Voges-proskauer Test Hva er, grunnlag, forberedelse, bruker

Han Voges-proskauer-test Det er en biokjemisk test som brukes til å hjelpe til med å identifisere bakterier som tilhører enterobacteriaceae -familien. Spesielt er nyttig å skille belastninger fra Escherichia coli av Klebsiella og Enterobacter, blant andre.

Testen utføres i flytende kulturmedium kalt rød metyl-voges proskauer, bedre kjent med forkortelsen RM/VP. Dette mediet består av buffret polypepton, glukose, dipotassiumfosfat og destillert vann.

Red Metil of Metilo-Voges Proskauer (RM/ VP)/ Positiv og negativ VP-test. Kilde: Foto tatt av MSc -forfatteren. Marielsa Gil/ Sudipta.Nov15 [CC BY-SA 3.0 (https: // creativecommons.Org/lisenser/by-SA/3.0)], fra Wikimedia Commons

Det nåværende RM/VP -mediet er en modifisering av Clark og LUBS -mediet, som opprinnelig inneholdt mindre konsentrasjon av peptoner og glukose. Derfor var det mindre mengde hydrogenion, nødvendig for den positive reaksjonen av Voges-proskauer.

Testen er basert på kapasiteten til mikroorganismen ved bruk av glukose ved butylén-glykolsruten, og danner et nøytralt sluttprodukt kalt Acetoine, i nærvær av oksygen og en alkalisk pH.

I RM/VP-mediet, i tillegg til å kunne avsløre Voges-Proskauer-testen, kan du også avsløre den metilianske røde testen.

Basis

Grunnlaget for Voges-proskauer-testen

Pluipeptoner som er til stede i midten gir de uunnværlige ernæringskravene for bakterievekst. For sin del er glukose hovedforbindelsen. Mange bakterier har evnen til å metabolisere glukose og danne pyruvinsyre.

Pyruvinsyre er et midtpunkt i glukosemetabolisme, og derfra kan hver mikroorganisme ta forskjellige veier. Noen vil danne blandede syrer, for eksempel melkesyre, eddiksyre, maursyre og ravsyre, og andre vil danne nøytrale produkter som 2,3-butnediol.

Det kan tjene deg: Flora og Fauna fra Mexico City

Voges-proskauer-testen avslører kapasiteten til mikroorganismen til å danne acetylmetylkarbinol (acetoine), et mellomliggende produkt av 2,3-butnediol under aerobioseforhold.

Acetoine er redusert og 2,3-butnediolform, men denne reaksjonen er reversibel, derfor hvis 2,3-butnediol er oksidert. Derfor er oksygen uunnværlig.

Dipotassiumfosfat er bufferen som demper blandingen til en pH 6,9 ± 0,2.

Grunnlaget for utvikling av bevis og tolkning

For å vise reaksjonen, må en åpenbaring utføres ved hjelp av to reagenser (Barrit Reagents), kjent som Voges A og Voges B.

Voges A er en 5% α-Naftol-løsning, og Voges B er en 40% kaliumhydroksydforberedelse. Hvis kaliumhydroksyd ikke er tilgjengelig, kan det erstattes av 40% natriumhydroksyd.

Α-naftol er en katalysator som vil øke intensiteten på reaksjonens farge, noe som gjør den mest følsomme testen. Α-Naftol må alltid tilsettes først, omrøring av røret slik at mediet kommer inn i kontakt med oksygen. På denne måten oksideres det nåværende acetoinet til diacetyl, og 2,3-butnediol oksyderes for å danne acetoin, og fører den til diacetyl.

Slik vil α-Naftol bli med i diacetylen, som igjen har sluttet seg til guanidinkjernen som er til stede i argininaminosyren, sistnevnte fra flerpartisene.

For sin del er kalium eller natriumhydroksid ansvarlig for å absorbere CO₂ Og å reagere med peptonene. Denne reaksjonen stammer fra dannelsen av en rosa-salmonfarge, tydelig synlig etter å ha røre røret veldig godt.

Kan tjene deg: organisasjonsnivå: Kjennetegn og eksempler

For at fargen skal oppstå øyeblikkelig, må riktige mengder diacetyl, pepton og α-Naftol blandes. Hvis dette ikke skjer, får røret lov til å hvile i 15 minutter før tolker.

Testen er generelt positiv etter 2 til 5 minutter, når du kan se en svak rosa farge. Hvis igjen i ro i 30 minutter på 1 time, vil fargenes intensitet være maksimal (intens rød).

En negativ test vil bli bevist når buljongen er gul. Etter 1 time, hvis testen er negativ, kan det dannes et coppery-fargeprodukt av reaksjonen av kaliumhydroksyd på a-naftol.

Forberedelse

Midt RM/VP

Vei 17 gr dehydrert kultur og oppløs i en liter destillert vann. La stå i 5 minutter. Varm opp til å koke for å løse opp helt. Server 3 til 4 ml i rør og steriliser i autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Det dehydrerte kulturmediet er beige og det forberedte mediet er lett rav.

Den endelige pH i mediet er 6,9 ± 0,2.

Voges reagens a

Vei 5 gr α-naftol og oppløs i 50 ml etylalkohol (absolutt). Deretter tilsetter det å tilsette etylalkohol til og med 100 ml.

Voges -reagens b

Vei 40 gr kaliumhydroksyd og oppløs i 50 ml destillert vann i et begerglass. Glasset må plasseres i et kaldt vannbad for å kontrollere temperaturen, for på tidspunktet for oppløsningen av preparatet stiger det temperaturen kraftig.

Etter at løsningen er kald, overføres den til en hakket ball og flush med 100 ml med destillert vann.

Det kan tjene deg: blodagar

Voges-proskauer testprosedyre

For å utføre Voges-proskauer-testen, inokuleres en RM/VP-buljong med mikroorganismen som studeres, fra en ren avling fra 18 til 24 timer.

Inokulum skal ikke være veldig tett. 35-37 ° C er inkuba i 24 til 48 timer, selv om inkubasjon i flere dager noen ganger er nødvendig. Cowan og stål mener at 5 dager er den minste inkubasjonstiden som er nødvendig for å oppdage alle Voges-proskauer (VP) positive arter av enterobacteriae-familien.

Test avslørt

Skill en alikvot på 1 ml i et rør og gjør utviklingen som følger: Plasser 12 dråper (0,6 ml) av Voges A og 4 dråper (0,2 ml) Voges B. Bland til luft og la stå 5 - 10 minutter før du tolker. Imidlertid, hvis testen fremdeles er negativ, la stå og observere røret etter 30 minutter til 1 time.

Utseendet til en rosa-rød farge indikerer at Voges-proskauer-reaksjonen er positiv. Hvis mediet forblir gul, er reaksjonen negativ.

Tilsetningen av det avslørende i rekkefølgen og indikert mengde er avgjørende for å unngå falske negativer.

Bruk

Voges-proskauer-test er nyttig for å skille mellom stammer fra OG. coli som er negativ VP, av Klebsiella -sjangrene, Enterobacter, Serratia, blant andre, som er positive VP.

Kilde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Pan -American redaksjon S.TIL. Argentina.

QA

For å teste kvaliteten på det forberedte mediet kan du bruke kontrollkontroller, inkludert Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium og Enterobacter kloakk ATCC 13047.

De forventede resultatene er positive Voges-proskauer-reaksjoner bare for K. pneumoniae og OG. Cloacae. Resten gir negative reaksjoner.

Referanser

1. Britania Laboratories. MR-VP-gjennomsnitt. Tilgjengelig på: www.Britanialab.com