Giemsa -farging

Giemsas farging er en vanlig metode for å undersøke forskjellige vev og blodprøver

Hva er Giemsas farging?

De Giemsa -farging Det er en type kliniske prøver (vev, blod), basert på blandingen av syre og basiske fargestoffer. Det skapte Gustav Giemsa, tysk kjemiker og bakteriolog, som perfeksjonerte Romanowskys arbeid ved å legge glyserol for å stabilisere forbindelsene.

Endringene som ble generert til den opprinnelige Romanowsky -teknikken som ble tillatt å forbedre mikroskopiske observasjoner betydelig, derfor ble teknikken døpt med navnet GIEMSA -farging.

Å være en enkel teknikk å utføre, av stor funksjonbarhet og økonomisk, er det for tiden mye brukt i det kliniske laboratoriet for hematologisk lukt, benmargsprøver og vevskutt.

GIEMSAs fargingsteknikk er veldig nyttig for cytologiske studier, siden den tillater observasjon av spesifikke cellestrukturer. Denne teknikken flekker cytoplasmer, kjerner, kjerner, vakuoler og cellegranulater, til og med skiller fine kromatinspor.

I tillegg kan signifikante endringer i størrelsen, formen eller fargen på kjernen oppdages, hvor den er mulig.

Grunnlaget for Giemsas farging

Romanowsky -fargestoffer har som grunnmennskontrast mellom syre og grunnleggende fargestoffer, for å drepe basiske og sure strukturer, henholdsvis. Som det kan sees, er det en tilhørighet til de sure fargestoffene med å fargelegge de grunnleggende strukturer og omvendt.

Det grunnleggende fargestoffet som brukes er metylenblått og dets rustne derivater (Azure A og Azure B), mens det sure fargestoffet er eosin.

De sure strukturene i cellene er nukleinsyrer, granulatene i den basofile segmenterte, blant andre. Derfor vil de bli farget med metylenblå.

I samme forstand er de grunnleggende strukturene til cellene hemoglobin og noen granuler, for eksempel innholdet i de segmenterte eosinofiler, blant andre. Disse vil bli farget med Eosina.

På den annen side, fordi metylen og azurblått er preget av å være metakromatiske fargestoffer, kan de gi en variabel tone til de forskjellige strukturer, i henhold til belastningen av polyianioner de har.

Slik klarer den strategiske kombinasjonen av grunnleggende og sure fargestoffer å utvikle et bredt spekter av farger, i henhold til de biokjemiske egenskapene til hver struktur, gå gjennom blekblå, mørkeblå, syrin og lilla blå nyanser, når det gjelder sure syrestrukturer.

Farge som leveres av Eosina er mer stabil, og genererer farger mellom rødlig, oransje og laks.

Materialer

Forberedelse av morsløsningen

Forberedelsen av morsoppløsningen krever veiing 600 mg Giemsa -støv, måler 500 cmc aceton -fri metilolisk alkohol og 50 cm km nøytralt glyserin.

Forberedelsesmodus

Plasser det tunge Giessa -støvet på en morter. Hvis det er klumper, må de pulveriseres. Deretter legger du til en betydelig mengde av det målte glyserinet og bland veldig godt. Den oppnådde blandingen helles i en veldig ren ravflaske.

Resten av glyserin er plassert i mørtelen. Bland igjen for å rengjøre resten av fargestoffet som har sittet fast på mørtelveggene og kast den samme flasken.

Kan tjene deg: Conidia

Flasken er dekket og tar i 2 timer i et vannbad ved 55 ° C. Så lenge.

Deretter får blandingen avkjøles for å plassere alkoholen. Tidligere plasseres en del av den målte alkoholen i mørtelen for å avslutte det som er fargelegging og tilsettes deretter til blandingen, ved siden av resten av alkoholen.

Denne forberedelsen skal få lov til å modnes i minst 2 uker. Den delen som brukes fra morsløsningen må filtreres.

For å unngå forurensning av preparatet, anbefales det å passere den delen som hele tiden vil bli brukt til en liten ravflaske med drypper. Reracharge hver gang reagenset er utmattet.

Bufferløsningsforberedelse

På den annen side blir en 7,2 pH -bufferløsning utarbeidet som følger:

6.77 GR av natriumfosfat (vannfri) (Nahpo veies₄), 2,59 gr kaliumdihydrogenfosfat (KH₂Po₄) og destillert vann opp til 1.000 cc.

Endelig fargelegging

For fremstilling av den endelige fargeløsningen måles 2 cc av den filtrerte morsoppløsningen og blandes med 6 cc av bufferløsningen. Blandingen omrøres.

Et relevant faktum som må tas med i betraktningen er at fargestoffforberedelsesteknikker kan endres i henhold til kommersielt hus.

Ytterligere materialer som trengs for å utføre farge

Bortsett fra de beskrevne materialene, fargebroer, trinn med vann eller buffer for vasking, skyve skiver eller deksel, stoppeklokke, et stoppeklokke for å kontrollere fargetidene og tørkepapir eller noe materiale som serverer å tørke (gasbind eller bomull (gasbind eller bomull).

Teknikk

Fargingsprosess

1. Før fargelegging skal den utvidede prøven på et rent lysbilde være klar.

Prøver kan være blod, benmarg, histologiske vev eller cervikal-vaginale prøver. Det anbefales at de utvidede har det bra og har 1 eller 2 timers tørking før du fargelegger dem.

2. På en fargebro er plassert alle arkene som skal fargelegge. Det fungerer alltid i samme rekkefølge, og hvert ark identifiseres godt.

3. Plasser noen dråper 100% (metanol) metallalkohol på lukten og la være i 3 til 5 minutter, for å fikse og dehydrere prøven.

4. Kast metanolen som er til stede i arket og la tørke i luften.

5. Når den er tørr, legg den endelige fargeløsningen med en dropper til den dekker hele arket. La loven være i 15 minutter. Noen forfattere anbefaler opptil 25 minutter. Det avhenger av det kommersielle huset.

6. Tøm fargestoffet og vask gni med destillert vann eller med en 7,2 bufferløsning.

7. La utendørs arkene tørke på et tørkende papir.

Kan tjene deg: Renina: Struktur, produksjon, sekresjon, funksjoner

8. Rengjør baksiden av lysbildet med gasbind eller bomull fuktet i alkohol for å eliminere alle resten av fargestoffet.

Bruker/applikasjoner av Giemsas farging

GIEMSAs fargingsteknikk brukes på forskjellige områder: innen hematologi, mykologi, bakteriologi, parasitologi, cytologi og cytogenetikk.

Hematologi

Det er den hyppigste bruken som gis til denne fargingen. Med det identifiseres hver og en av cellene som er til stede i benmargsprøver eller perifert blod. I tillegg til å beregne antallet av hver serie, å kunne oppdage leukocytose eller leukopeni, trombocytopeni, etc.

Fordi det er følsomt å identifisere umodne celler, er det relevant i diagnosen akutt eller kronisk leukemi. Det er også mulig å stille diagnosen anemier, for eksempel Drepanocytic, Falciform Anemia, blant andre.

Mykologi

På dette området er bruken vanlig for søket etter Histoplasma capsulatum (Intracellulær dimorf sopp) i vevsprøver.

Bakteriologi

I hematologisk smør farget med Giemsa er det mulig å oppdage Borrelias sp Hos pasienter som studerer sykdommen som kalles tilbakevendende feber. Spiroquettes observeres rikelig blant erytrocytter, i prøver tatt i den feberlige toppen.

Det er også mulig å visualisere intracellulære bakterier som Rickettsias sp og Chlamydia trachomatis I infiserte celler.

parasitologi

Innen parasitologi har Giemsas farging tillatt diagnose av parasittiske sykdommer, som malaria, Chagas Evil og Leishmaniasis.

I de to første, parasittene Plasmodium sp og Cruzi Tripaosoma, henholdsvis kan de visualiseres i perifert blod hos infiserte pasienter. De kan finnes i forskjellige stadier i henhold til fasen som sykdommen er i.

For å forbedre søket etter blodparasitter, anbefales det.

På samme.

Cytologi

Farging av Giemsa brukes også til den cytologiske studien av endocervikale prøver, selv om det ikke er teknikken som oftest brukes til dette formålet.

Men i tilfeller av ressursknapphet kan den brukes, og ha en funksjonbarhet som den som tilbys av Pap Lake og en lavere kostnad. Imidlertid krever det ekspertise fra undersøkelsen.

Cytogenetikk

Et relevant kjennetegn ved Giemsas farging er dens evne til sterkt å bli med i regionene rike på adeniner og timinas av DNA. Dette gjør at DNA kan visualiseres under cellemyitose, i forskjellige kondensasjonstilstander.

Disse studiene er nødvendige for å oppdage kromatiske avvik, for eksempel duplikasjoner, slettinger eller translokasjoner av de forskjellige regionene i kromosomer.

Giemsa -farging. Kilde: Panreac AppliChem ITW -reagenser. Versjon 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Spania.

Anbefalinger for god farging

- Tørking av laken skal ikke akselereres. Prudential -tiden for tørking av det må forventes utendørs. Omtrent 2 timer.

Kan tjene deg: Timina

- Fargelegging umiddelbart etter 2 timer for bedre resultater.

- For at luktene skal fikses og farges bedre, må prøven distribueres på arket slik at det er et tynt og ensartet lag.

- Den foretrukne blodprøven er kapillæren, siden smøret.

- Hvis venøst ​​blod brukes, bør EDTA brukes som antikoagulant og ikke heparin, siden sistnevnte vanligvis deformerer cellene.

Vanlige feil i fargen på Giemsa

I utøvelsen av denne fargen kan du gjøre feil. De bevises av plutselige endringer i strukturene i strukturene.

Ekstremt blå farge

Det kan skyldes:

- Veldig tykk smør.

- Overskride fargetid.

- Utilstrekkelig vask.

- Bruk av reagenser godt over den nøytrale pH (alkalisk).

Under disse forholdene blir fargene på følgende strukturer forvrengt, på en slik måte at erytrocytter, i stedet for å fargelegge rosesalt, n vil være grønne, vil granulatene til eosinofilene som må farges i rød murstein bli blålige eller grå eller grått, og så videre vil det være avvik i de vanlige nyanser.

Altfor rosa farge

Det kan skyldes:

- Utilstrekkelig fargetid.

- Langvarig eller overdreven vask.

- Dårlig tørking.

- Bruk av veldig sure reagenser.

I dette tilfellet vil strukturene som normalt er farget i blått ikke være nesten synlige, mens strukturene som er farget som rose vil ha veldig overdrevne toner.

Eksempel: Erytrocytter vil ta en sterk lys eller oransje rød farge, atomkromatin vil se blekrosa ut og de eosinofile granulatene vil bli farget fra knallrødt lyse lyse.

Tilstedeværelse av utfellinger i smøret

Årsakene kan være:

- Bruk skitne eller dårlige skiver.

- Ikke la smøret tørke.

- La fikseoppløsningen være for lenge.

- Utilstrekkelig vasking på slutten av farging.

- Utilstrekkelig filtrering eller ikke -filtrering av fargestoffet som brukes.

Tilstedeværelse av morfologiske gjenstander

I utstrykningene kan morfologiske gjenstander se ut som å hindre visualisering og tolkning av strukturene som er til stede. Dette er på grunn av:

- Type antikoagulant brukt, for eksempel heparin.

- Bruk av skitne, forverrede eller fete ark.

Lagringsmodus

Etter forberedt må fargestoffet opprettholdes ved romtemperatur (15-25 ° C) for å forhindre at fargestoffet utfeller. Den må lagres i en godt lukket rav beholder.

Referanser

1. Cannova, d., Brito, e. Og Simons, m. (2016). Evaluering av fargeleggsteknikker for diagnose av kutan leishmaniasis. Salus. 
2. PanReac AppliChem Itw Reagnts. Giemsa -farging. Versjon 2: JMBJUL17 CEIVD10ES. Castellar del Vallés, Spania.
3. Clark, g. Fargingsprosedyrer (1981). Williams & Willkins.