Tincion of Capsula Foundation og teknikker

De Kapselfarging Det er en differensiell fargeleggingsteknikk som eier egenskapen til å fremheve polysakkaridstrukturen som omgir visse bakterier og gjær som kalles kapsel. Det brukes i kliniske laboratorier for å hjelpe diagnosen visse patologier forårsaket av kapsulerte mikroorganismer.

Det brukes også i å undervise i laboratorier for demonstrasjon av denne morfologiske strukturen til studenter av helsevitenskapelige karrierer, for eksempel: medisin, bioanalyse, sykepleie eller cytoteknologi, blant andre.

Klebsiella pneumoniae smør farget med kapselfarging. Indisk blekkmetode med Safranine. Kilde: а.А.В [Public Domain]

Det er flere enkle teknikker for å demonstrere tilstedeværelsen av kapselen i mikroorganismene som har det, dette er: den negative fargingen, fargingen av Anthony og en variant som kombinerer de to foregående.

Negativ farging brukes hovedsakelig i CSF -prøver når tilstedeværelsen av gjær er mistenkt Cryptococcus neoformans. Denne gjæren er en hyppig årsak til hjernehinnebetennelse.

Denne teknikken bruker nigrosin eller kinesisk blekk og er basert på å skape en kontrast mellom preparatbunnen og den ugjennomtrengelige kapselen til mikroorganismen. Bakgrunnen er farget mørk og kapselen er fargeløs. På denne måten blir denne strukturen fremhevet.

Når det gjelder Anthony -teknikken, kan det sies at den mest brukes i undervisningslaboratorier for å demonstrere polysakkaridstrukturen i bakterier som som som Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae og Neisseria meningitidis.

Bruken av denne teknikken for diagnostiske formål er veldig sjelden, siden det er andre rutinemessige tester som lar disse mikroorganismer identifiseres.

[TOC]

Basis

Kapselen er en sterk struktur av en polysakkarid natur. Dette beskytter fagocytosemikroorganismer, og er derfor en vanskelig struktur å trenge gjennom.

Det er grunnen til at kapsler flekker er basert på kontrast. Fargestoffene flekker bunnen av preparatet mens kapselen er fargeløs.

Derfor, med disse teknikkene er kapselen lett gjenkjennelig. Hvis mikroorganismen ikke har en kapsel, vil den ikke kunne skilles med denne typen farger, fordi alt vil bli farget fra samme farge.

Det kan tjene deg: homologe og analoge strukturer (med eksempler)

Alle teknikkene som brukes til å fargelegge kapselen har samme grunnlag, selv om de bruker forskjellige farger og prosedyrer.

Teknikker partil farging av kapselen

-Anthony -farging

Anthony's farging bruker det fiolette glasset som fargestoff. Dette vil farge bakteriekroppen og fiolett fargebakgrunn.

På den annen side brukes 20% kobbersulfat. Dette fungerer som en vaskeløsning, det vil si at den fjerner det overflødige fiolette glasset til preparatet, noe som får kapslene til å avklare, men uten bakteriekroppen eller bakgrunnen som mister fargen.

Materialer

- Shortasolate melk.

- Bærbar lamina.

- 1% fiolett glass.

- 20% kobbersulfat.

- Optisk mikroskop.

- Fordypningsolje.

Fremgangsmåte

Denne teknikken består av:

1. Dyrk mikroorganismen i linjerelk i 36 timer.
2. Plasser en dråpe av avlingen i enden av et objektholderark og ved siden av å plassere en dråpe fiolett glass, bland og strekker deg med enden av et annet lysbilde.
3. Utendørs og ikke fikse varmen.
4. Vask med 20%kobbersulfatoppløsning, slipp ut utendørs.
5. Observer mikroskopet med fordypningsmål. Søk mot ytterpunktene av de utvidede.

Det er viktig å ikke bruke varme eller fikse, eller tørke, siden dette skader kapselen. Vask heller ikke med vann.

Tolkning

Forkortet melk er et utmerket kulturmedium siden det gir nødvendige næringsstoffer for mikroorganismen for å utvikle en fremtredende kapsel.

På den annen side vil litmolent melk danne en tykk og kompakt bakgrunn som vil bli farget fiolett sammen med bakteriekroppen, men kapselen som omgir mikroorganismen er fargeløs. Derfor observeres en klar glorie rundt bakteriekroppen.

Kan tjene deg: faktorer som påvirker enzymatisk aktivitet Grafisk representasjon på den mikroskopiske observasjonen av en smøre av Klebsiella pneumoniae farget med farging av Anthony. Kilde: Laget av forfatter MSc. Marielsa Gil.

Fordeler

Det er en enkel teknikk å utføre. Det krever ikke fiksering.

På samme måte skal det bemerkes at andre kulturmedier kan brukes, men mediet med melk foretrekkes fordi det har fordelen at det gir mer fremtredende kapsler.

Ulemper

Det er litt mer arbeidskrevende teknikk enn negativ farging, og for visualisering krever det å vente på at forberedelsene skal tørke.

-Negativ farging

Materialer

- Skyv ark.

- Kulturmedium med mikroorganisme.

- Kinesisk eller nigrosinblekk.

- Optisk mikroskop.

- Fysiologisk saltvann.

Fremgangsmåte

Plasser en dråpe fysiologisk saltvann på dekslene og oppløst en liten del av den mikrobielle avlingen. Det er viktig at preparatet ikke er veldig tykk. Plasser deretter en dråpe kinesisk eller nigrosinblekk og bland.

Deretter plasseres et dekkark på preparatet uten å overskride væsken. Det observeres ved mikroskopet med fokus først på 10x mål og passerer deretter til 40x.

Denne teknikken kan også brukes direkte på CSF -prøver. Det vil si i stedet for å plassere en dråpe mikrobiell kultur, plasseres en dråpe.

Fordeler

Det er en enkel metode for å utføre og samtidig økonomisk. Det krever ikke fiksering, eller tørking av forberedelsene.

Ulemper

Det har som en ulempe at det bør observeres ved mikroskopet før forberedelsen tørker, fordi hvis dette skjer, vil mikroorganismene trekke seg sammen, noe som vil gjøre visualiseringen vanskelig.

På den annen side kan falske positiver oppstå hvis analytikeren er uerfaren, da leukocytter vanligvis forveksler gjær.

Observasjonen av gjær med kapsel med den kinesiske eller nigrosin -teknikken bør betraktes som en presumptiv diagnose av Cryptococcus neoformans Inntil det demonstreres med dyrking.

Dette er fordi det er andre gjær som kan være årsaken til hjernehinnebetennelse og ikke bare Cryptococcus neoformans, slik som slekten Candida og Rhodotorula, så vel som andre arter av Cryptococcus.

Kan tjene deg: acetylkoenzym til

Tolkning

Hvis det er kapsulerende mikroorganismer, vil en mørk bakgrunn bli observert, med gjennomsiktige kropper som flyter i væsken, og fremhever tilstedeværelsen av kapselen.

Cryptococcus kapsel neoformans farget med kinesisk blekk. Kilde: Fotokreditt: Innholdsleverandører (er): CDC/DR. Leanor Haley [Public Domain]

-Indisk blekkteknikk

Denne teknikken kan også gjøres med nigrosin. Det er en kombinasjon av teknikkene som tidligere er forklart. Denne teknikken bruker fiolett krystall og India eller nigrosinblekk.

Bakteriekroppen tar den lilla fargen på det fiolette glasset fordi den er negativt lastet, mens nigrosinfargen bunnen av smøret. Hvis bakterien har en kapsel, vil den bli sett på som en gjennomsiktig glorie rundt mikroorganismen.

Fiolett krystall kan erstattes av noen av disse fargene: Safranine, Basic Fuchsin eller Methylen Blue.

Materialer

- Fiolett glass.

- Nigrosin eller indisk blekk.

- Skyv ark.

- Mikroskop.

Fremgangsmåte

- Dyrke mikroorganismen i et kulturmedium.

- Plasser en dråpe av avlingen i enden av et lysbildeark og ved siden av legg en dråpe indisk eller nigrosinblekk, bland og strekker deg med enden av et annet lysbilde.

- Lufttørk og ikke fikse varmen.

- Dekk med en fiolett glassløsning per 1 minutt, vask med destillert vann, men veldig delikat (myk jet), slipp ut utendørs.

- Observer mikroskopet med fordypningsmål. Søk mot ytterpunktene av de utvidede.

Tolkning

En fiolett bakteriell kropp og en mørk bakgrunn vil bli observert. Kapselen, hvis den er til stede, vil være fargeløs rundt bakteriene.

Referanser

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Grunnleggende mikrobiologiteknikker. Bakterierobservasjon. Reduser (biologi). Mikrobiologiserie. 2010; 3 (5): 15-38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Grunnleggende farging i mikrobiologilaboratoriet. MediaGraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Tilgjengelig på: Medigrafisk.com
3. Gil m. Negativ farging: grunnlag, teknikk, fordeler og ulemper. Livede.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 Ed. Argentina. Pan -American redaksjon S.TIL
5. Tankeshwar a. Kapselflekk: Prinsipp, prosedyre og resultater. 2019. Medisinsk mikrobiologi guide. Tilgjengelig i: MicrobeOnline.com