Tcbs agar hva er, fundament, forberedelse, bruk

Han TCBS agar Det er en svært selektiv og differensiell solid kultur, brukt til isolering og dyrking av bakterier i slekten Vibrio, spesielt Vibrio cholerae, v. Vulnificus og V. parahaemolyticus som hovedpatogener av denne sjangeren.

Forkortelsen TCBS betyr tiosulfatgalle -citrat. Denne agaren er også kjent som et selektivt medium for vibier. Den opprinnelige formelen ble opprettet av Nakanishi og deretter modifisert av Kobayashi.

Det er sammensatt av gjærekstrakt, kjøtt av kjøtt, triptein, natriumcitrat, natriumtiosulfat, okse galle, sukrose, natriumklorid, jernscitrat, bromool blå, tymolblått og agar.

Denne sammensetningen tillater tilstrekkelig utvikling av vibriumarter fra prøver av vann, mat og avføring; unntatt Vibrio Hollisae, som ikke vokser i dette mediet. I tillegg er TCBS -mediet i stand til å hemme veksten av andre tilhørende bakterier, spesielt coliforms.

På grunn av de alvorlige gastrointestinale og ekstra målene som noen arter av slekten Vibrio produserer, er diagnosen deres veldig viktig. Mennesket er hovedsakelig infisert med forbruk av rå eller lite kokt mat i havet eller forurenset vann, men også gjennom sårinfeksjon.

På grunn av dette må kliniske laboratorier inkludere TCBS Agar i studiet av copoults av flytende avføringsprøver, spesielt med risevannutseende. Spesielt hvis pasienten refererer til å ha vært i kontakt med sjøvann eller har konsumert skalldyr eller fisk.

Basis

Ekstraktet av gjær, kjøtt av kjøtt og tripteína, er den næringsrike kilden til dette mediet. TCBS Agar er imidlertid et ugjestmildt medium for de fleste bakterier.

Den høye selektiviteten er gitt av aggregatet av natriumcitrat og okse galle; Begge er hemmende midler som også gir en alkalisk pH til mediet, og begrenser veksten av den medfølgende floraen og favoriserer veksten av V. Kolerae, blant andre arter. Spesielt Vibrio cholerae er veldig følsom for surhet.

For sin del balanserer natriumklorid osmotisk til miljøet. I tillegg, ettersom konsentrasjonen er høy, fungerer den også som et hemmermiddel, og favoriserer veksten av halofile bakterier.

Tarks er det gjærbare sukkeret som sammen med den blå -bromotimolblå og blå pH -indikatorene gir middels differensialkarakter. Av denne grunn er det med dette mediet mulig å skille gjæringsstammer fra ikke -fermentering.

Koloniene til de gjærære stammene av sukrose utvikler seg i farger og vil vri mediet fra grønt til gult ved produksjon av syrer. Ikke -fermenterende gjennomskinnelig vokser og mediet rester av den opprinnelige fargen (grønn).

På samme måte inneholder dette mediet natriumtiosulfat som en kilde til svovel og jernscitrat som et avslørende middel. Begge viser bakterier som er i stand til å produsere hydrogensulfid (fargeløs gass). H₂S dannes fra tiosulfat og reagerer deretter med jernholdig citrat, et synlig svart bunnfall dannes.

Endelig er agaren den som gir den solide konsistensen til miljøet.

Forberedelse

Vei 89 gr av det dehydrerte mediet og oppløs i en liter destillert vann. Hjelp oppløsning for hyppig oppvarming og agitasjon. Blandingen kan kokes i opptil 2 minutter.

Dette mediet autoklava. Etter løsningen serveres den direkte på sterile plater. Ved å stivne bestilles de på en omvendt måte i blodplater og lagres i kjøleskap (2-8 ° C) til bruk.

Mediet etter utarbeidet må være ved pH 8,6 ± 0,2.

Fargen på det dehydrerte mediet er lys beige eller beige-grønn, og fargen på mediet er grønn skog eller blågrønn.

Det er viktig å la platene temperere før de så på prøvene.

Bruk

Den vanligste prøven for vibrious isolasjon er diaré avføring.

Avføringsprøvene kan ikke sås umiddelbart i det selektive miljøet, de må transporteres midt i Cary Blair.

For å øke følsomheten til avlingen, kan avføringen føres med Peptonada -vann til pH 8,4 som et berikelsesmiddel i maksimalt 8 timer, derfra er det subjektivt for TCBS -mediet.

Det bør også huskes at noen vibriøse stammer kan forårsake septikemi hos immunsupprimerte pasienter, derfor kan de isoleres fra blodkulturer. På samme måte kan prøver av mat og mat fra havet analyseres når det er epidemiske utbrudd av kolerasykdommen.

Sådd

Inokulatet til prøven som undersøkes må være fremtredende, den sås en utføres ved utmattelse av den utmattede metoden. Platene inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i aerobiose.

De formodende koloniene til Vibrio cholerae De er middels, glatte, ugjennomsiktige, tynne og gulfargede kanter fordi de gjærer sukrose.

På samme måte dyrke arter fra V. Alginolyticus, V. elv, V. Hareyi, v. Cincinnatiensis, v. Furnissii, v. Metschnikovii og noe V. Vulnificus. Andre klinisk viktige arter som V. parahaemolyticus De gjærer ikke sukrose, utvikler seg som olivengrønne kolonier.

På den annen side må det huskes at noen stammer av aeromoner og plesiomoner som er oksidase (+) kan vokse i dette mediet, og utvikler gule kolonier som kan forvirre klinikeren. Mens noen stammer av pseudomonas også oksidase (+) vokser som grønne kolonier så vel som V. parahaemolyticus.

Begrensning

Oksidasetesten som er positiv for Vibrio -slekten, må aldri utføres fra kolonier oppnådd fra TCBS -agaren, siden resultatet oppnådd vil være et falskt negativt. Forbindelsene av mediet forstyrrer sterkt i denne testen. Derfor må det gjøres fra forsøkspersoner i blodagar.

QA

For å bevise at mediet er i god stand, er det tilrådelig.

For dette kan du bruke stammer av:

-Vibrio cholerae - tilfredsstillende vekst (gule kolonier, gjennomsiktig kant).

-Vibrio parahaemolyticus - tilfredsstillende vekst (koloni med grønt senter og gjennomskinnelig kant).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - tilfredsstillende vekst (gule kolonier med glorie av samme farge rundt kolonien).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - Total eller delvis hemming (små gule eller gjennomskinnelige kolonier).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- Delvis eller total hemming (blå kolonier).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Helt hemmet.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Total eller delvis hemming. (Små kolonier grønn kant gjennomsiktig kant).

Inkubasjon av et medium uten inokulering skal ikke ha en endring.

Referanser

1. BD Laboratory. Bd. TCBS agar. Tilgjengelig på: BD.com
2. Britania Laboratories. Medium TCBS. Tilgjengelig på: Britanialab.com