedeværelsen av bakterier av sjangrene Lactococcus og Lactobacillus, og konkluderte med at blandingene av isolerte stammer er tilstrekkelige som å sette i gang stammer i fremstillingen av oster fra pasteurisert melk.

På den annen side, Sánchez Y Cols. (2017) brukte agar m.R.S. For å undersøke tilstedeværelsen av melkesyrebakterier i grisede fordøyelseskanalen, for å bruke dem som naturlige probiotika som øker produktiviteten til sunne griser.

Med dette mediet klarte de å isolere fire arter: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, enterococcus hirae og Pediococcus pentosaceus.

På samme måte har Báez et al. (2019) brukte aldring m.R.S. For å evaluere melkesyrebakterier (BAL) og bifidobakterier med probiotisk potensial i morsmelk og spedbarnsavføring.

De klarte å isolere 11 BAL og 3 Bifidobacteria sp I morsmelk, og 8 BAL og 2 Bifidobacteria sp. I avføring. Alle oppfylte visse parametere som akkrediterer dem som bakterier med probiotisk aktivitet.

Forfatterne konkluderte med at både morsmelk og avføring av ammende spedbarn utelukkende fungerer som naturlige kilder til probiotiske bakterier.

QA

For å evaluere kvaliteten på agaren m.R.S. Kontroller som:

Lactobacillus Fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum Mkta 8014, Lactobacillus Lactis Mkta 19435, Pediococcus damnosus Mkta 29358, Escherichia coli og Bacillus cereus.

De forventede resultatene er tilfredsstillende vekst for de første 6 bakteriene, mens OG. coli og Bacillus cereus må hemmeres i sin helhet.

Referanser

1. Britania Laboratory. M.R.S agar. Tilgjengelig på: Britanialab.com