Tioglicolate buljong foundation, forberedelse og bruk

Han Tioglycolate buljong Det er et beriket middel for væskekonsistens. Det er kjent med forkortelsen FTM). Det ble opprettet av Brewer og modifisert i 1944 av Vera, som innlemmet ham Peptone of Casein.

Dette mediet har et lavt oksidasjonspotensial -reduksjon, så det anbefales ikke for utvikling av strenge aerobe bakterier, men det er ideelt for å utvinne valgfrie aerobe bakterier, strenge og mikroaerofile anaerobe bakterier.

Tioglykolat buljong uten indikator. Prøve vaginal sekresjon. Kilde: Bobjgalindo [CC BY-SA 4.0 (https: // creativecommons.Org/lisenser/by-SA/4.0)]

Den høye ytelsen som ble observert med dette mediet i isolasjon og utvinning av et bredt utvalg av mikroorganismer, har gjort det akseptert av USAs farmakopé (USP), av den offisielle Association of Agricultural Chemists (AOAC) og av European Pharmacopoeia (EP).

Disse organisasjonene anbefaler det for sterilitetskontrolltester av farmasøytiske produkter og for berikelse av forskjellige typer prøver.

Tioglykolatet cado er sammensatt av gjærekstrakt, digreatisk kasein, vannfritt dekstrose, L-c-Cisine, natriumklorid, natrium tioglykolat, hvile og topp i en liten mengde i en liten mengde.

Det er flere versjoner av dette mediet, blant dem er: tioglycolate buljong med indikator, tioglykolat buljong uten indikator, tioglykolat buljong med rikholdig indikator med hemine og vitamin K_1, Og tioglikolat buljong med kalsisk karbonat.

Det skal bemerkes at varianten av tioglycate buljong beriket med hemine og vitamin K tjener til å forbedre veksten av krevende strenge anaerober, og varianten av tioglykolatbuljong som inneholder kalsiumkarbonat er nyttig for å motvirke syrene som produseres under mikrobiell vekst.

[TOC]

Basis

Tioglycolate buljong regnes som en berikelse, ikke selektiv siden den tillater utvikling av de fleste ikke -følgende bakterier. Ernæringskrav er gitt av gjærekstrakt, fordøyd bukspyttkjertel og glukose.

På den annen side inneholder dette mediet til tross for at det er en buljong en liten mengde agar; Dette forårsaker et lavt oksidreduksjonspotensial, fordi oksygeninngangsbremser, slik at oksygen synker når det utdypes inne i røret.

Det er grunnen til at dette mediet er ideelt for utvikling av valgfrie aerobe bakterier, mikroaerofiler og strenge anaerob, disse siste 2 uten å inkubere under disse forholdene. Det samme mediet regulerer mengden oksygen i miljøet, er fraværende i bunnen av røret og i tilstrekkelig mengde på overflaten.

Kan tjene deg: fenylalanin: egenskaper, funksjoner, biosyntese, mat

På samme måte fungerer tioglykolat og L-cisine som reduserende midler, og bidrar til forebygging av akkumulering av stoffer som er skadelig for bakteriell utvikling, for eksempel peroksyd. I tillegg inneholder disse forbindelsene sulfidrils (-sh-) grupper, og nøytraliserer de hemmende effektene av kvikksørierende derivater, arsenisk, blant andre tungmetaller.

På den annen side er rastløshet en oksyd -reduksjonsindikator. Dette stoffet er fargeløst når det reduseres og rosa når det oksideres. Det er variantene av tioglikolat buljong med indikator og uten indikator. Bruken vil avhenge av typen prøve og laboratoriepreferanse.

I mellomtiden opprettholder natriumklorid den osmotiske balansen av tioglykatbuljongen og bruken av anhydra glukose forhindrer overflødig fuktighet i det dehydrerte miljøet.

Forberedelse

Tioglykolat buljong med indikator

Vei 29,75 gr av det dehydrerte mediet og oppløs i 1 liter destillert vann. Blandingen er igjen på omtrent 5 minutter. Ta med en varmekilde og rør ofte til den oppløses helt.

Hell mediet i testrør og autoklavat ved 121 ° C i 15 minutter. La avkjøle før bruk. Kontroller innsatsen til det kommersielle huset for bevaring. Noen anbefaler å spare ved romtemperatur på mørkt sted, og andre i kjøleskap beskyttet mot lys.

Den forberedte medium pH er 7,1 ± 0,2.

Fargen på det dehydrerte mediet er lett og tilberedt beige er en klar rav med litt opalescence.

Tioglycolate buljong med hemin og vitamin K -indikator₁

Det er kommersielle medier som allerede bringer hemina og vitamin K₁, Spesiell for anaerob dyrking.

Hvis du ikke har et beriket medium for anaerober, kan den grunnleggende tioglykolatbuljongen tilberedes. For å gjøre dette tilsettes 10 mg heminehydroklorid og 1 mg vitamin K₁ For hver liter medium. Imidlertid, hvis blod eller serum tilsettes tioglykolatbuljongen, er tilsetning av hemine, vitamin K ikke nødvendig.

Kan tjene deg: Intra -spesifikk konkurranse: Kjennetegn, typer og eksempler

Tioglycolat buljong med kalsiumkarbonat

Kommer kommersielt og forbereder seg etter instruksjonene fra innsatsen.

Tioglykolat buljong uten indikator

Dette har den samme sammensetningen av det grunnleggende tioglykatet, men inneholder ikke resazurin.

Vei 30 gr dehydrert medium og oppløs i en liter destillert vann. Resten av preparatet er lik den som er beskrevet i Tioglycate -buljongen med indikator.

Bruk

Tioglycolate buljong er nyttig for berikelse av kliniske prøver, spesielt for de fra sterile steder. Det er også nyttig for ikke -kliniske prøver, for eksempel kosmetikk, medisiner, etc.

For inokulering av væskeprøver (for eksempel CSF, synovialvæske, blant andre), er prøvene først sentrifugering og deretter blir 2 dråper av sedimentet tatt og plassert i tioglykolatbuljongen. Inkuber ved 35 ° C i 24 timer. Hvis det på dette tidspunktet ikke er noen vekst (turbiditet), blir det inkubert opp til maksimalt 7 dager.

Hvis prøven tas med hiopus, blir kulturmediene først inokulert i plater, og til slutt blir vattpinnen introdusert i buljongen, delen som skiller seg ut og røret er dekket, og etterlater vattpinnen inne. Incuba ved 35 ° C i 24 timer, maksimalt 7 dager.

For faste prøver må den homogeniseres i fysiologisk saltvann (SSF) -løsning og deretter inokulere tioglykolatbuljongen med 2 dråper av suspensjonen.

Noen ganger kan det brukes som et transportmiddel for prøver der tilstedeværelsen av strenge anaerober eller som en sikkerhetskopiering av berikelsesbuljong er mistenkt.

Tioglycolate buljongvarianten med kalsiumkarbonat brukes til å opprettholde kontroller i lengre tid, fordi den har evnen til å nøytralisere syrene produsert ved bruk av glukose; Disse syrene er giftige for visse bakterier.

Vekst i tioglykolatbuljongen vil bli observert på grunn av miljøet i miljøet. Det anbefales å utføre en Gram -farging og deretter subjektivt i ikke -selektive og selektive medier, avhengig av type prøve og mikroorganismer som de er mistenkt.

QA

For sterilitetskontroll anbefales det å inkubere en eller to buljonger uten inokulering. Det forventede resultatet er en gjennomsiktig buljong, uten fargeendring, selv om det er normalt at en svak rosa farge blir observert på røroverflaten.

Det kan tjene deg: Marine Meadow: Hva er, egenskaper, flora, fauna

For kvalitetskontroll, mellom 10 - 100 UFC av sertifiserte kontroller, for eksempel som Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium sporogenes ATCC 11437, Vulgatus bakteroider ATCC 8482.

Inkuber ved 30-35 ° C i aerobiose i 24 timer opp til maksimalt 3 dager, siden disse mikroorganismene er rask vekst.

I alle tilfeller forventes god utvikling, med unntak av Micrococcus luteus og Bacillus subtilis, Der det kan være moderat utvikling.

For kvalitetskontrollen av tioglykolatbuljongen beriket med hemina og vitamin K₁, Kontrollstammer kan brukes Vulgatus bakteroider  ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 og Fragilis bakteroider ATCC 25285. Det forventede resultatet er tilfredsstillende vekst.

Anbefalinger

-Noen ganger kan det sees at overflaten til tioglykatbuljongen med indikator blir rosa; Dette skyldes oksidasjon av miljøet. Hvis den rosa fargen dekker 30% eller mer av den totale buljongen kan varmes opp i et vannbad i 5 minutter, avkjøling igjen og brukes.

Dette vil eliminere absorbert oksygen, og returnere mediet til sin opprinnelige farge. Denne prosedyren kan bare gjøres en gang.

-For å forbedre veksten av aerobe bakterier, må den inkuberes med det litt late lokket. Imidlertid er det å foretrekke å bruke for dette formålet en infusjonsbuljong hjernehjerte eller triptisk soyabuljon for god utvikling av strenge aerober.

-Frysing av miljøet eller overoppheting bør unngås, siden begge forhold skader mediet.

-Direkte lys skader kulturmediet, det må beskyttes mot lys.

Referanser

1. Britania Laboratories. USP Tioglycolate med indikator. 2015. Tilgjengelig på: Labbritania.com.
2. Quos SAS Laboratories. 2019. Tioglycolate buljong. Tilgjengelig på: Quios.com.co
3. BD Laboratories Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003. Tilgjengelig på: BD.com/Europa
4. BBL media fremstilt i rør for dyrking av anaerobe mikroorganismer. Tioglycate Media. 2013. Tilgjengelig på: BD.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 Ed. Pan -American redaksjon S.TIL. Argentina.